内置式闪光卡动态心电分析系统

内置式闪光卡动态心电分析系统，由心电信号记录器和分析仪两部分组成。内置式闪光卡从结构上省去了昂贵的读卡器，并增加了可靠性；心电信号分析仪可对采集到的心电信号作进一步处理，如：心电信号回放、ＱＲＳ波的识别、心律失常的判别和聚类、ＳＴ段分析、报告打印等。

血清乙型肝炎病毒DNA水平对HBV全基因组克隆效率的影响

目的:通过比较血清HBV DNA水平对一片段PCR法和两片段PCR法这两种不同方法的HBV全基因组克隆效率的影响,选择出合适的HBV全基因组克隆技术,供后续的HBV的基础和临床研究。方法:采集了慢性乙型肝炎(CHB)患者85份血清,分别用本研究建立的一片段PCR法及两片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切鉴定后将PCR产物克隆入载体,进行HBV全基因组序列测定。同时用实时荧光定量PCR法检测上述85份血清的HBV DNA滴度。结果:本研究建立的一片段PCR法扩增成功需要的血清HBV DNA浓度高于两片段PCR法,两种方法扩增的效率比较为:一片段PCR法扩增的阳性率低于两片段PCR法(P<0.01)。一片段PCR法的保真性和灵敏度分析发现:保真性:核苷酸的人为突变率为1.13bp/kb;灵敏度:为102个初始模板。浓度大于103的重组质粒DNA80%可以成功扩增,浓度低于该值的扩增效率比较低。结论:血清HBV DNA水平对两种扩增方法的阳性率有一定影响,滴度高低是选择合适PCR扩增方法的依据。HBV DNA滴度大于106copies/L的样本,可选用一片段PCR法的全基因组扩增、克隆技术,而对HBV DNA滴度小于106copies/L样本,则可选用两片段PCR法的全基因组扩增、克隆技术。本研究建立的一片段PCR法扩增HBV全基因组克隆的技术是一种值得推荐的好方法,但还需进一步优化。

孕妇血清与胎儿脐血HBV-DNA定量检测及其相关性研究

为了探讨母婴之间 HBV- DNA含量的关系 ,应用 Amplisensor荧光定量 PCR方法检测 79例 HBV感染孕妇血清及胎儿脐血 HBV- DNA含量。结果 :2 6例 HBe Ag (+)和 5 3例 HBe Ag (- )孕妇其静脉血、脐血 HBV- DNA阳性率分别为 10 0 .0 %、 85 .0 %和 6 2 .3%、 35 .8% ,其含量 (对数值 )分别为 7.780± 0 .82 3、 5 .12 2± 0 .883和 5 .46 0±1.375、 3.96 1± 0 .912 (P均 <0 .0 0 5 ) ,其中 42例脐血 HBV- DNA阳性者其母血也呈阳性 ;孕妇血清与胎儿脐血 HBV-DNA的含量呈线形相关 (r=0 .2 70 ,P<0 .0 5 )。提示 :孕妇血清 HBV- DNA含量的高低反映 HBV垂直感染的强弱。

新型的抗线粒体抗体M2亚型IgG和IgA抗体的检测方法在原发性胆汁性肝硬化诊断中的价值

目的:评价以新型天然M2抗原和BPO融合蛋白M2-3E(BPO)为靶抗原的ELISA法(抗-M2-3EELISA)检测抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)IgG和IgA抗体在原发性胆汁化肝硬化(PBC)诊断中的敏感性、特异性。方法:分别用间接免疫荧光法(IFL)、以丙酮酸脱氢酶复合体(PDC)为靶抗原的ELISA法(抗-PDCELISA)、抗-M2-3EELISA法检测107例PBC、31例自身免疫肝炎(AIH)、10例原发性硬化性胆管炎(PSC)、17例丙型病毒性肝炎(HCV)、29例乙型病毒性肝炎(HBV)患者和26例健康体检者。结果:(1)107例PBC患者用IFL、抗-PDCELISA和抗-M2-3EELISA3种方法检测AMA-M2IgG的检出率分别为:87/107(81.3%)、78/107(72.9%)、97/107(90.6%)。特异性分别为98.1%、97.2%、98.3%。抗-M2-3EELISA法AMA-M2IgG的检出率(90.6%)显著高于IFL法(81.3%)和抗-PDCELISA法(72.9%)(均P<0.01)。用抗-M2-3EELISA法检测AMA-M2IgA的检出率为59/107(55.1%),特异性为97.2%。而总体AMA-M2IgG和/或IgA的检出率99/107(92.5%),特异性为95.2%。(2)IFL和抗-M2-3EELISA的重叠度为85%,抗-M2-3EELISA可以在超过一半的IFL阴性的患者中检出AMA-M2IgG和/或IgA。结论:抗-M2-3EELISA法具有比IFL和抗-PDCELISA法更高的敏感性、特异性。但是,AMA-M2IgG和IgA都不可以单独用于诊断PBC的标记。

