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食源性单增李斯特菌14种潜在毒力基因的检测 被引量:4
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作者 钱凌霄 康立超 +3 位作者 李红欢 张奇文 杜冬冬 马勋 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期878-882,共5页
目的了解新疆生产建设兵团食源性单核细胞增生性增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)潜在毒力基因分布情况。方法以54株食源性LM DNA为模板,针对14个潜在毒力基因设计特异性引物并利用PCR技术检测潜在毒力基因。结果 54株分离株均携... 目的了解新疆生产建设兵团食源性单核细胞增生性增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)潜在毒力基因分布情况。方法以54株食源性LM DNA为模板,针对14个潜在毒力基因设计特异性引物并利用PCR技术检测潜在毒力基因。结果 54株分离株均携带潜在毒力基因,其中5563分离株携带率最高,为57.14%(8/14),21L662分离株携带率最低,为21.43%(3/14),其余分离株携带率在28.57%(4/14)~50%(7/14)之间。潜在毒力基因检出率不同,其中寡肽转运蛋白、内化素样蛋白、细胞壁表面锚定家族蛋白、单价阳离子/H+逆向转运蛋白、肽聚糖结合蛋白、组氨酸代谢系统、合成致死KAR3样蛋白、精氨酸/鸟氨酸逆向转运蛋白、ABC转运蛋白、Ⅱ型限制酶修饰系统Sau3Al,磷酸葡萄糖转移酶系统基因的检出率分别是98.15%、81.48%、77.78%、64.81%、59.26%、53.70%、51.85%、35.19%、12.96%、9.26%、9.26%,芳香族氨基酸合成因子,EsaC蛋白类似物,差向异构酶/脱水酶家族蛋白和转录调控因子3种潜在毒力基因未检出。结论检测食品源LM分离株14种潜在毒力基因的分布,为研究LM致病性和食品LM的溯源奠定了基础。 展开更多
关键词 食源性单核细胞增多性李斯特菌 潜在毒力基因 PCR 携带率 检出率
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LPXTG基序蛋白lmo0159基因缺失株的构建及对单增李斯特菌环境适应能力的影响 被引量:1
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作者 张奇文 凌晨 +4 位作者 杜冬冬 钱凌霄 李红欢 薄新文 马勋 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2018年第2期133-139,共7页
单增李斯特菌(LM)是一种重要的食源性致病菌,能引发人和动物李氏杆菌病,其细胞壁表面LPXTG基序蛋白在LM致病过程中发挥重要作用。为了探讨LPXTG基序蛋白Lmo0159对LM环境适应能力的影响,本研究利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)及同源重组技... 单增李斯特菌(LM)是一种重要的食源性致病菌,能引发人和动物李氏杆菌病,其细胞壁表面LPXTG基序蛋白在LM致病过程中发挥重要作用。为了探讨LPXTG基序蛋白Lmo0159对LM环境适应能力的影响,本研究利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)及同源重组技术,运用穿梭质粒p KSV7载体,构建lmo0159基因缺失株LM90SB2-lmo0159。测定在不同温度、不同Na Cl浓度及3.5%乙醇环境下OD600,绘制生长曲线。结果显示:在4℃条件下,LM90SB2与LM90SB2-lmo0159生长无差异;在37和42℃条件下,LM90SB2-lmo0159的生长速度显著低于LM90SB2(P<0.05);在含2.5%Na Cl的BHI培养基中,LM90SB2-lmo0159的生长受到明显抑制,显著低于LM90SB2(P<0.05);在含4.5%Na Cl和3.5%乙醇的BHI培养基中,LM90SB2和LM90SB2-lmo0159生长均受到一定程度抑制,但在4.5%Na Cl条件下差异不显著(P>0.05),在3.5%乙醇条件下,LM90SB2-lmo0159的生长低于LM90SB2,差异显著(P<0.05)。本研究表明lmo0159基因对LM适应胁迫环境具有一定的影响,为进一步研究lmo0159基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 lmo0159基因 缺失株 同源重组 环境适应性
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LPXTG基序蛋白lmo0160基因缺失对单增李斯特菌生物膜形成的影响
3
作者 张奇文 凌晨 +4 位作者 马勋 薄新文 杜冬冬 钱凌霄 李红欢 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2017年第6期707-713,共7页
