L-色氨酸酶基因工程菌的构建

应用PCR技术从E.coli K-12染色体DNA中扩增出长约1.4 kb的L-色氨酸酶基因,将其插入到高表达载体pTrc 99A的Ncol/Hind Ⅲ位点中,转化宿主菌E.coli JM105。经质粒大小比较和酶切鉴定,筛选出重组质粒。重组质粒经L-色氨酸缺陷菌株E.coli K-12 MD33筛选和Suelter法测酶活力。证明重组质粒pTase 9能表达有活性的L-色氨酸酶。工程菌JM105/pTase 9的L-色氨酸酶比活力为1132 u/g湿细胞。该菌经SDS-PAGE电泳分析表明L-色氨酸酶量约占细胞总可溶性蛋白的30%。

HPLC测定复方四季青片中原儿茶酸、原儿茶醛的含量

目的 :建立RP HPLC法测定复方四季青片 (四季青等 )中原儿茶酸、原儿茶醛的含量。方法 :采用AlltimaC18(5 μm ,4 .6mm× 2 5 0mm)色谱柱 ,流动相为甲醇 - 1%醋酸 (18∶82 ) ;流速为 1.0mL·min-1;检测波长为 2 80nm。结果 :两种成分能很好分离 ,原儿茶酸和原儿茶醛的线性范围分别为 7.6～ 12 7.1μg·mL-1(r =0 .9997)和 2 .6 2～ 4 3.6 μg·mL-1(r =0 .9994 ) ;平均回收率分别为 99.9% ,97.5 % ,其RSD分别为 2 .1% ,2 .2 % (n =5 )。结论 :本方法测定结果准确可靠 ,重现性好 。