我国恒河猴粪便腺病毒聚合酶基因片段的序列分析

目的研究非人灵长类动物猴子腺病毒的分子多样性。方法采集圈养的恒河猴粪便样本,以腺病毒聚合酶基因为目的基因,用PCR方法进行扩增,对PCR阳性产物进行克隆、测序,并进行系统进化分析。结果 57只恒河猴粪便样本有12份存在腺病毒DNA,系统进化分析提示这些序列主要可分为两大组:类SAdV-6组(2个非重复序列)和类SAdV-7组(9个非重复序列)。此外,有3个克隆,其最相似序列分别为:SAdV-1,SAdV-3和HAdV-52。结论研究证实腺病毒在非人灵长类粪便中普遍存在,揭示这些动物肠道内腺病毒的多样性以及系统进化情况。

携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体的构建及其体外试验研究

目的:采用体外连接技术构建含红色荧光蛋白(RFP)报告基因的重组腺病毒载体,为基因治疗与基因疫苗研究提供重要工具。方法:将pTurboRFP-N上的含RFP基因片段,经酶切连接定向克隆至转移载体pShuttle上,构成重组质粒pShuttle-TurboRFP-N。用I-Ceu I/PI-Sce I双酶切重组质粒pShuttle-TurboRFP-N和骨架质粒pH5'040 pkGFP-Ⅱ,回收目的片段,连接,获得重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N。将其线性化后,经脂质体介导转染至AD293细胞内包装出重组腺病毒颗粒。通过荧光显微镜观察其在AD293细胞内的包装效率和RFP表达情况。扩增并再次感染AD293细胞检测病毒颗粒感染能力,并测定其生物活性及滴度。将所构建的重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N与对照腺病毒载体AdH5.CMV.EGFP在体外感染人肺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MDA-MB-231。通过荧光蛋白RFP和EGFP的表达,比较它们对以上肿瘤细胞的感染效率。结果:经酶切鉴定,证明已正确构建重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N;经AD293细胞包装成具有感染性的病毒颗粒,并能在真核细胞中高效表达目的基因;扩增纯化后获得重组腺病毒颗粒数为3.6×1015vp/L,滴度达1.8×1013pfu/L。重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N感染人肺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MDA-MB-231的感染效率,高于对照腺病毒载体AdH5.CMV.EGFP(P<0.05)。结论:成功构建了携带RFP报告基因的重组腺病毒载体,并能够在AD293细胞中高效地表达,对肿瘤细胞的感染效率高。RFP对GFP是一种很好的代替和补充,为基因治疗与基因疫苗研究提供更多的荧光标签。

两种恒河猴肠道腺病毒基因型分型方法的比较分析

目的通过对两种肠道腺病毒基因型分型方法进行比较,以寻找出简便快速的肠道腺病毒基因型分型方法。方法采集57例圈养的恒河猴粪便样本,方法一:将粪便悬液过滤上清感染BSC-1细胞,提取病变细胞的基因组DNA进行PCR扩增,然后克隆、测序,确定病毒基因型;方法二:从粪便悬液过滤上清中直接提取基因组DNA进行巢式PCR扩增,对PCR阳性者进行克隆、测序以及基因型分型。结果 57份样本中,两种方法均有12份样本检出腺病毒,阳性率为21.1%(12/57)。系统进化分析显示,两种方法检出的腺病毒型别一致。提示这些序列主要可分为两大组:类SAdV-6组(2个非重复序列)和类SAdV-7组(9个非重复序列)。此外,有三个克隆,其最相似序列分别为:SAdV-1、SAdV-3和HAdV-52。结论虽然两种方法的敏感性、特异性一样,但方法二是直接提取粪便悬液过滤上清基因组DNA进行巢式PCR扩增,而无需方法一进行3次体外细胞感染实验后从病变细胞中提取基因组DNA进行PCR扩增,节省了实验的时间及成本,特别是避免了体外细胞感染过程中可能出现的污染,因此值得推荐。