为了研究致绵羊脑炎单增李斯特菌新疆分离株LM90SB2的LPXTG基序蛋白lmo0160基因对生物膜形成能力的影响,本研究利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)及同源重组技术,使用穿梭质粒p KSV7载体,构建lmo0160基因缺失株LM90SB2-lmo0160。通过测定OD_... 为了研究致绵羊脑炎单增李斯特菌新疆分离株LM90SB2的LPXTG基序蛋白lmo0160基因对生物膜形成能力的影响,本研究利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)及同源重组技术,使用穿梭质粒p KSV7载体,构建lmo0160基因缺失株LM90SB2-lmo0160。通过测定OD_(600)绘制生长曲线,利用结晶紫染色测定OD_(570)定量检测生物膜形成能力,在显微镜下观察生物膜的形态。结果显示:与LM90SB2菌株相比,LM90SB2-Δlmo0160在37℃培养条件下生长速度显著降低(P<0.01)。LM90SB2和LM90SB2-Δlmo0160在不同时间点均形成网格结构的生物膜,但生物膜的致密度和OD_(570)有不同。显微镜下LM90SB2-Δlmo0160形成松散,稀薄的生物膜,LM90SB2生物膜致密,浓厚。不同时间点LM90SB2-Δlmo0160 OD_(570)值均小于LM90SB2,8和12 h差异不显著(P>0.05);24 h差异显著,(P24 h<0.05);48 h差异极显著(P48 h<0.001)。本研究表明,Δlmo0160基因对LM90SB2生长增殖和生物膜形成具有一定的影响作用,这为进一步阐明LM毒力因子的致病机制提供理论依据。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 lm00160基因 缺失株 同源重组 生物膜
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食源性单核细胞增生李斯特菌毒力岛4携带株的分型、毒力及生物被膜形成能力的测定 被引量:10
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作者 刘扬扬 康立超 +3 位作者 马勋 王静 李红欢 钱凌霄 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期567-571,600,共6页
为了解食源性单核细胞增生李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)携带株的血清分型、多位点序列分型、小鼠的半数致死量(LD50)和生物被膜的形成能力,本研究以新疆各师局2014年~2017年常规送检的1027份食品中分离的5株携带LIPI-4的LM(菌株编号LM46... 为了解食源性单核细胞增生李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)携带株的血清分型、多位点序列分型、小鼠的半数致死量(LD50)和生物被膜的形成能力,本研究以新疆各师局2014年~2017年常规送检的1027份食品中分离的5株携带LIPI-4的LM(菌株编号LM461、LM873、LM928、LM2947、LM5573)为研究对象,采用PCR对分离菌株进行血清分型,对其7个看家基因的序列进行多位点序列分型(MLST),并通过腹腔注射法测定小鼠LD50,利用结晶紫染色法测定其生物被膜的形成能力。结果显示,5株食源性LM LIPI-4携带菌株血清型PCR分组均为1/2b、3b和7;多位点序列分析结果均为ST87(CC87);LM928、LM2947、LM5573、LM461和LM873菌株对小鼠的LD50分别为107.2 cfu、107.2 cfu、107.3 cfu、107.5 cfu、108.6 cfu;5株LM分离株均能形成生物被膜,其中LM928和LM2947形成能力最强,LM873最弱。本研究首次明确LIPI-4不仅仅存在于LM CC4克隆群,同时也存在于ST87型,CC87克隆群,该结论对LM LIPI-4的致病性及其致病机理的进一步探究具有重要意义。 展开更多
关键词 食源性单核细胞增生李斯特菌 血清PCR分组 多位点序列分型 生物被膜 LD50
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食源性单增李斯特菌毒力岛基因检测与致病性 被引量:10
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作者 李红欢 陈朔 +4 位作者 康立超 钱凌霄 张奇文 杜冬冬 马勋 《江苏农业科学》 2019年第14期193-196,共4页
