BMP7过表达慢病毒载体构建及其对小鼠主动脉平滑肌细胞钙化的影响

目的构建骨形态发生蛋白7(BMP7)过表达慢病毒载体,分析BMP7过表达对小鼠主动脉内皮细胞Jagged1表达的影响及其对共培养血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响。方法根据目的基因信息Mouse-BMP7(NM_007557.3)和质粒信息pLVX-zsGreen-C1进行基因序列合成,构建BMP7过表达慢病毒。qPCR检测BMP7过表达慢病毒感染效率;Western blot检测其感染的小鼠主动脉内皮细胞Jagged1蛋白表达。将过表达BMP7慢病毒感染的内皮细胞与VSMCs共培养,茜素红染色观察共培养后VSMCs钙化情况。结果成功构建BMP7过表达慢病毒载体并转染至小鼠主动脉内皮细胞。qPCR检测结果提示,与正常对照组比较,BMP7过表达组的BMP7 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01),空载体对照组BMP7 mRNA无显著变化(P>0.05)。Western blot结果显示,BMP7过表达组内皮细胞Jagged1蛋白表达水平较正常对照组显著降低(P<0.01),而空载体对照组内皮细胞Jagged1蛋白水平较正常对照组无显著改变(P>0.05)。茜素红染色结果提示,与感染过表达BMP7慢病毒的内皮细胞共培养后,VSMCs的钙化程度明显增加。结论成功构建小鼠BMP7过表达慢病毒载体,并发现过表达BMP7可以降低小鼠主动脉内皮细胞Jagged1表达,并促进共培养的VSMCs钙化。

逆向建轨单内嵌分支覆膜支架技术修复复杂B型主动脉夹层1例

B型主动脉夹层是心血管危急重症之一,具有发病急骤、进展快、病死率极高的特点。目前临床上可采用外科手术或腔内修复术治疗,其中腔内修复术相较于外科手术具有创伤小、恢复快、预后好等优势[1],已逐渐成为B型主动脉夹层治疗的首选方式。但对于破口累及左锁骨下动脉的B型主动脉夹层,过去常因锚定区不足等原因,一度成为腔内修复术治疗的相对禁忌证。

Jagged1真核表达质粒构建及其对VSMCs增殖凋亡的影响

目的构建大鼠Jagged1真核表达质粒,分析Jagged1过表达对血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecells,VSMCs)增殖和凋亡的影响。方法从带Jagged1全长基因质粒pBOS-SN3T中酶切获得目的基因,用载体pCMV-IRES-GFP构建重组质粒,转染至VSMCs。Western blot检测Jagged1蛋白表达变化,[3 H]-TdR掺入法检测细胞增殖,流式细胞仪(FACS)检测细胞凋亡。结果成功构建大鼠Jagged1真核表达载体并转染至VSMCs,经G418筛选后转染率可达90%以上,转染上调了VSMCs的Jagged1蛋白水平约6倍。转染p-rJagged1后VSMCs的增殖能力明显降低[(10 265±1 004)cpm/孔vs(17 584±1 587)cpm/孔,P<0.01],而凋亡明显增高[总凋亡率:(32.35±2.86)%vs(15.24±1.27)%;早期凋亡率:(22.47±2.54)%vs(10.22±0.98)%;P<0.01]。结论成功构建大鼠Jagged1真核表达质粒,过表达Jagged1可抑制VSMCs增殖并促进其凋亡。

表面活性剂存在下，以3，5－di－Cl－PADAP分光光度法测定微量铁的研究

研究了２－（３，５－二氯－２－吡啶偶氮）－５－二乙氨基酚（３，５－ｄｉ－Ｃｌ－ＰＡＤＡＰ）与Ｆｅ（Ⅱ）的显色条件。在非离子表面活性剂乳化剂ＯＰ存在下，于ｐＨ３．５～６．０的乙酸钠－乙酸缓冲介质中，Ｆｅ（Ⅱ）与３，５－ｄｉ－Ｃｌ－ＰＡＤＡＰ的络合反应瞬时完成，形成１：２的紫红色稳定的络合物，该络合物有两个最大的吸收峰分别为５７０ｎｍ和７５５ｎｍ，相应的表观摩尔吸光系数分别为８．４×１０４和３．９×１０４，铁含量在０～２０μｇ／１０ｍＬ范围内符合比尔定律。选用７５５ｎｍ作为工作波长，可高选择性地测定多种样品中的微量Ｆｅ（Ⅱ），方法灵敏、操作简便、结果满意。