广州地区猴腺病毒7型血清流行病学初步调查

目的评估广州地区猴腺病毒7型(SAdV-7)先存中和抗体阳性率情况。方法首先构建以β-半乳糖苷酶(LacZ)为报告基因,结合CMV启动子的猴重组腺病毒7型载体SAdV7-CMV-LacZ。然后使用化学发光法,检测209份免疫功能正常的成人的血清样本中SAdV-7中和抗体阳性率情况。结果我们发现SAdV-7中和抗体的阳性率为27.8%(58/209)。SAdV-7中和抗体在低滴度时阳性率最高,并且随着滴度的升高,阳性血清分布率逐渐降低。在20～40岁人群中,SAdV-7中和抗体阳性率最高,在<20岁人群中未检测到SAdV-7中和抗体。结论广州地区人群中针对SAdV-7的先存中和抗体阳性率低。因此,SAdV-7在基因治疗及基因疫苗的应用上是一个具有吸引力的候选载体。

人脐带间充质干细胞抑制T细胞免疫作用

目的研究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)在体外对淋巴细胞增殖和免疫调控功能的影响。方法采用组织块贴壁法分离健康捐献者来源的脐带进行分离培养。培养至第3~5代时,进行多向分化和细胞表型鉴定。获取健康供者外周血单个核细胞,并通过CD3免疫磁珠分选出T淋巴细胞,进行荧光染料CFSE标记,然后分成单独培养组(T细胞)和共培养组(按T∶MSC=5∶1的比例共培养),两组均采用CD3/CD28单克隆抗体活化,培养3 d后通过流式细胞术检测T淋巴细胞的增殖情况,并检测Th1/Th17细胞亚群的变化以及对Treg细胞亚群的影响。结果健康捐献者来源的hUC-MSCs高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166、HLA-DR,不表达CD31、CD34、CD45,并具有多向分化潜能。与单独培养组比较,共培养组中的T淋巴细胞增殖率和Th1、Th17细胞亚群比例明显降低,Treg细胞比例明显升高。结论hUC-MSCs通过抑制T淋巴细胞的增殖、下调Th1/Th17和上调Treg细胞参与免疫调节,发挥免疫抑制作用。

臭氧联合紫外线对GMP洁净实验室消毒的效果评价

目的观察臭氧联合紫外线对药品生产质量管理规范(good manufacturing practice,GMP)洁净实验室进行消毒的效果。方法臭氧联合紫外线对GMP洁净实验室连续消毒运行12个月,每个月月末布放一次血琼脂平板做沉降菌检测;作为对照,在洁净实验室运行一年后关闭洁净空调及臭氧联合紫外线消毒,更换滤芯对空调系统维护两周后,布放一次血琼脂平板做沉降菌检测。于37℃保温箱培养48 h后计数每平板上的菌落数。结果洁净空调运行加上臭氧联合紫外线消毒,布放在负压洁净室的8个采样点均未检测到沉降菌落,而布放在正压洁净室的14个采样点,在2、8、9、12月个别采样点的个别血琼脂平板可见1~2 CFU/平板,但均≤3 CFU/平板,判定合格,合格率100%;而关闭洁净空调及臭氧联合紫外线消毒两周后,布放在负压洁净室有2个采样点均>3 CFU/平板,不合格。结论臭氧联合紫外线对GMP层流实验室消毒彻底,效果良好。