为了解食源性单增李斯特菌分离株的毒力岛1(LIPI-1)和毒力岛2(LIPI-2)的基因及致病性.利用PCR方法对8株分离株LIPI-1和LIPI-2进行基因检测,小鼠腹腔接种分离株菌悬液5×10^7CFU/只,进行致病性的初步试验.结果显示,LIPI-1的6个毒力... 为了解食源性单增李斯特菌分离株的毒力岛1(LIPI-1)和毒力岛2(LIPI-2)的基因及致病性.利用PCR方法对8株分离株LIPI-1和LIPI-2进行基因检测,小鼠腹腔接种分离株菌悬液5×10^7CFU/只,进行致病性的初步试验.结果显示,LIPI-1的6个毒力基因除actA基因检出率为50.0%外,hly、prfA、plcA、plcB、mpl的检出率为100.0%;LIPI-2中inlA、inlB、inlC基因检出率为100.0%,inlD和inlE基因检出率分别为87.5%和75.0%,inlF和inlG毒力因子基因的检出率较低,分别为50.0%和37.5%.小鼠致病性试验显示,8株分离株均能致死小鼠,致死率在50.0%~100.0%.其中,LM5567和LM5570在5d内全部死亡,致死率为100.0%,表明这2株菌对小鼠有强致病力.说明LIPI-1基因检出率高于LIPI-2的基因检出率;菌株的致病性与毒力岛基因的携带率无明显相关,但分离株对小鼠均有致病性,提示食品安全不容忽视.本研究为食源性单增李斯特菌毒力岛基因携带率与致病力的关系提供铺垫. 展开更多
关键词 食源性单增李斯特菌 毒力岛1(LIPI-1) 毒力岛2(LIPI-2) 致病性 基因检出率
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单增李斯特菌lmo0331基因的克隆、序列分析及原核表达 被引量:6
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作者 杜冬冬 张奇文 +2 位作者 李红欢 钱凌霄 马勋 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第5期1170-1176,共7页
试验旨在对单增李斯特菌临床分离株(LM90SB2)的LPXTG基序表面蛋白lmo0331基因进行克隆、序列分析和原核表达。根据GenBank中lmo0331基因序列设计特异性引物,利用PCR方法扩增LM90SB2 lmo0331基因,将扩增产物克隆到pMD19-T载体,测序后进... 试验旨在对单增李斯特菌临床分离株(LM90SB2)的LPXTG基序表面蛋白lmo0331基因进行克隆、序列分析和原核表达。根据GenBank中lmo0331基因序列设计特异性引物,利用PCR方法扩增LM90SB2 lmo0331基因,将扩增产物克隆到pMD19-T载体,测序后进行核苷酸序列和蛋白结构域分析;构建表达质粒pET32a-0331,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,利用SDS-PAGE和Western blotting检测重组蛋白。结果显示,LM90SB2 lmo0331基因核苷酸序列与NTSN株、F2365株、LL195株及WSLC 1033株的同源性均为100.0%,与N2306株、02-1792株、H34株的同源性均为99.9%。LM90SB2 lmo0331基因全长1 956bp,ORF全长为1 857bp,共编码618个氨基酸;蛋白结构域预测结果显示,lmo0331蛋白具有NEL、LRR、IR、PulA、LPXTG结构域。SDS-PAGE结果可见约88ku重组蛋白带,Western blotting表明该蛋白可与小鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合。本研究成功构建了原核表达载体pET32a-0331,实现了lmo0331融合蛋白的表达,为进一步研究lmo0331基因的功能及单克隆抗体的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 lmo0331基因 结构域 原核表达
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单增李斯特菌lmo0331基因缺失株的构建及对环境耐受性的影响 被引量:3
7
作者 杜冬冬 康立超 +4 位作者 张奇文 李红欢 钱凌霄 李庆辉 马勋 《动物医学进展》 北大核心 2020年第5期12-18,共7页
为了研究Lmo0331蛋白在单增李斯特菌环境适应性中发挥的作用,利用同源重组的技术构建LM90SB2△lmo0331基因缺失株,比较在不同温度、pH、渗透压下的生长特性和生物被膜形成能力与野毒株的差异。结果显示,在4℃环境下及含5g/L NaCl的BHI... 为了研究Lmo0331蛋白在单增李斯特菌环境适应性中发挥的作用,利用同源重组的技术构建LM90SB2△lmo0331基因缺失株,比较在不同温度、pH、渗透压下的生长特性和生物被膜形成能力与野毒株的差异。结果显示,在4℃环境下及含5g/L NaCl的BHI培养基中,LM90SB△lmo0331缺失株的生长速度显著高于LM90SB2野毒株(P<0.05);在pH9的碱性环境及含45mL/L乙醇的BHI培养基中,LM90SB2△lmo0331缺失株繁殖数量低于野毒株(P<0.05);其他条件下,LM90SB△lmo0331缺失株与野毒株的生长无显著差异;LM90SB2和LM90SB2△lmo0331在不同时间点生物被膜形成密度无显著差异。由此表明,Lmo0331蛋白可能在低温和碱性条件下发挥不同作用,这一结果为研究LM在胁迫环境生存机制奠定了基础。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 lmo0331基因 缺失株 环境耐受
