肺腺癌患者与健康人体外培养DC细胞的比较

目的:比较肺腺癌患者和健康人DC细胞形态学、增殖力及肿瘤抗原致敏后表型的差异。方法:采集患者和健康人外周血单个核细胞(PBMNC),诱导培养DC细胞;一定时间后观察DC细胞形态学变化,细胞计数仪检测DC的增殖力,提取原代培养的肺腺癌细胞抗原致敏DC,36h后流式细胞仪检测DC的表型变化。结果:两组DC细胞培养至第6天时,形态学无明显差异,而肿瘤患者细胞增殖速度比健康人缓慢。在肿瘤抗原修饰后36h,肺腺癌患者DC细胞的CD83、CD86、HLA-DR表达均比健康人降低。结论:体外培养的两组DC细胞形态学无明显差异,但肿瘤患者DC的增殖力及肿瘤抗原修饰后DC细胞表型的表达率均明显低于健康人。

MN9D多巴胺能细胞损伤模型的建立

目的建立离体多巴胺(dopamin,DA)能神经细胞系MN9D细胞损伤模型。方法离体细胞培养条件下,于培养液中加入不同浓度6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)作用于MN9D细胞30 min。24 h后,MTT比色法检测MN9D细胞的存活率、Hoechst 33258核染色和流式细胞仪检测MN9D细胞的凋亡变化。结果6-OHDA以浓度依赖性的方式引起MN9D细胞的凋亡,导致细胞存活率降低。200μmol/L浓度的6-OH-DA作用30 min、培养24 h后,MN9D细胞的存活率降低至68.8%左右,凋亡率增高至约37.8%。结论6-OH-DA能够引起MN9D细胞的存活率降低,而凋亡率增高,产生类似帕金森病时的DA能神经细胞损伤的表现。

p100基因RNA干扰质粒载体的构建与鉴定

目的:构建p100基因RNA干扰质粒载体,并检测其对多巴胺能的MN9D细胞系中p100蛋白表达的抑制作用。方法:设计并合成2条针对小鼠p100基因的RNA干扰片段,退火后分别连入pSilencerTM3.1-H1质粒并分别命名为Sip100#1、Sip100#2,酶切和测序鉴定正确后,将以上重组质粒及阴性对照质粒分别转染MN9D细胞,运用Western Blot方法检测各组细胞胞浆内p100蛋白的表达水平。结果:(1)酶切和测序结果证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pSilencerTM3.1-H1质粒;(2)与对照组相比,转染MN9D细胞48 h后Sip100#1组及Sip100#2组p100蛋白的表达水平受到明显抑制,其中Sip100#1组下降58%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:本研究成功构建出小鼠p100基因靶向RNAi质粒载体,并能有效抑制MN9D细胞内p100蛋白的表达,为进一步研究p100蛋白所在信号通路对多巴胺能神经细胞的作用提供了工具。

探讨MG132对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制

目的:研究不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132对人肺腺癌A549细胞凋亡的作用,并且观察对细胞中Bcl-2和Bad两种凋亡相关蛋白表达的影响。方法:体外培养A549细胞分别暴露于0、5、10、20、40μmol/L的MG132,24 h后MTT法测定细胞存活率,流式细胞术(FCW)检测细胞的凋亡率,Western Blot方法测定A549细胞中Bcl-2和Bad两种蛋白的表达情况。结果:MTT法和流式细胞术检测结果显示,A549细胞的存活率和凋亡率与MG132呈浓度依赖性关系,MG132浓度越高细胞存活率越低,并且凋亡率越高。Western Blot方法测定结果显示A549细胞中Bcl-2的表达随着MG132浓度增高而逐渐减少,而Bad的表达无明显变化。结论:MG132可以诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡,实现该作用的可能机制部分是通过降低Bcl-2蛋白的表达,而Bad在这一过程中似乎没有表现出明显的作用。

MG132和DDP联合应用诱导Hep-2喉癌细胞凋亡及机制的研究

目的:研究蛋白酶体抑制剂MG132与顺铂(DDP)联合应用对Hep-2喉癌细胞凋亡的影响,同时观察细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bad表达水平的变化。方法:体外培养Hep-2细胞分别暴露于MG132、DDP或者MG132和DDP,24h后流式细胞术(FCW)检测Hep-2细胞的凋亡率,Western blot方法测定Hep-2细胞中Bcl-2和Bad两种蛋白的表达情况。结果:流式细胞术检测结果显示,MG132和DDP联合用药24h后Hep-2细胞凋亡率较单独应用MG132、DDP显著增加。Western blot结果显示联合用药组较单独用药组Hep-2细胞中Bcl-2的表达显著减少,而Bad的表达显著增加。结论:MG132联合DDP可能通过降低Bcl-2同时增强Bad的表达而进一步诱导Hep-2细胞的凋亡。可以认为MG132能增强DDP诱导Hep-2细胞凋亡的作用。

MG132和DDP联合应用对人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡影响及其机制的探讨

目的:研究蛋白酶体抑制剂MG132与顺铂(DDP)联合应用对人鼻咽癌细胞株CNE-1细胞凋亡的影响,观察细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bad表达的变化。方法:体外培养的CNE-1细胞分别暴露于MG132和DDP、单独MG132或者DDP,24h后,流式细胞术(FCW)检测CNE-1细胞的凋亡率,蛋白质印迹法测定CNE-1细胞中Bcl-2和Bad蛋白的表达情况。结果:流式细胞术检测结果显示,MG132和DDP联合用药组CNE-1细胞凋亡率(53±3.2)%较单独应用MG132组(20±1.7)%、DDP组(18±2.3)%的凋亡率显著增加。蛋白质检测结果显示,与MG132组、DDP组比MG132和DDP组Bcl-2的表达减少约3倍,而Bad的表达增加约2倍。结论:MG132和DDP联合应用可能通过降低Bcl-2同时增强Bad的表达而进一步诱导CNE-1细胞的凋亡。因此,我们可以认为MG132能够增强DDP对CNE-1细胞凋亡的作用。

组胺H1受体拮抗剂对变应性鼻炎大鼠血清中TNF-α和NO的影响

目的研究组胺H1受体拮抗剂对变应性鼻炎(Allergic Rhinitis,AR)大鼠血清中肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor alpha,TNF-α)和氧化亚氮(nitric oxide,NO)含量变化的影响。方法实验大鼠随机分为正常对照组,AR无干预组,AR组胺HR1拮抗剂干预组,RT-PCR法测定组胺HR1拮抗剂干预对变应性鼻炎大鼠血清中TNF-α水平,硝酸还原酶法测定血清NO水平的变化。结果与正常组相比,AR无干预组大鼠血清中TNF-α和NO含量增加(P<0.05);而与AR无干预组比较,AR组胺HR1拮抗剂干预组大鼠血清中TNF-α和NO含量明显降低(P<0.05)。结论 AR时大鼠血清中TNF-α和NO含量增加;组胺HR1拮抗剂可以通过抑制AR时血清中TNF-α和NO含量增加,发挥对AR大鼠的治疗作用。