不同代次人脐带间充质干细胞生物学特性评估

目的明确传代扩增代次对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)生物学特性的影响。方法采用组织块法分离HUC-MSCs,体外传代培养后比较P3、P5、P10细胞的生物学特性:采用细胞计数法与流式细胞仪检测细胞增殖活性和表面免疫标志物;染色体核型分析检测基因稳定性;成脂、成骨诱导分化检测多向分化潜能;SA-β-gal活性检测细胞衰老情况;蛋白芯片检测胞内及培养上清细胞因子表达水平。结果3个代次的hUC-MSCs形态特征及生长曲线相似,随着扩增代次的增加,细胞的增殖活性降低。3个代次的hUC-MSCs均高表达CD105、CD90、CD73等表面免疫标志物,不表达或低表达CD11b、CD19、CD34、CD45及HLA-DR。染色体核型分析证实3个代次的hUC-MSCs均为正常二倍体核型,染色体核型未发生结构畸形改变。3个代次的hUC-MSCs成脂和成骨分化潜能均未见显著性差异。SA-β-gal活性检测显示,随着扩增代次的增加,HUC-MSCs开始呈现衰老趋势。hUC-MSCs胞内及培养上清均能检测到IL-6、IL-1β、TNF-α、G-CSF和GM-CSF,胞内IL-6和IL-1β随着扩增代次增加升高;培养上清GM-CSF随着扩增代次增加下降。结论不同代次HUC-MSCs在表面免疫标志物、基因稳定性及其多向分化潜能等基本生物学特性方面均无显著性变化。随着扩增代次增加会分泌SASP,而致细胞老化,增殖活性降低。

基于本体的临床基因组学信息整合研究

目的由于生物医学信息存在一定的异质性,实现这些信息的整合将促进基因医学的发展。方法通过构建生物医学信息领域本体,将数据源的数据模式映射到一个虚拟模式之下,再统一这些虚拟模式;并结合生物医学术语本体,以期解决信息整合过程中所产生的语义问题。结果利用构建的临床基因组学信息系统可提升微阵列数据分析结果。结论基于本体的信息整合将为对未来的临床基因组学研究提供有力的信息支持。

抗线粒体抗体M2亚型IgG和IgA在原发性胆汁性肝硬化诊断中的作用

目的评价以新型天然M2抗原和BPO融合蛋白M2—3E（BPO）为靶抗原的酶联免疫吸附（ELISA）法（抗-M2-3E ELISA）检测抗线粒体抗体M2亚型（AMA-M2）IgG和IgA抗体在原发性胆汁性肝硬化（PBC）诊断中的敏感性、特异性以及其临床意义。方法分别用间接免疫荧光法（IFL）、以丙酮酸脱氢酶复合体为靶抗原的ELISA法（抗-PDC ELISA）、抗-M2-3E ELISA法检测107例PBC患者，87例疾病对照患者和26名健康体检者的AMA-M2 IgG和（或）IgA抗体。检测ALT、AST、总胆红素、白蛋白、γ-谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶、血清肌酐、IgG、IgM及IgA。对于符合正态分布的计量数据采用t检验，不符合正态分布者采用秩和检验。结果107例PBC患者抗-M2-3E ELISA法AMA-M2 IgG的检出率（90．6％）高于IFL法（81．3％）和抗-PDC ELISA法（72．9％），t值分别为4．32和6．03，P值均〈0．05。抗-M2-3E ELISA法检测AMA-M2 IgA的检出率为55．1％，特异性为97．2％；而总体AMA-M2IgG和（或）IgA的检出率为92．5％，特异性为95．2％。20例IFL检测AMA-M2 IgG为阴性的PBC患者中，抗-M2-3E ELISA法检出率为45％，AMA-M2 IgG和（或）IgA的检出率为55％，抗-M2-3E ELISA可以在超过一半的IFL阴性的患者中检出AMA-M2 IgG和（或）IgA。AMA-M2 IgG呈阳性的患者（97例）比呈阴性的患者（10例）有更加严重的组织学变化和更高的IgG、IgM和碱性磷酸酶水平。结论抗-M2-3E ELISA法具有比IFL和抗PDC ELISA法更高的敏感性和特异性，可作为第一轮AMA-M2的筛查。AMA-M2 IgG阳性可能说明该PBC患者有更加严重的疾病，但是AMA-M2 IgG和IgA部不能单独用于诊断PBC。