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食源性单增李斯特菌的分离鉴定及药物敏感试验 被引量:2
8
作者 李红欢 陈朔 +4 位作者 康立超 马勋 钱凌霄 张奇文 杜冬冬 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第12期89-92,共4页
为了了解常规送检食物中单增李斯特菌的污染现况和分离株的药物敏感性,对2014年新疆生产建设兵团8个师常规送检的727份食品应用国标法进行细菌分离鉴定,采用Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法进行药物敏感试验。结果显示,从727份食品样品中分... 为了了解常规送检食物中单增李斯特菌的污染现况和分离株的药物敏感性,对2014年新疆生产建设兵团8个师常规送检的727份食品应用国标法进行细菌分离鉴定,采用Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法进行药物敏感试验。结果显示,从727份食品样品中分离出24株细菌,经革兰染色,培养特性和生化特性鉴定为单增李斯特菌。食品单增李斯特菌总检出率为3.3%,其中调理肉制品检出率最高,达17.77%,其次是冷冻鱼糜制品,检出率为4.95%。药敏试验表明, 24株单增李斯特菌对青霉素和环丙沙星耐药;大部分菌株对亚胺培南、强力霉素、万古霉素和庆大霉素敏感。表明送检食品不同程度受到单增李斯特菌的污染,食源性分离菌株出现多重耐药现象,提示食品安全不容忽视。 展开更多
关键词 食源性单增李斯特菌 分离鉴定 药物敏感
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单增李斯特菌新疆分离株lmo2192基因克隆及生物信息学分析 被引量:2
9
作者 李红欢 钱凌霄 +3 位作者 杜冬冬 张奇文 李庆辉 马勋 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期3011-3017,共7页
试验旨在对单增李斯特菌新疆绵羊脑炎临床分离株LM90SB2的lmo2192基因进行克隆及生物信息学分析。根据GenBank中lmo2192基因序列(登录号:CAD00270)设计特异性引物,利用PCR方法对lmo2192基因进行扩增,回收目的基因,连接到pMD19-T载体上... 试验旨在对单增李斯特菌新疆绵羊脑炎临床分离株LM90SB2的lmo2192基因进行克隆及生物信息学分析。根据GenBank中lmo2192基因序列(登录号:CAD00270)设计特异性引物,利用PCR方法对lmo2192基因进行扩增,回收目的基因,连接到pMD19-T载体上进行克隆,筛选阳性菌进行测序,测序后对lmo2192基因核苷酸序列进行分析,预测其编码蛋白质的二级结构、三级结构,对其进行同源性比对及遗传变异分析。结果显示,新疆分离株LM90SB2的lmo2192基因序列全长为1 277bp,包含969bp开放阅读框,共编码322个氨基酸;LM90SB2株lmo2192基因核苷酸序列与CIIMS-PH-1同源性为100.0%,与81-0861、10-0809、81-0592、81-0558、NTSN、F2365和WSLC1033的同源性为99.8%~99.9%,与L2074和NH1同源性分别为97.0%和96.9%。推导的氨基酸序列同源性为91.6%~100.0%。系统进化树显示,LM90SB2菌株lmo2192基因与4b血清型菌株亲缘关系较近,聚为同一分支。蛋白质二级结构预测表明,LM90SB2lmo2192蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,不形成跨膜结构。蛋白结构域预测,lmo2192蛋白为ATP酶组分。本试验成功克隆LM90SB2分离株lmo2192基因,为进一步研究其基因功能提供理论依据。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 lmo 2192基因 克隆 生物信息学分析
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食源性单增李斯特菌lismff_0038基因克隆及序列分析 被引量:1
10
作者 刘扬扬 马勋 +4 位作者 康立超 李红欢 钱凌霄 江婉琳 阮婷玉 《现代畜牧兽医》 2019年第10期1-7,共7页
