高致病性毒力岛Irp1介导的细菌对Vero细胞黏附作用

高致病性毒力岛(HPI)已经在多种类型大肠杆菌中被发现。为了解HPI-Irp1在细菌致病中的作用,通过生物软件DNAStar的分析,筛选出HPI中irp1和fyuA基因上10个表位作用优势较强的区域。设计特异性引物10对,进行PCR扩增,将获得的PCR产物,插入原核表达载体pET32a,构建重组质粒;将获得的重组质粒转化进入菌毛阴性宿主菌BL21,获得的重组菌用IPTG诱导表达后与Vero细胞混合进行体外作用。结果表明:带有irp1-1基因片段的重组菌BL21-rpET32a-irp1-1表现出对Vero细胞较强的聚集黏附作用,空载体对照和宿主菌对照均未出现相关现象。因而推测irp1-1基因片段编码的产物在细菌对宿主致病过程中,介导了细菌与宿主细胞的相互作用。

一株致鸡产蛋下降新城疫病毒的分离与分子鉴定

某鸡场蛋鸡群产蛋大幅下降,采集病鸡不同脏器研磨,接种SPF鸡胚分离病毒,结果发现输卵管研磨液接种的鸡胚死亡,收集死亡胚尿囊液进行血凝和血凝抑制试验鉴定病毒,证实为新城疫病毒。采用RT-PCR方法扩增分离该病毒的F基因,克隆测序,并对该序列进行分析,结果表明该毒株为基因Ⅶ型新城疫病毒,裂解位点序列显示该毒株属强毒。

致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌外膜蛋白A前体蛋白的克隆表达

以致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌分离株G8107菌株基因组DNA为模板,用PCR法扩增ompA precursor基因,PCR产物用EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切,酶切产物回收与相同黏性末端的表达载体pET-32a(+)连接构建表达ompA precursor的重组质粒,将此重组质粒转化入表达宿主菌BL21(DE3),抽提质粒,酶切鉴定及测序正确后诱导表达。对转化菌株以IPTG进行诱导后,裂解细菌,离心,上清进行SDS-PAGE鉴定。测序结果显示,ompA precursor基因大小为1 014 bp,编码338个氨基酸残基,蛋白相对分子质量约为36。原核表达产物经SDS-PAGE分析表明,以28℃1.0 mmol/L的IPTG诱导6 h,该基因表达效果最好。经Western Blot检测,表达的重组蛋白可与抗His标签蛋白单抗反应。

对苏南地区城市化过程中环境问题的思考

对苏南地区城市化的特征和城市化过程中出现的环境问题进行了分析，指出城市化发展的必由之路是实行可持续发展。

致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌30S核糖体蛋白S6的原核表达及纯化

根据已发表的30S核糖体蛋白S6(RPS6)基因序列,设计合成了1对针对RPS6的特异性引物,用PCR方法从致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌中扩增出RPS6基因,并将扩增的目的片段克隆至pGEM-TEasy载体中。测序正确后将RPS6基因片段克隆进表达载体pET-32a(+)中,提取pET-32a(+)-RPS6质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达。结果显示,PCR产物大小为396bp,与GenBank中同源序列的相似性为99.7%。SDS-PAGE分析结果表明,构建的重组RPS6在大肠杆菌中获得了可溶性表达,分子质量约为34ku,大小与预期相一致。HisTrap FF镍柱纯化大量表达的RPS6融合蛋白(His-RPS6),证实得到了高纯度的重组蛋白,为该蛋白功能研究提供了条件。