日本血吸虫经胎盘传播的实验研究

目的 实验观察日本血吸虫的胎盘传播。方法 以家兔为动物模型 ,对母兔怀孕中期 (器官发生期 )和晚期 (胎儿发育期 ) ,人工感染不同量的日本血吸虫尾蚴 ,观察仔兔日本血吸虫感染情况 ,同时对仔兔断奶后进行攻击性感染。结果 母兔怀孕中期和晚期人工感染 30 0条尾蚴 ,母兔经胎传播率分别为 75 .0 %和 10 0 .0 % ,仔兔经胎感染率分别为 13.5 %和 46 .7%。母兔怀孕晚期分别人工感染 30 0、5 0 0、70 0条尾蚴 ,母兔经胎传播率均为 10 0 .0 % ,仔兔感染率分别为 46 .7%、6 1.9%、79.0 %。仔兔感染强度分别为 1- 3、1- 3条及 2 - 14条血吸虫。新产仔兔断奶后攻击性感染 2 0条尾蚴 ,实验组和对照组仔兔虫体回收差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 仔兔日本血吸虫经胎盘感染率和感染强度与母兔怀孕不同时期 ,胚胎发育不同程度 ,尾蚴感染剂量等众多因素有关 ;仔兔经胎感染后 。

中国大陆日本血吸虫微卫星DNA的初步研究

目的 研究中国大陆日本血吸虫 (Schistosoma japonicum)微卫星 DNA基因变异。方法 日本血吸虫种群取自中国大陆 7个流行省现场 :浙江省 (嘉善 ) ,安徽省 (贵池 ) ,江西省 (永修 ) ,湖北省 (武汉 ) ,湖南省 (岳阳 ) ,四川省 (茅山 ,天全 ) ,云南省 (大理 ) ,以及菲律宾 Sorsogon省。对每一种群2 0个样本的 DNA,用 6个日本血吸虫微卫星 :M5 A,J5 N,MF1,RRPS,2 AAA和 MPA分析。结果 中国大陆日本血吸虫不同的种群之间和种群内存在高水平的多态性 ,进一步证实中国株和菲律宾株分属不同虫株 ,在中国大陆不同种群间也存在明显遗传变异。结论 证明了用微卫星对日本血吸虫进行种群基因学研究的可行性 。

卫氏并殖吸虫致病品系PCR-RAPD分子标记的初步研究

目的探讨卫氏并殖吸虫致病品系PCR-RAPD分子标记。方法应用随机扩增多态DNA(PCR-RAPD)技术,对浙江宁海小汀、宁海西溪、遂昌、临安等地卫氏并殖吸虫囊蚴进行遗传变异研究。结果通过8条寡核苷酸随机引物扩增,B17-1600bp为浙江宁海小汀肺吸虫种群特异性DNA片段,A9-680bp为浙江宁海西溪,遂昌、临安三地肺吸虫种群共有特异性DNA片段。结论结果提示B17-1600bp,A9-680bp可作为卫氏并殖吸虫不同致病品系的分子标记。

中国大陆日本血吸虫随机扩增多态DNA(RAPD)的初步研究

目的对中国大陆浙江、安徽、江西、湖北、湖南、四川、云南7省日本血吸虫种群进行遗传变异研究。方法应用随机扩增多态DNA（RAPD）技术，对5条寡核苷酸随机引物扩增。结果获得32条DNA片断，17个基因位点，长度在100bp～2600bp之间。各种群多态百分率（P）为52．9～70．6，平均杂合性（H）为0．269～0．363。中国大陆湖区日本血吸虫各种群间遗传距离（D）为0．000～0．023．山区种群间为0．155，湖区种群与山区种群间遗传距离为0．036～0．139。同时，P235-930bp，P293－910bP分别为四川种群和云南种群特异性DNA片断，P256－720bp为日本血吸虫雌虫特异性DNA片断。对中国大陆日本血吸虫虫株复合性和系统发生作简要讨论。

哈氏并殖吸虫ITS2基因和CO1基因序列分析

目的进一步确认浙江宁海哈氏并殖吸虫(Paragonimusharinasutai)分类地位及其遗传变异。方法从浙江华溪蟹中分离获得哈氏并殖吸虫囊蚴,单个囊蚴经PCR扩增,进行核糖体DNA第二间区(ITS2)基因和线粒体细胞色素C氧化酶亚单位(CO1)基因序列分析;ITS2-PCR扩增产物经BsaHI、StuI酶切。结果ITS2-PCR扩增产物经BsaHI和StuI酶切(PCR-RFLP),琼脂糖凝胶电泳分离图谱基本一致。浙江宁海哈氏并殖吸虫ITS2基因有366碱基对,与泰国种群(AF159609)核酸同源性为95.6%,CO1基因有390碱基对,与泰国种群(AF159600)核酸同源性为89.5%。结论本研究从分子生物学角度进一步确认浙江宁海哈氏并殖吸虫分类地位,但与泰国种群(Nakorn-nayok省)相比较,存在较大变异。