交互式资源平台CBL模式在介入手术教学中的运用

如何提高心血管专科医师介入手术的培训和教学，是专科介入手术发展的重点课题之一。以病例为基础的讨论式教学学习（CaseBased Learning，CBL）模式的核心是“以病例为先导，以问题为基础，以学生为主体，以教师为主导”的讨论式教学法。交互式教学资源平台是基于现代教育技术，建立以文本、图片、幻灯、视频等载体的数据库，并以网络技术为基础，构建一个教学资源平台，在平台基础上实现带教老师和培训学员间交互作用的目标。鉴于此，我们设想通过交互式资源平台建立了课外CBL教学资源库，可能会取得更好的教学效果。

规范化培训医生医患沟通学教学的现实问题及思考

医患沟通是医学教育的一项基本要求,住院医师规范化培训(简称规培)是医学生毕业后教育的重要组成部分,规培期间加强医患沟通学教学十分必要。目前规陪生医患沟通教学存在学生兴趣不高,教师经验有限,教学机构考评不完善等问题,文章拟对目前我院规培医生医患沟通学教学存在的问题进行总结,并对解决的方法进行思考。

正常高值血压人群血浆硫化氢水平与其高血压发生的关系

目的:研究正常高值血压人群血浆硫化氢(H2S)水平与其高血压发生的相关性。方法:回顾性分析1056例参加健康查体的正常高值血压者,去蛋白法检测血浆H2S含量;随访24个月后,按是否进展为高血压分为高血压组(226例)和无高血压组(830例),比较两组间血浆H2S水平差异;四分位法分析H2S含量与高血压发生率的关系;Logistic回归分析法研究H2S水平是否为高血压发生的危险因素。结果:高血压组血浆H2S含量明显低于无高血压组[(32.54±3.61)μmol/L比(50.62±3.84)μmol/L,P<0.01];随H2S含量逐渐降低(<60.72μmol/L,<51.84μmol/L,<42.97μmol/L,<34.09μmol/L),高血压发生率逐渐升高(13.3%,15.0%,27.8%,35.8%,P<0.01);Logistic回归分析显示血浆H2S含量是导致高血压发生的危险因素(OR=2.821,P<0.001)。结论:血浆硫化氢含量降低,可能是促进正常高值血压者向高血压进展的危险因素。

代谢综合征对内皮祖细胞功能的影响及相关临床意义

代谢综合征是多种心血管疾病危险因子的聚集状态,主要后果是冠心病等疾病的高发病率和死亡率。代谢综合征中各种代谢紊乱几乎都可以影响内皮祖细胞修复损伤血管的功能,很可能是上述现象的机制之一。以内皮祖细胞作为靶点,可以为临床降低代谢综合征患者的冠心病发病风险提供新的思路。

miR-29a抑制KLF4对血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的探讨miR-29a是否可通过抑制KLF4表达影响血管平滑肌细胞(VSMCs)的表型转化。方法原代培养大鼠VSMCs。采用荧光素酶报告基因系统验证KLF4是否为miR-29a靶基因。将VSMCs分为转染miR-29a表达质粒组、转染阴性表达质粒组及未转染质粒组,采用Western blotting检测KLF4及VSMCs收缩表型蛋白的表达,[3H]-TdR掺入法检测VSMCs的增殖能力。结果共转染野生型KLF4荧光素报告基因+miR-29a表达质粒的实验组中,荧光素酶活性显著降低。转染miR-29a表达质粒组KLF4蛋白表达水平(0.36±0.02)显著低于未转染组(1.52±0.06)及转染阴性表达质粒组(1.55±0.05,P<0.01)。与未转染及转染阴性表达质粒组相比,转染miR-29a表达质粒组VSMCs收缩表型相关蛋白SMMHC、SM-22α、calponin的表达均明显增高,增殖能力明显降低。结论 miR-29a可靶向抑制KLF4表达,进而维持VSMCs的收缩表型,降低其增殖能力。

