表达肝细胞生长因子的人羊水干细胞培养上清对大鼠神经元突起生长的影响

目的:研究过表达肝细胞生长因子(HGF)的人羊水干细胞(hAFSCs)上清对大鼠背根节(DRG)神经突起生长的影响。方法:从人羊水中收集贴壁细胞,通过形态学、核型分析、细胞表面标记分子等手段鉴定hAFSCs。将hAFSCs通过慢病毒感染得到过表达HGF的HGF-hAFSCs,收集hAFSCs、HGF-hAFSCs培养上清液离心过滤后,用于DRG组织块的体外培养,比较hAFSCs上清液组(hAFSCs)、HGF-hAFSCs上清液组(HGF-hAFSCs)和单纯培养液对照组(Control)对DRG神经突起生长的影响。结果:从人羊水中获得的细胞为hAFSCs,其核型正常,表达CD29、CD73、CD90和CD105,不表达CD34和CD45。慢病毒感染72 h后,感染效率约为80%;经嘌呤霉素筛选,获得过表达HGF的hAFSCs。实时荧光定量PCR结果显示,HGF-hAFSCs组与hAFSCs组的细胞相比,HGF mRNA表达有显著性增加(P<0.001);ELISA结果显示,HGF-hAFSCs上清液中HGF的浓度为3.44 ng/ml,而hAFSCs组上清液未检测到,两组有显著性差异(P<0.001)。DRG组织内神经突起长度测量显示,hAFSCs组突起为(251.60±7.94)μm,对照组突起为(52.74±6.77)μm,而HGF-hAFSCs组突起较前两组都显著增加(P<0.001),为(306.57±10.65)μm。结论:利用hAFSCs过表达HGF有助于DRG神经的突起生长,为神经损伤提供了一种新的治疗方案。