单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)作为四大重要食源性病原菌之一,对公共安全及畜牧业发展威胁极大.其lismff_0038是新发现的一个潜在毒力因子,与LM的神经感染和母胎感染密切相关.对食源性单核细胞增多性李斯特菌LM556... 单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)作为四大重要食源性病原菌之一,对公共安全及畜牧业发展威胁极大.其lismff_0038是新发现的一个潜在毒力因子,与LM的神经感染和母胎感染密切相关.对食源性单核细胞增多性李斯特菌LM5567的lismff_0038基因进行克隆和生物信息学分析,为功能验证提供基础.根据GenBank中收录的lismff_0038基因序列设计特异性引物,利用PCR方法对食源性单核细胞增多性李斯特菌LM5567的lismff_0038基因进行扩增,将扩增产物克隆到pMD19-T载体,进行PCR、双酶切鉴定及序列测定,并对基因核苷酸序列和蛋白序列进行分析.结果显示,食源性单核细胞增多性李斯特菌LM5567的lismff_0038基因序列全长为988 bp.LM5567的lismff_0038核苷酸序列与02-6680株(4b,奶酪,加拿大)、10-0811株(1/2b,螃蟹,加拿大)、10-0809株(4b,粪便,加拿大)、81-0558株(4b,脑脊髓液,加拿大)、02-1103株、02-1792株(4b,奶酪,加拿大)、81-0861株(4b,卷心菜,加拿大)相似性91.1%.其推导的氨基酸序列与上述菌株相似性100%.蛋白质二级结构预测表明,LM5567的lismff_0038蛋白为疏水性蛋白,无信号肽,属于跨膜蛋白.表明,克隆了LM5567的lismff_0038基因,为进一步探究lismff_0038基因的功能奠定了一定基础. 展开更多
关键词 食源性单核细胞增多性李斯特菌 lismff_0038基因 PCR 生物信息学分析
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明以察微,积微成著——“纸上微博”在高年级习作训练中的有效运用
11
作者 钱凌霄 《新作文(教研)》 2018年第9期0166-0167,共2页
通过开展“纸上微博”语文教学实践活动,进行了一些以培养和提高学生核心素养为目标的积极尝试。通过习作方式的转变和有效的教学指导,“纸上微博”为学生的自主写作提供有利条件和广阔空间,减少对学生习作的束缚,鼓励自由表达和有... 通过开展“纸上微博”语文教学实践活动,进行了一些以培养和提高学生核心素养为目标的积极尝试。通过习作方式的转变和有效的教学指导,“纸上微博”为学生的自主写作提供有利条件和广阔空间,减少对学生习作的束缚,鼓励自由表达和有创意的表达。 展开更多
关键词 核心素养 纸上微博 微习作 自由 自觉 开放 共享
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食源性单核细胞增生型李斯特菌lmoF2365_0032基因克隆及序列分析
12
作者 刘扬扬 马勋 +4 位作者 康立超 李红欢 钱凌霄 江婉琳 阮婷玉 《江苏农业科学》 2020年第16期74-79,共6页
对食源性单核细胞增生李斯特菌LM5567的lmoF2365_0032基因进行克隆和序列分析,利用PCR方法对lmoF2365_0032基因进行扩增,将扩增产物连接到pMD19-T载体上,筛选阳性菌株进行测序比对分析。结果显示,扩增获得的lmoF2365_0032基因序列长度为... 对食源性单核细胞增生李斯特菌LM5567的lmoF2365_0032基因进行克隆和序列分析,利用PCR方法对lmoF2365_0032基因进行扩增,将扩增产物连接到pMD19-T载体上,筛选阳性菌株进行测序比对分析。结果显示,扩增获得的lmoF2365_0032基因序列长度为811 bp,克隆得到lmoF2365_0032基因的阳性转化子;生物信息学分析表明,lmoF 2365_0032蛋白属于跨膜蛋白,无信号肽序列;二级结构中无规则卷曲和延伸链结构占比较大,分别是37.86%和36.89%;序列比对结果表明,LM5567菌株lmoF2365_0032基因的核苷酸序列与02-6680菌株(4b,奶酪,加拿大)、10-0811菌株(1/2b,螃蟹,加拿大)的相似性均为99.7%;与10-0809菌株(4b,粪便,加拿大)、81-055菌株(4b,脑脊髓液,加拿大)、02-1103菌株、02-1792菌株(4b,奶酪,加拿大)、81-0861菌株(4b,卷心菜,加拿大)的相似性均为99.8%;LM5567 lmoF 2365_0032基因编码的氨基酸序列与上述菌株相似性均为94.7%。试验成功克隆了lmoF 2365_0032基因,可为进一步探究lmoF2365_0032基因功能奠定基础。 展开更多
关键词 食源性单核细胞增多李斯特菌 lmoF2365_0032基因 PCR 生物信息学分析
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食源性单核细胞增生李斯特菌lmoF2365_0037基因克隆及序列分析
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作者 刘扬扬 马勋 +5 位作者 王静 康立超 李红欢 钱凌霄 江婉琳 阮婷玉 《现代畜牧兽医》 2020年第2期1-6,共6页