浙江宁海卫氏并殖吸虫ITS2序列分析

为了进一步了解浙江宁海卫氏并殖吸虫(Paragonimus westermani)的遗传变异情况,对卫氏并殖吸虫不同种群进行ITS2序列分析研究。分别自浙江宁海小汀、宁海西溪(冷风洞)和宁海余山采集浙江华溪蟹,分离卫氏并殖吸虫囊蚴并进行ITS2序列PCR扩增分析。结果表明:浙江宁海三地卫氏并殖吸虫ITS2序列有363个碱基对,肺型肺吸虫和非肺型肺吸虫的ITS2序列完全相同;与泰国种群(AF159604,NakornNayok省)核酸同源性为97.5%,两地卫氏并殖吸虫遗传变异较大。浙江宁海卫氏并殖吸虫与日本、韩国等地的卫氏并殖吸虫的核酸同源性均较高,属亚洲东北组群。

湖北钉螺指名亚种三种群等位基因酶变异的研究

本项工作对湖北钉螺指名亚种三个地理种群的酯酶等8种酶进行了等位基因电泳图象的比较研究。结果表明8种酶系统在钉螺三个地理种群内均具有活性,表现11个基因位点。三种群间遗传距离(D)分别为0.005432,0.015428和0.005686。

浙江省6种短沟蜷足肌全蛋白SDS-PAGE图谱的比较研究

目的探讨短沟蜷属螺类生化特性和种间差异,以及对传播卫氏并殖吸虫病的意义。方法采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),对浙江省6种短沟蜷(Semisulcospira)螺类的足肌全蛋白区带进行比较研究。结果各螺种出现率在50%以上的多肽区带为17～20条,分子量在27～162kDa之间。其中仅有2条强多肽区带完全一致,分子量为93kDa和52kDa。各种间特征性区带主要表现在其染色特性上,全蛋白种间相似系数(Sm)在0.74～0.85之间。结论结合短沟蜷属螺类形态学特点,两条多肽主带,可作为该属的生化分类指标,对传播人体并殖吸虫病可能具有意义。

浙江省卫氏并殖吸虫致病品系分子标记的研究

应用随机扩增多态ＤＮＡ技术，对浙江宁海小汀，宁海西溪，遂昌，临安等地卫氏并殖吸虫囊蚴进行遗传变异研究，通过８条寡核苷酸随机引物扩增，Ｂ１７－２４００ｂｐ为浙江宁海小汀肺吸虫种群特异性ＤＮＡ片段，Ａ９－６８０ｂｐ为浙江宁海西溪，遂昌，临安三地肺吸虫种群共有特异性ＤＮＡ片段，结果提示Ｂ１７－２４００ｂｐ，Ａ９－６８０ｂｐ，可作为卫氏并殖吸虫不同致病品系的分子标记。

中国大陆日本血吸虫随机扩增多态DNA（RAPD）的初步研究

应用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术，对中国大陆浙江、安徽、江西、湖南、湖北、四川、云南７省日本血吸虫种群进行遗传变异研究。通过５条寡核苷酸随机引物扩增，获得３２条ＤＮＡ片断，１７个基因位点，长度在１００ｂｐ－２６００ｂｐ之间。经Ｂｉｏｓｙｓ计算机程序分析，各种群多态百分率（Ｐ）为５２．９￣７０．６，平均杂合性（Ｈ）为０．２６９￣０．３６３。中国大陆各湖区种群间遗传距离（Ｄ）为０．０００￣０．

浙江省10县(市)卫氏并殖吸虫成虫形态的观察

目的观察浙江省卫氏并殖吸虫成虫形态变异。方法对浙江省6个地区10个县(市)的卫氏并殖吸虫成虫标本布氏液固定、梅氏卡红液染色封制,固绿染色皮棘,显微镜下观察、测量。结果(1)虫体类椭圆形,平均大小为8.98±1.38～12.96±0.86×4.69±1.04～6.92±0.58mm。宽长比例为1:1.77～1:2.1。(2)口吸盘平均大小力0.57±0.07～0.71±0.09×0.84±0.14～0.93±0.09mm。腹吸盘平均大小为0.55±0.08～0.72±0.06×0.60±0.07～0.75±0.07mm.,口吸盘大于腹吸盘。(3)皮棘单生为主。腹吸盘侧及两睾丸间少数皮棘有裂开现象,甚至形成双棘并列。(4)卵巢略呈扇形,分4～7叶,多数(75.57%)为6叶。卵某巢长与体长比值为0.11～0.15。(5)睾丸分4～7叶。分5叶者占50.36%。分叶形状变化较大。两睾丸平均长与体长比值为0.10～0.15。结论首次观察记录全浙江省卫氏并殖吸虫成虫形态变异。不同地区甚至同一地区虫体标本间存在一定程度的差异,但都符合卫氏并殖吸虫的基本特征。