应用支架内锚定技术开通前降支闭塞病变1例

冠状动脉闭塞、分叉及扭曲病变是目前冠脉介入治疗中最具挑战性的病变类型,但由于局部血管解剖结构或支架的阻力,介入治疗器械（如球囊等）无法通过病变部位,无法进行扩张或支架置入,导致手术失败。Fujita等[1]发明的边支锚定技术对促进介入治疗器械通过闭塞病变有巨大的帮助,但在长期的临床实践中发现此法有弊端,如血管内球囊扩张锚定导致的血管夹层,血栓及闭塞等安全问题;球囊锚定扩张压力小于6atm，降低了锚定力度及器械通过性。

儿童埃博拉病毒病的诊治策略

2014年在西非暴发了有史以来最严重的埃博拉疫情,大量儿童被埃博拉病毒感染且病死率极高。儿童埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD)表现出与成人不同的临床特征,早期临床表现不具有特异性,RT-PCR检测是儿童EVD实验室诊断的金标准,纠正脱水及电解质紊乱、营养支持、预防和控制感染,防治休克及多器官功能衰竭等是当前行之有效的治疗策略。

B型利钠肽对小鼠腹腔巨噬细胞MCP-1蛋白表达的双向调节作用

目的观察B型利钠肽(B type natriuretic peptides,BNP)在小鼠腹腔巨噬细胞内介导单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)蛋白的表达,探讨BNP在小鼠腹腔巨噬细胞中调节炎症反应的作用。方法原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,分别予不同剂量的BNP、BNP+GC-A受体抑制剂(HS-142-1)、BNP+肿瘤坏死因子-α(TNF-α)+HS-142-1预处理细胞,设立空白对照组。提取培养细胞蛋白,采用Western blot法检测细胞内MCP-1蛋白表达。结果在小鼠巨噬细胞内BNP能够促进MCP-1蛋白表达,该作用可被BNP抑制剂HS-142-1所抑制;且TNF-α在巨噬细胞中促进MCP-1分泌的作用可以被BNP抑制。结论BNP能够促进巨噬细胞释放MCP-1,促进炎症反应的发生;同时BNP能够抑制TNF-α促进MCP-1蛋白分泌的作用,提示BNP具有炎症反应的双向调节作用。

提高培养内皮祖细胞成功率的探讨

目的探讨培养大鼠内皮祖细胞的最佳适宜条件。方法通过密度梯度离心法分离培养来源于大鼠骨髓及脾脏的单核细胞,观察在不同条件下[pH值、二氧化碳(CO2)浓度、血清浓度、取材大鼠月龄、内皮祖细胞来源]培养内皮祖细胞的成功率。结果 pH 7.两组内皮祖细胞培养的成功率明显高于pH 7.4组(P<0.05),5.5%CO2浓度组内皮祖细胞培养的成功率明显高于5.0%CO2浓度组(P<0.05),1月龄组内皮祖细胞培养的成功率明显高于2月龄组(P<0.05),血清浓度及内皮组细胞来源对细胞培养的成功率无明显影响(P>0.05)。结论大鼠内皮祖细胞适宜在pH 7.2的DMEM-L培养液及培养箱CO2浓度为5.5%的环境下生长,且年幼的大鼠取材培养的成功率高。

他汀类药物降低急性冠脉综合征外周血Th1/Th2细胞比率

目的探讨在急性冠脉综合征(ACS)中应用他汀类药物对Th1和Th2细胞亚群的影响。方法将56例ACS按照入院前是否应用他汀类药物分为应用他汀组(A组,30例)和未使用他汀组(B组,26例),用流式细胞术检测入院时Th1和Th2细胞比例并进行两组间比较;入院治疗(B组加用他汀)1月后,再次复查和比较Th1和Th2细胞,同时在B组将治疗后和治疗前结果进行自身对比。结果A组在入院时Th1细胞比例较B组低,Th2细胞比例无显著性差异;经加用他汀治疗1月后,两组间Th1和Th2细胞比例均无显著性差异。B组治疗后Th1细胞较治疗前有显著降低。结论在ACS中应用他汀类药物治疗能降低Th1细胞激活程度,改善Th1/Th2细胞比值的不平衡。

