GR 125487加剧帕金森病模型小鼠运动障碍和促进肠道炎症的研究

目的探究5-羟色胺受体在帕金森病模型小鼠肠道表达及5-羟色胺4受体对帕金森病模型小鼠运动功能、神经递质及肠道炎症的作用。方法通过RT-qPCR方法检测帕金森病模型小鼠回肠、结肠的5-羟色胺受体mRNA表达水平(Htr1a,Htr1b,Htr1f,Htr2a,Htr2c,Htr4,Htr6和Htr7);将C57BL/6N小鼠随机分成生理盐水组(saline组)、模型组(MPTP组)、5-羟色胺4受体拮抗剂+MPTP组(GR 125487+MPTP组)3组。在第1~5 d连续5 d腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrathydropyridine,MPTP)建立小鼠帕金森病模型。连续16 d每天腹腔注射5-羟色胺4受体拮抗剂GR 125487以探究5-羟色胺4受体对帕金森病模型小鼠的作用。最后一天给药后进行小鼠行为学测试,测试完成后收集小鼠纹状体及结肠组织。通过高效液相色谱法检测纹状体内多巴胺(dopamine,DA)及其代谢物含量,通过Western blot方法检测结肠内CD11b的蛋白表达水平。结果RT-qPCR结果显示,与Saline组相比,MPTP组小鼠回肠、结肠Htr4显著升高(P<0.05)。行为学结果显示,MPTP组小鼠运动能力显著下降(P<0.01),而GR 125487+MPTP组小鼠运动障碍加剧(P<0.05);HPLC结果显示,MPTP组纹状体DA显著减少,DA代谢率显著升高,而GR 125487+MPTP组小鼠进一步减少脑内DA水平,增加DA代谢率;Western blot结果显示,CD11b在GR 125487+MPTP组小鼠结肠表达水平相比于MPTP组表达水平显著上升(P<0.05)。结论Htr4在MPTP诱导的帕金森病模型小鼠肠道表达异常,5-HT4受体拮抗剂可以加剧帕金森病模型小鼠运动障碍、神经递质丢失并促进肠道炎症。

RIPK1调控LPS诱导的星形胶质细胞神经炎症的作用机制

目的探究坏死性凋亡抑制剂(necrostatin-1,Nec-1)抑制受体相互作用激酶1(receptor-interacting protein kinase 1,RIPK1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的星形胶质细胞神经炎症模型的作用。方法采用星形胶质细胞(MA细胞),随机分为4组:Control组、LPS组、Nec-1组及Nec-1+LPS组。使用RIPK1抑制剂Nec-1(50μM预处理30 min,共处理24 h)作为给药手段,使用LPS(0.1μg/mL处理24 h)刺激小鼠星形胶质细胞系(MA细胞)构建神经炎症细胞模型。使用3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-四氮唑鎓溴化物[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide,MTT]检测细胞活力,以确定LPS的安全浓度;利用免疫印迹(western blotting)法检测RIPK1的表达,以确定LPS和Nec-1的最终工作浓度;使用实时荧光定量PCR(realtime quantitative PCR,RT-qPCR)法检测趋化因子、炎症因子和星形胶质细胞A1/A2型标志物的转录水平,以评估抑制RIPK1对LPS所诱导的星形胶质细胞炎症的作用。结果证实Nec-1可以抑制MA细胞RIPK1的表达。抑制RIPK1可以减少由LPS刺激产生的星形胶质细胞A1型标志物补体C3(Complement C3,C3)和CC族趋化因子配体2(CC chemokine ligand 2,CCL2),即减少MA细胞向A1型极化并改善神经炎症。结论抑制RIPK1可以减少LPS诱导的星形胶质细胞A1型极化,改善炎症反应。RIPK1可能是一种重要的药物治疗靶点,具有被用于A1型星形胶质细胞介导的神经炎症相关疾病的潜在价值。

氧化三甲胺加剧MPTP诱导的PD模型小鼠的神经炎症及行为障碍

目的 探究肠道菌群相关代谢物氧化三甲胺(trimethylamine N-oxide, TMAO)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrathydropyridine,MPTP)诱导的帕金森病(Parkinson′s disease,PD)模型小鼠的作用。方法 采用6周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为4组:Control组、MPTP组、TMAO组及TMAO+MPTP组。实验为期28 d。整个实验期间对Control组和MPTP组进行常规饲养,对TMAO组和TMAO+MPTP组进行常规饲养同时额外在饮水中补充3%(w/v)的TMAO,在实验开始第21天对MPTP组及TMAO+MPTP组进行腹腔注射MPTP(20 mg/kg,每隔2 h 1次,一日内注射4次)以诱导帕金森病急性动物模型,于第28天进行组织取材。爬杆实验和悬挂实验评估小鼠的运动功能;利用免疫印迹(western blotting,WB)和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法分别检测纹状体中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的水平和神经递质5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)及其代谢物的含量;利用WB检测纹状体TLR4、NF-κB蛋白含量;利用实时荧光定量PCR检测海马CD68、TLR4、NF-κB、突触可塑性及血脑屏障相关分子的mRNA表达水平。结果 TMAO部分加剧了PD小鼠的运动功能障碍同时显著降低了纹状体中5-HT的含量。TMAO还显著上调了纹状体及海马中神经炎症相关分子(TLR4、NF-κB、CD68)的蛋白含量及mRNA表达水平,提示加剧了神经炎症。此外,TMAO并未显著性影响与突触可塑性及血脑屏障相关分子的表达。结论 外周血中高水平的TMAO对于PD小鼠的运动功能、纹状体神经递质、纹状体及海马神经炎症施加了不利影响。

菊花黄酮化合物组成、抗氧化活性及相关性分析

为探究菊花中黄酮化合物组成与其抗氧化活性间的相关性,从菊花中提取黄酮化合物,测其总黄酮含量,HPLC分析其黄酮组成,DPPH法测其抗氧化活性,并以偏最小二乘法(PLS)探究样品黄酮组分与抗氧化活性间的相关性。结果表明各菊花黄酮化合物均具有一定的抗氧化活性,且各菊花黄酮化合物种类及含量存在一定的差异。黄酮化合物组成与抗氧化活性间的相关性研究表明绿原酸、黄芩苷、芦丁、槲皮素与黄酮样品对抗氧化活性呈正相关,芹菜素与抗氧化活性呈负相关。

不同产地菊花黄酮化合物抗氧化活性研究

实验从四个不同产地的菊花中提取黄酮化合物,以亚硝酸钠-硝酸铝法对其总黄酮含量进行测定,并以清除羟基自由基、超氧阴离子自由基能力及还原能力三种方式对菊花中黄酮化合物的抗氧化活性进行分析。结果表明,四种菊花中,亳菊黄酮化合物含量最低(11.84%),滁菊最高(14.51%)。四种菊花黄酮化合物且均具有一定的清除羟自由基、清除超氧阴离子及总还原能力,且因菊花来源不同抗氧化活性能力大小不同。