广州地区人腺病毒5型血清中和抗体阳性率初步调查

目的评估广州地区人群中人腺病毒5型(HAdV-5)中和抗体阳性率情况。方法采用以β-半乳糖苷酶(LacZ)为报告基因,结合CMV启动子的人重组腺病毒5型载体,运用化学发光法,检测209份免疫功能正常的成人血清样本中HAdV-5的中和抗体。结果 HAdV-5中和抗体的阳性率为82.3%(172/209)。HAdV-5中和抗体在<1:20(低滴度)、1:40-1:160(中滴度)、1:320-1:1280(高滴度)、>1:1280(超高滴度)时均能检测到,而且随着滴度的增加,阳性率逐渐升高。在20～40岁时HAdV-5中和抗体阳性率最高,在<20岁时HAdV-5阳性率最低。结论广州地区人群中针对HAdV-5的先存中和抗体阳性率高,应用基于该种DNA病毒作为载体进行基因疫苗及基因治疗的研究时,具有一定的局限性。

戊型病毒性肝炎患者56例血清抗线粒体抗体的检测及其临床意义

目的 探讨戊型病毒性肝炎患者血清抗线粒体抗体 (AMA)的检出情况及其临床意义。方法 应用酶联免疫吸附试验检测 5 6例戊型病毒性肝炎患者血清中的AMA ,并以 74例其它类型病毒性肝炎患者及 3 0例正常人血清作对照。结果 戊型病毒性肝炎患者血清中AMA阳性率为 91 0 7% ( 5 1/ 5 6) ;甲、乙、丙、病原未定型病毒性肝炎患者血清中AMA阳性例数分别为 0 / 7,6/ 18,5 / 12 ,3 / 19;乙型与丁型、乙型与戊型重叠感染者血清中AMA阳性例数分别为 3 / 6和 5 / 8;正常对照组中AMA阳性率为 10 % ( 3 / 3 0 )。结论 戊型肝炎中AMA阳性率不仅高于正常人而且明显高于乙型、丙型肝炎。

自身抗体分析在慢性胆汁淤积性肝病鉴别诊断中的价值

目的分析多种自身抗体在慢性胆汁淤积性肝病鉴别诊断中的价值。方法选取186例慢性胆汁淤积性肝病的患者,包括107例原发性胆汁性肝硬化(PBC)、48例原发性硬化性胆管炎(PSC)、18例AMA阳性的自身免疫性肝炎(AIH)、13例其他肝内胆汁淤积患者,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测这些患者血清中传统的抗AMA-M2、抗AMA-M2-3E(BPO)IgG、抗AMA-M2-3E(BPO)IgA、抗gp210抗体、抗Sp100抗体、抗PML抗体、抗SLA/LP抗体、抗ACA抗体。结果 107例PBC患者抗M2-3E ELISA法AMA-M2 IgG的检出率为86.9%。在AMA-M2 IgG阳性病人中抗gp210和抗Sp100抗体明显高于抗PML抗体、抗SLA/LP抗体、抗ACA抗体差别具有统计学意义(P<0.05)。27例AMA-M2阴性的PBC患者中有11例患者AMA-M2 IgG阳性,16例患者存在AMA-M2-3E IgG、抗Sp100抗体、抗gp210抗体1种或几种的组合。抗Sp100抗体、抗gp210抗体只在PBC患者和AMA阳性的自免疫性肝炎患者中被检测到,且抗gp210抗体出现在愈后差的患者中。结论 AMA和抗核抗体(ANA)检测在慢性胆汁淤积性肝病鉴别诊断中具有重要作用。