为了对食源性单核细胞增生李斯特菌LM5567的lmoF23650037基因进行克隆和序列分析。试验利用PCR方法对lmoF23650037基因进行扩增,连接pMD19-T载体进行克隆,筛选阳性菌株进行测序比对分析。结果显示:扩增获得的lmoF23650037基因序列长为54... 为了对食源性单核细胞增生李斯特菌LM5567的lmoF23650037基因进行克隆和序列分析。试验利用PCR方法对lmoF23650037基因进行扩增,连接pMD19-T载体进行克隆,筛选阳性菌株进行测序比对分析。结果显示:扩增获得的lmoF23650037基因序列长为548 bp,克隆得到lmoF23650037基因的阳性转化子;生物信息学分析表明:lmoF23650037蛋白属于跨膜蛋白,无信号肽序列;二级结构中无规则卷曲和延伸链比例较大,分别是46.31%和32.89%;序列比对结果表明,LM5567株lmoF23650037基因核苷酸序列与02-6680株(4b,奶酪,加拿大)、10-0811株(1/2b,螃蟹,加拿大)、10-0809株(4b,粪便,加拿大)、81-0558株(4b,脑脊髓液、加拿大)、02-1103株、02-1792(4b,奶酪,加拿大)、81-0861株(4b,卷心菜,加拿大)相似性均为100%;LM5567 lmoF23650037基因编码的氨基酸序列与上述菌株相似性均为93.3%。本试验成功克隆了lmoF23650037基因,为进一步探究lmoF23650037基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 食源性单核细胞增生李斯特菌 lmoF23650037基因 PCR 生物信息学分析
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寡肽转运蛋白lmo2193基因缺失对单增李斯特菌环境适应性的影响
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作者 李红欢 乔彦杰 +5 位作者 康立超 杜冬冬 钱凌霄 李庆辉 王静 马勋 《现代畜牧兽医》 2020年第1期11-16,共6页
研究通过比较三株单增李斯特菌在不同环境下的适应性,探究lmo2193基因对单增李斯特菌环境应激的影响。测定不同温度、EtOH浓度、pH、NaCl浓度条件下的生长趋势,绘制生长曲线。结果显示,缺失株的生长速度明显较野毒株、回补株生长缓慢,... 研究通过比较三株单增李斯特菌在不同环境下的适应性,探究lmo2193基因对单增李斯特菌环境应激的影响。测定不同温度、EtOH浓度、pH、NaCl浓度条件下的生长趋势,绘制生长曲线。结果显示,缺失株的生长速度明显较野毒株、回补株生长缓慢,缺失株对42℃和4.5%无水乙醇(EtOH)胁迫条件下的耐受性明显低于野毒株、回补株。表明LM90SB2菌株lmo2193基因的缺失会降低其对环境的适应性,为进一步探究寡肽转运蛋白在单增李斯特菌中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 lmo2193基因 生化鉴定 环境适应性
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食源性单核细胞增生型李斯特菌arcD基因克隆及序列分析
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作者 刘扬扬 马勋 +4 位作者 康立超 李红欢 钱凌霄 江婉琳 阮婷玉 《青海畜牧兽医杂志》 2019年第6期21-26,共6页
为了对食源性单核细胞增生型李斯特菌LM5567的arcD基因进行克隆和序列分析,实验利用PCR方法对arcD基因进行扩增,连接至pMD19-T载体,将连接产物转化至DH5接感受态细胞,筛选阳性菌株进行测序比对分析。结果显示:扩增获得的arcD基因序列长... 为了对食源性单核细胞增生型李斯特菌LM5567的arcD基因进行克隆和序列分析,实验利用PCR方法对arcD基因进行扩增,连接至pMD19-T载体,将连接产物转化至DH5接感受态细胞,筛选阳性菌株进行测序比对分析。结果显示:扩增获得的arcD基因序列长为915bp,克隆得到arcD基因的阳性转化子;生物信息学分析表明:arcD蛋白属于跨膜蛋白,无信号肽序列;LM5567的arcD基因核苷酸序列与02-6680株(4b,奶酪,加拿大)相似性99.9%,与10-0811株(1/2b,螃蟹,加拿大)相似性99.7%,与10-0809株(4b,粪便,加拿大)、81-0558株(4b,脑脊髓液,加拿大)、02-1103株、02-1792(4b,奶酪,加拿大)和81-0861株(4b,卷心菜,加拿大)相似性均为100%。LM5567arcD基因编码的氨基酸序列与上述菌株相似性为89.4%~89.9%。本实验成功克隆了arcD基因,为进一步探究arcD基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 食源性单核细胞增多性李斯特菌 arcD基因 生物信息学分析
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单增李斯特菌新疆分离株lmo0160基因克隆及序列分析 被引量:5
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作者 张奇文 凌晨 +3 位作者 马勋 杜冬冬 钱凌霄 李红欢 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2905-2913,共9页