浙江宁海卫氏并殖吸虫种群变异的研究

目的进一步了解浙江宁海卫氏并殖吸虫遗传背景。方法对宁海小汀、宁海西溪(冷风洞)和宁海余山卫氏并殖吸虫不同种群进行核糖体DNA第二间区(ITS2)和线粒体细胞色素C氧化酶亚单位(CO1)基因序列分析研究。结果浙江宁海三地卫氏并殖吸虫ITS2序列有363个碱基对,肺型肺吸虫和非肺型肺吸虫ITS2序列完全相同,与泰国种群(AF159604,Nakorn Nayok省)核酸同源性为97.5%,两者差异有显著意义。浙江宁海小汀和宁海余山二地卫氏并殖吸虫CO1序列有390个碱基对,其中3个核酸位点不同(No.49,178,331);浙江宁海小汀种群与中国闽清种群(U97209)和泰国种群(U97212)核酸同源性分别为99.5%和89.0%。结论浙江宁海卫氏并殖吸虫属亚洲东北组群。

长爪沙鼠的遗传多样性分析

利用17个微卫星DNA标记对Z：ZCLA长爪沙鼠封闭群、野生群和近交系进行遗传多样性分析，评估群体内的遗传变异和群体间的遗传分化。结果表明：在Z：ZCLA封闭群和野生群中共有9个微卫星DNA标记获得稳定的结果，分别为AF200940、AF200941、AF200942、AF200945、AF200946、AF200947、D11Mit128、PKC和SCN，共检测到41个等位基因，每个基因的等位基因数从1～7不等，片段大小在120～283bp之间，所有位点的平均期望杂合度（He）和多态信息含量（PIC）值分别为0．5032和0．4656，Z：ZCLA封闭群和野生群9个微卫星位点平均有效等位基因数分别为2．78和2．89，平均基因杂合度分别为0．3704和0．3893，平均多态信息含量分别为0．3256和0．3344，两个群体都表现为中度多态，Z：ZCLA封闭群较野生群稍低；在3个近交系中共有8个位点获得稳定的扩增结果，分别为AF200941、AF200942、AF200945、AF200946、AF200947、D11Mit128、PKC和SCN，共检测到11个等位基因，片段大小在140～241bp之间，其中5个位点在群体内表现为单态纯合，3个位点在群体内表现为单态杂合，所有位点在群体内和群体间均呈单态性，表明这3个长爪沙鼠品系基本符合近交系的要求，微卫星标记技术适用于近交系长爪沙鼠的遗传检测。

日本血吸虫病经胎盘传播家兔血清抗体的检测

目的 探索日本血吸虫病经胎盘传播的血清免疫反应。方法 对不同孕期的怀孕母兔分别感染 30 0条日本血吸虫尾蚴 ,仔兔出生后 37～ 46 d后收集母兔和仔兔血清 84份 ,以 EL ISA检测家兔日本血吸虫特异性 Ig G抗体。结果 10份母兔血清均为阳性 (OD=1.42～ 1.82 ) ,74份仔兔血清均为阴性 (OD=0 .0 4～ 0 .6 0 ) ;其中怀孕中期感染日本血吸虫母兔所产仔兔 (5 2份 )和怀孕晚期感染所产仔兔 (2 2份 )血清 ,OD均值分别为 0 .19和 0 .36 ,两者差异有非常显著意义 (P<0 .0 0 1) ;同一怀孕期感染日本血吸虫母兔所产仔兔 ,检到虫体与未检到虫体血清检测 ,OD值差异无显著意义 (P>0 .0 5 )。结论 日本血吸虫经胎盘传播后 。

小鼠日本血吸虫病经胎传播的实验观察

目的 进一步了解小鼠日本血吸虫病的经胎传播。方法 分别对不同怀孕期的母鼠感染日本血吸虫尾蚴 (6 0± 1)条。在感染 30～ 40 d后 ,用灌洗法观察母鼠、仔鼠的感染情况。结果 妊娠早、中、晚期感染血吸虫的母鼠平均检获的虫数分别为 (4 8.0± 4.9)条、(33.3± 9.4)条、(2 1.0±13.4)条。但其仔鼠均未检获虫体 ,肝脏无虫卵结节。结论 本实验未发现小鼠能经胎传播日本血吸虫病 ,可能与不同动物种系及尾蚴感染的剂量有关。

日本血吸虫病经胎盘传播免疫耐受性的进一步研究

目的 进一步探索日本血吸虫病经胎盘传播的免疫耐受性。方法 对不同孕期的怀孕母兔分别感染 30 0条日本血吸虫尾蚴 ,感染 45天后收集母兔和仔兔血清 84份 ,在检测家兔日本血吸虫特异性IgG抗体研究结果的基础上 ,进一步以ELISA方法检测日本血吸虫特异性IgM抗体。结果 10份母兔血清IgM抗体检测均为阳性 (OD =0 .82～ 1.5 1) ,74份仔兔血清均为阴性 (OD =0 .0 1～ 0 .49) ;怀孕中期感染日本血吸虫母兔所产仔兔 (5 2份 )和怀孕晚期感染所产仔兔 (2 2份 )血清 ,OD均值分别为 0 .2 3和 0 .2 8,两者差异有显著意义 (P <0 .0 5 ) ;同一怀孕期感染日本血吸虫母兔所产仔兔血清 ,OD值差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论 日本血吸虫经胎盘传播后 。