自身抗体谱在原发性胆汁性肝硬化诊断中的作用

目的分析原发性胆汁化肝硬化(PBC)患者的自身抗体谱和免疫功能,探讨其对PBC的诊断价值。方法用免疫印迹法检测107例PBC、100例疾病对照组和30例健康体检者血清中的抗线粒体抗体(AMA)M2亚型、AMAM2-3E(BPO)、抗Spl00抗体、抗gp210抗体、抗肝肾微粒体1型(LKM-1)抗体、抗早幼粒细胞性白血病(PML)抗体、抗肝特异性胞质抗体-1(LC-1)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体(SLA/LP)。结果 1.AMA-M2、AMAM2-3E(BPO)、抗Spl00抗体、抗PML抗体、抗gp210抗体对PBC诊断的敏感性、特异性分别为74.7%、90.2%,86.9%、95.1%,32.7%、97.1%,27.1%、97.5%,39.3%,98.3%。未检测到抗LKM-1抗体、抗LC-1抗体、抗SLA/LP抗体。2.在118例疾病对照组中AMA-M2、AMAM2-3E(BPO)、抗Spl00抗体、抗PML抗体、抗gp210抗体检出率分别为16%、11%、3%、1%、3%,未检测到抗LKM-1抗体、抗LC-1抗体、抗SLA/LP抗体。在正常对照组上述8种抗体的检出率均为0。3.AMA-M2呈阳性的患者(n=97)比呈阴性的患者(n=10)有更加严重的疾病。这可通过更加严重的组织学变化和更高的IgG,IgM和ALP平均值看出;抗gp210抗体呈阳性的患者肝功能衰竭发生率明显高于呈阴性的患者(P<0.05)。结论 PBC患者血清中可检测到多种自身抗体,其中抗Spl00抗体、抗PML抗体、抗gp210抗体在PBC诊断中特异性高,可协助诊断PBC。

恒河猴肠道腺病毒聚合酶基因片段的序列分析

目的 研究非人灵长类动物猴腺病毒的分子多样性。方法 采集圈养的57只恒河猴粪便样本，以腺病毒聚合酶基因为目的基因，用PCR方法进行扩增，对PCR阳性产物进行克隆、测序，并进行系统进化分析。结果 57只恒河猴粪便样本有12份样本中存在腺病毒DNA，系统进化分析提示这些序列主要可分为两大组：类SAdV-6组（2个非重复序列）和类SAdV-7组（9个非重复序列）。此外，有三个克隆，其最相似序列分别为：SAdV-1,SAdV-3和HAdV-52。结论 我们的研究证实了腺病毒的确在非人灵长类粪便中普遍存在，揭示了本研究所涉及动物肠道内腺病毒的多样性以及系统进化情况。

广州地区人腺病毒5型血清流行病学初步调查

目的评估广州地区人群中人腺病毒5型(HAdV-5)先存中和抗体的流行情况。方法采用以β-半乳糖苷酶(LacZ)为报告基因,结合CMV启动子的人重组腺病毒5型,使用化学发光法,检测了209份免疫功能正常的成人血清样本中HAdV-5的中和抗体阳性率情况。结果 HAdV-5中和抗体的阳性率为82.3%(172/209)。HAdV-5中和抗体在<1/20(低滴度)、1/40-1/160(中滴度)、1/320-1/1280(高滴度)、>1/1280(超高滴度)时均能检测到,而且随着滴度的增加,阳性率逐渐升高。在20～40岁时HAdV-5中和抗体阳性率最高,在<20岁时HAdV-5阳性率最低。结论广州地区人群中针对HAdV-5的先存中和抗体阳性率高,应用基于该种DNA病毒作为载体进行基因疫苗及基因治疗的研究时,具有一定的局限性。

携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体的构建

目的采用体外连接技术构建含红色荧光蛋白(RFP)报告基因的重组腺病毒载体,为基因治疗与基因疫苗研究提供重要工具。方法将pTurbo RFP-N上的含红色荧光蛋白基因片段,经酶切连接定向克隆至转移载体pShuttle上,构成重组质粒pShuttle-TurboRFP-N。用I-CeuI/PI-SceI双酶切重组质粒pShuttle-TurboRFP-N和骨架质粒pH5′040 pkGFP-II,回收目的片段,连接,获得重组腺病毒载体pH5.′040.CMV.RFP-N。将其线性化后,经脂质体介导转染至AD293细胞内包装出重组腺病毒颗粒。通过荧光显微镜观察其在AD293细胞内的包装效率和RFP表达情况。扩增并再次感染AD293细胞检测病毒颗粒感染能力,并测定其生物活性及滴度。结果经酶切鉴定,证明已正确构建重组腺病毒载体AdH5.′040.CMV.RFP-N;经AD293细胞包装成具有感染性的病毒颗粒,并能在真核细胞中高效表达目的基因;扩增纯化后获得重组腺病毒颗粒数为3.6×1012vp/mL,滴度达1×1010pfu/mL。结论成功构建了携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体,并能够在AD293细胞中高效地表达,为基因治疗与基因疫苗研究提供重要工具。