【目的】单增李斯特菌是一种重要的食源性致病菌,常引起人和动物致病。其细胞壁表面LPXTG基序蛋白在单增李斯特菌致病过程中发挥重要作用,根据参考株全序列预测的41个LPXTG基序蛋白中仍有部分蛋白功能未知。对单增李斯特菌新疆绵羊脑分... 【目的】单增李斯特菌是一种重要的食源性致病菌,常引起人和动物致病。其细胞壁表面LPXTG基序蛋白在单增李斯特菌致病过程中发挥重要作用,根据参考株全序列预测的41个LPXTG基序蛋白中仍有部分蛋白功能未知。对单增李斯特菌新疆绵羊脑分离株LM90SB2的LPXTG基序蛋白Lmo0160的基因进行克隆及生物信息学分析,为功能验证提供基础。【方法】根据GenBank中收录的lmo0160序列设计特异性引物,利用PCR方法对新疆分离株的lmo0160基因进行扩增,将扩增产物克隆到pMD 19-T载体,进行PCR、双酶切鉴定及序列测定,并对基因核苷酸序列和蛋白序列进行分析。【结果】分离株LM90SB2的lmo0160序列全长为1 708 bp,包含1 428 bp的开放阅读框,共编码475个氨基酸;LM90SB2株lmo0160核苷酸序列与CFSAN008100株(4b型,美国)、CFSAN023463株(4b型,美国)、J2-064株(4b型,美国)、F2365株(4b型,奶酪,美国)和NTSN株(4b型,绵羊脑,中国扬州)相似性为99.0%-99.1%;与M7株(4a型,牛奶,中国浙江)相似性为97.2%,与Finland1998株(1/2a型,美国)、N53-1株(1/2a型,熟火腿,瑞士)、N1546株(1/2a型,鱼,丹麦)和EGD-e株(1/2a型,美国)相似性为87.2%-91.1%;其推导的氨基酸序列与上述菌株相似性为91.8%-99.4%。系统进化树显示,LM90SB2菌株的lmo0160基因与CFSAN023463、F2365和NSTN菌株亲缘关系较近,处于同一分支上,而与标准株EGD-e菌株亲缘关系较远。蛋白质二级结构预测表明,LM90SB2的Lmo0160蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,不形成跨膜结构。蛋白结构域预测表明Lmo0160蛋白含有胶原蛋白结合域和Cna B结构域。【结论】克隆了LM90SB2的lmo0160基因,为进一步研究LM90SB2的lmo0160基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 lmo0160基因 克隆 生物信息学分析
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单核细胞增多性李斯特菌新疆分离株lmo0159基因克隆及生物信息学 被引量:2
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作者 张奇文 凌晨 +3 位作者 马勋 杜冬冬 钱凌霄 李红欢 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期5287-5295,共9页
采用PCR方法对lmo0159基因进行扩增、克隆及序列测定,通过应用在线EXPASTYProteomic、SOSUI、SMART、SignalP、TMHMM、SOPMA及ProtFun等程序,同时结合DNAMAN和DNAStar生物信息学软件,对LM90SB2菌株lmo0159基因进行序列分析,并对其编码... 采用PCR方法对lmo0159基因进行扩增、克隆及序列测定,通过应用在线EXPASTYProteomic、SOSUI、SMART、SignalP、TMHMM、SOPMA及ProtFun等程序,同时结合DNAMAN和DNAStar生物信息学软件,对LM90SB2菌株lmo0159基因进行序列分析,并对其编码蛋白质的空间结构和功能预测。结果表明,分离株LM90SB2的lmo0159基因序列全长为2070bp,包含1851bp开放阅读框,共编码617个氨基酸;序列同源比对显示,LM90SB2菌株lmo0159基因核苷酸和氨基酸序列与4b型参考菌株同源性均较高,分别为99.1%~100.0%和99.7%~100.0%。系统进化树显示,LM90SB2菌株lmo0159基因核苷酸序列与LM3、LM9、LM11、LM12、F2365、LM188、NSTN、H34、hs2008、LL195和2306等菌株聚为同一支,说明它们的亲缘关系比较近。lmo0159蛋白质是一种偏酸性、稳定、亲水性蛋白质,其二级结构是混合型,其中无规则卷曲最多,无跨膜区域,无信号肽区域,但含有1个胶原蛋白结合域和3个CnaB结构域。功能分析显示,lmo0159蛋白质在氨基酸生物合成、酶代谢、脂肪酸代谢、免疫应答和胁迫应答等方面的几率均较高。本研究成功克隆LM90SB2lmo0159基因,为进一步研究LM90SB2的lmo0159基因功能提供了帮助。 展开更多
关键词 单核细胞增多性李斯特菌 lmo0159基因 克隆 蛋白质结构 生物信息学
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扩展莫尼茨绦虫vasa基因的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 钱凌霄 王正荣 +5 位作者 李红欢 刘乙 张艳艳 王炜烨 薄新文 马勋 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1136-1141,共6页
