实时荧光定量RT-PCR检测白血病细胞WT1 mRNA方法的建立

目的 建立实时荧光定量 RT-PCR检测白血病细胞 WT1m RNA的方法。方法 在 PCR反应体系中加入了一条与靶基因序列互补的寡核苷酸双荧光标记探针 (5′端为荧光报告基团 ,3′端为荧光淬灭基团 ) ,建立实时荧光定量 RT-PCR检测白血病细胞 WT1m RNA的方法 ,并测试其特异性及敏感性。结果 所建立的实时荧光定量 RT-PCR检测 WT1m RNA的方法具有很好的准确性 ,检测 WT1m RNA的灵敏度达 10 - 4。方法的变异系数为1.93 % ,稳定性较好。循环阈值与 PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系 (斜率为 -3 .5,线性相关系数 r=0 .997) ,可对 WT1m RNA的表达进行准确定量分析。结论 实时荧光定量 RT-PCR检测白血病细胞WT1m RNA的方法具有很好的特异性和敏感性 ,且操作简便、安全。

大剂量甲氨蝶呤治疗儿童急性淋巴细胞白血病排泄延迟分析

目的观察儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)大剂量甲氨蝶呤(HDMTX)疗法MTX排泄延迟的发生率和不良反应,探讨MTX排泄延迟与MTX剂量、用药方式的关系,及如何减少排泄延迟的发生。方法分析121例497例次儿童ALLHDMTX化疗的临床资料,比较有和无排泄延迟情况下HDMTX的不良反应。并按剂量(3g组和5g组)和用药持续时间(7h组和24h组)分组,比较排泄延迟的发生率、不良反应及各组四氢叶酸钙(CF)的解救剂量。结果总体排泄延迟发生率为12.1%,发生1次排泄延迟的相对概率是30.6%,再次发生的相对概率为45.9%,明显增加(P<0.01)。有排泄延迟的患儿排泄延迟时血小板较无排泄延迟时明显减低(P<0.01),CF解救剂量明显增加(P<0.01)。3g组排泄延迟时口腔黏膜损害较无排泄延迟时更明显(P<0.05),下一疗程化疗延迟(中位延迟4d)。3g组排泄延迟发生率(12.1%)与5g组(12.0%)比较差异无统计学意义(P>0.05),7h用药组排泄延迟发生率(13.6%)与24h用药组(11.9%)比较差异也无统计学意义(P>0.05)。无排泄延迟时5g组仅胃肠道反应较3g组明显增加(P<0.01),而CF解救剂量明显低于3g组(P<0.01)。结论HDMTX排泄延迟情况下骨髓抑制和口腔黏膜损害的不良反应增加,下一疗程化疗延迟,CF用量增加。HDMTX排泄延迟在3～5g/m2剂量范围里与MTX剂量、用药方式无关。

CD_(117)在白血病细胞上的表达分析

目的 探讨细胞表面分化抗原CD117在各型白血病细胞上的表达规律及其意义。方法 采用CD4 5/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术细胞表面分化抗原分析。结果 急性髓系白血病 (AML)患者CD117表达率为 6 8%,慢性粒细胞白血病急变期 (CML BC)患者CD117表达率为 80 %,而在急性淋巴细胞白血病中表达率极低 ,仅为 2 %。在慢性淋巴细胞白血病、CML慢性期中阴性。在AML中CD117主要表达在M0 /M1( 72 %)、M2 ( 88%)、M4 ( 5 0 %)、M5a( 75 %)、M6( 10 0 %) ,但在M3 和M5b中表达率较低 (分别为 39%和 2 9%) ,在M3 中CD117的表达率高于CD34 及HLA DR。CD117与CD14 在AML中的表达呈负相关。结论 CD117有助于淋巴系与髓系白血病的鉴别 ,并有助于白血病克隆与正常细胞的区分。

多色流式细胞术在222例儿童急性白血病免疫分型中的应用

目的 探讨多色流式细胞术在儿童急性白血病 (AL)免疫分型中的应用价值 ,了解儿童AL抗原表达规律和免疫亚型的分布情况。方法 采用CD45/侧散射 (SSC)双参数散点图设门方法进行三色或四色流式细胞术细胞表面及浆内分化抗原的分析。结果 2 2 2例儿童白血病免疫分型可分为 4类 :未分化型占 0 9% ,急性髓细胞性白血病 (AML)占 35 1% ,急性淋巴细胞白血病 (ALL)占5 5 9% ,混合型急性白血病占 8 1%。 12 4例儿童ALL中 ,B淋巴细胞白血病 (B ALL)占 75 8% ,T淋巴细胞白血病 (T ALL)占 2 4 2 %。AML伴淋巴系抗原表达为 2 4 4 % ,主要表达CD7(12 8% ) ,其次为CD19(6 4 % )和CD2 (5 1% )。B ALL及T ALL伴髓系抗原表达分别为 36 2 %及 30 0 % ,主要表达CD13(18 5 % ) ,其次为CD15(11 3% )、CD11b(6 5 % )和CD3 3 (4 3% )。CD117和CD56主要在AML中表达 ,分别为 73 3%和 38 6 % ,而在ALL中表达率极低 ,仅为 2 0 % (P <0 0 1)。胞浆内抗原CD2 2 、CD3 及髓过氧化物酶 (MPO)分别特异地表达在B ALL、T ALL及AML ,并比胞膜抗原检测更为敏感。结论 应用多色流式细胞术几乎能对所有儿童急性白血病进行准确分型 ,对儿童白血病患者的治疗方案选择及预后判断等均有重要价值。