糖调节受损的急性冠脉综合征血清IL-6和hs-CRP变化及临床意义

目的对合并糖调节受损(IGR)的急性冠状动脉综合征(ACS)患者,探讨其血清中白介素-6(IL-6)和高敏C反应蛋白(hs-CRP)的变化及临床意义。方法入院治疗的共56例ACS患者,按照标准方法行空腹血糖测定和口服葡萄糖耐量(OGTT)试验,经筛除显性糖尿病后分为ACS合并IGR 30例(A组)和不合并IGR的ACS 26例(B组),另选取冠脉造影正常者20例为对照组(C组)。除查体和常规实验室检查外,三组均分离空腹血清测定IL-6和hs-CRP水平。结果A组病人甘油三脂(TG)水平和体重指数(BMI)同时较B组增高(P<0.05)。A组和B组血清IL-6和hsCRP水平均较C组高,其中A组较B组升高更明显(P均<0.05),IL-6和hs-CRP呈正相关(r=0.671,P<0.01)。结论合并IGR的ACS患者全身炎症反应程度更剧烈,在治疗上应加强多种措施综合干预,以改善预后。

糖调节受损的急性冠脉综合征冠脉病变及外周血Th细胞变化特点

目的探讨合并糖调节受损(IGR)的急性冠脉综合征(ACS)冠脉病变及外周血Th细胞变化特点。方法纳入住院的ACS患者56例,根据OGTT试验结果分为两组:A组:合并IGR的ACS 30例,B组:糖代谢正常的ACS 26例。所有患者均进行冠脉造影,计算冠脉病变Gensini积分,同时分离外周血单个核细胞(PBMC)培养48h。给予PHA刺激后,检测Th1型细胞因子INF-γ和Th2型细胞因子IL-4的水平。结果与B组比较,A组冠脉病变Gensini积分增加(13.64±3.11比9.23±2.72,P<0.05);A组代表Th1型细胞激活程度的IFN-γ分泌增加,Th1/Th2比值较B组增高(P均<0.05)。结论与糖代谢正常的ACS比较,合并IGR的ACS冠脉病变范围更广泛,炎症程度更重,临床治疗中应多方面强化干预。

经导管主动脉瓣置换术后早期左室舒张末期内径改善对患者预后的影响

目的 探讨重度主动脉瓣狭窄(aortic valve stenosis, AS)患者经导管主动脉瓣置换术(transcatheter aortic valve replacement, TAVR)后早期左室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter, LVEDD)变化及该变化对TAVR预后的影响。方法 采用回顾性队列研究。纳入2017年12月至2021年12月在陆军军医大学第二附属医院接受TAVR治疗的重度AS患者113例。依据术后超声心动图结果将术后LVEDD较术前改善≥1.8 mm定义为早期LVEDD改善,将患者分为有改善组和无改善组。患者通过门诊或电话完成术后1年随访并收集患者心脏超声、心电图及手术相关并发症等数据。研究终点为主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events, MACE),包括1年的全因死亡、心肌梗死或心绞痛、心力衰竭再入院的复合终点。结果 患者年龄54~87(71.2±6.5)岁,其中女性59例(52.2%)。患者术后(平均术后4 d)LVEDD为(48.9±6.5)mm,较术前明显缩短[(50.7±7.3)mm,P<0.001];术后LVEDD早期改善患者53例(46.9%)。单因素Cox回归分析发现术前合并糖尿病(HR:2.635,95%CI:1.013~6.858,P=0.047)、术后起搏器植入(HR:3.518,95%CI:1.336~9.263,P=0.011)是1年时MACE的危险因素;而早期LVEDD改善是其保护因素(HR:0.176,95%CI:0.052~0.601,P=0.006)。多因素Cox分析发现早期LVEDD改善仍是1年时MACE的独立保护因素(HR:0.231,95%CI:0.062~0.857,P=0.029)。结论 TAVR术后早期患者LVEDD出现不同程度好转,早期出现LVEDD改善的患者1年时发生MACE的累计风险较无改善患者低。