试验旨在表达、纯化扩展莫尼茨绦虫VASA蛋白,并制备兔抗VASA多克隆抗体。根据扩展莫尼茨绦虫全基因核苷酸序列设计特异性引物,利用PCR方法扩增vasa基因片段;将扩增产物与原核表达载体pET-22b(+)连接,获得重组质粒pET-22b-VASA;经Amp抗... 试验旨在表达、纯化扩展莫尼茨绦虫VASA蛋白,并制备兔抗VASA多克隆抗体。根据扩展莫尼茨绦虫全基因核苷酸序列设计特异性引物,利用PCR方法扩增vasa基因片段;将扩增产物与原核表达载体pET-22b(+)连接,获得重组质粒pET-22b-VASA;经Amp抗性筛选阳性菌,双酶切、PCR测序鉴定后,将其转化大肠杆菌(DE3)感受态细胞中,并进行IPTG诱导表达;重组融合蛋白经镍柱纯化后,进行Western blot鉴定;将融合蛋白免疫兔,制备多克隆抗体。结果显示,重组质粒pET-22b-VASA构建正确,通过IPTG诱导获得大小约32200的VASA重组融合蛋白;Western blot分析表明其与鼠抗His单克隆抗体呈阳性反应。纯化的VASA蛋白免疫兔获得了多克隆抗体,ELISA检测其效价为1∶128000。本试验成功制备了具有免疫原性的VASA蛋白及其兔源多克隆抗体,为VASA蛋白生物学功能及该蛋白在绦虫体内的分布等研究奠定基础。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 VASA 原核表达 多克隆抗体 ELISA
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饲料中锌源和水平对肉鸡肌肉组织中锌和金属硫蛋白含量的影响 被引量:2
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作者 钱凌霄 张卓炜 +3 位作者 陈梓灵 禹小芳 谭志刚 李英 《黑龙江畜牧兽医(下半月)》 CAS 北大核心 2015年第7期75-76,共2页
纳米氧化锌是纳米量级(1~100 nm)的新产品,其高效吸收、高生物活性和兼容性代替了普通锌源作为饲料添加剂逐渐广泛地应用于畜牧业中。试验证明,日粮中添加纳米氧化锌不仅能提高肉鸡的生长性能和屠宰性能,还能增强肉鸡的免疫力及抗氧... 纳米氧化锌是纳米量级(1~100 nm)的新产品,其高效吸收、高生物活性和兼容性代替了普通锌源作为饲料添加剂逐渐广泛地应用于畜牧业中。试验证明,日粮中添加纳米氧化锌不仅能提高肉鸡的生长性能和屠宰性能,还能增强肉鸡的免疫力及抗氧化酶活性,降低自由基的产生。金属硫蛋白(MT)是一类富含巯基与金属的低分子蛋白质,参与微量元素的贮存,能够清除羟基自由基,增强机体抗应激作用,已被广泛关注。 展开更多
关键词 金属硫蛋白 纳米氧化锌 抗应激作用 锌源 饲料添加剂 屠宰性能 氧化酶活性 生物活性 高效吸收 体液免疫功能
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56株食源性单增李斯特菌耐药性测定及耐药基因的检测 被引量:5
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作者 李庆辉 康立超 +4 位作者 杜冬冬 李红欢 钱凌霄 刘扬扬 马勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期766-772,共7页
为调查新疆部分食源性单增李斯特菌的药物敏感性和相关耐药基因的携带现况,采用微量肉汤稀释法(MIC)和K-B琼脂扩散法对56株单增李斯特菌进行18种抗菌药物敏感性试验。通过PCR方法进行12种相关耐药基因检测,并对耐药基因进行测序分析。... 为调查新疆部分食源性单增李斯特菌的药物敏感性和相关耐药基因的携带现况,采用微量肉汤稀释法(MIC)和K-B琼脂扩散法对56株单增李斯特菌进行18种抗菌药物敏感性试验。通过PCR方法进行12种相关耐药基因检测,并对耐药基因进行测序分析。结果表明,28.6%(16/56)的菌株微量肉汤稀释法检测耐药,而K-B琼脂扩散法检测19.6%(11/56)菌株耐药。56株单增李斯特菌均对青霉素、氨苄西林、亚胺培能、庆大霉素、万古霉素、左氧氟沙星、利福平敏感,对四环素、复方新诺明、链霉素、强力霉素、卡那霉素耐药。微量肉汤稀释法检测发现,菌株对四环素、复方新诺明、链霉素耐药率较高,分别为12.5%(7/56)、10.7%(6/56)、10.7%(6/56),多重耐药菌株占7.1%(4/56)。在18株表型耐药菌株中,61.1%(11/18)的菌株携带相应的耐药基因,四环素类耐药基因以tetM为主,红霉素耐药基因为ermB,氯霉素素耐药基因为cat。而在38株非耐药表型菌株中,氨基糖苷类耐药基因aac(6’)-Ib-cr和红霉素耐药基因ermB的检出率分别高达57.9%和39.5%。扩增片段核苷酸序列与参考序列同源性为95%~100%。新疆食源性单增李斯特菌出现耐药,且耐药表型与耐药基因不完全符合,应引起关注。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 最低抑菌浓度 抑菌圈 药敏试验 耐药基因
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