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直标鼠抗人CD14单克隆抗体2F9-FITC的研制及鉴定 被引量:6
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作者 宁铂涛 汤永民 +7 位作者 沈红强 张玲燕 杨世隆 陈英虎 宋华 石淑文 钱柏芹 徐卫群 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2005年第2期167-171,190,共6页
目的研制异硫氰酸荧光素(Fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记的直标单克隆抗体2F9-FITC,用于白血病的免疫分型诊断。方法2F9杂交瘤细胞的亚克隆,2F9腹水的制备、纯化、纯度鉴定按照常规方法进行;参考改良Marsshall氏法,制备FITC标记的... 目的研制异硫氰酸荧光素(Fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记的直标单克隆抗体2F9-FITC,用于白血病的免疫分型诊断。方法2F9杂交瘤细胞的亚克隆,2F9腹水的制备、纯化、纯度鉴定按照常规方法进行;参考改良Marsshall氏法,制备FITC标记的2F9-FITC单抗;通过流式细胞术鉴定单抗亚型,比较2F9-FITC和标准CD14-FITC在不同类型白血病细胞上的表达情况。结果制备了大量高纯度的IgG1κ亚型2F9单抗,成功研制了直标单抗2F9-FITC,A495/A280比值为0.44;2F9-FITC与CD14-FITC在单核细胞上反应的阳性细胞百分数分别为84.50%及90.08%,而在淋巴细胞仅为0.52%和1.01%;2F9-FITC与标准CD14-FITC在各类白血病细胞上的阳性细胞百分数的差异不显著(n=23,t=0.922,P=0.367)。结论研制的2F9-FITC能够替代进口的同类高质量单抗试剂,用于单核细胞相关性白血病的免疫诊断。 展开更多
关键词 抗体 单克隆 抗原 CD14 异硫氰酸荧光素 白血病
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CD117/CD11b在急性早幼粒细胞白血病不同病期的表达变化 被引量:5
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作者 沈红强 汤永民 +4 位作者 宋华 石淑文 杨世隆 徐卫群 钱柏芹 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期644-648,共5页
为了了解CD117/CD11b在急性早幼粒白血病细胞初诊及治疗后的表达变化,探讨其表达变化对APL诊断和预后的意义,采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色或四色流式细胞术细胞表面及浆内分化抗原分析,应用RT-PCR技术检测骨髓中PML/RARα... 为了了解CD117/CD11b在急性早幼粒白血病细胞初诊及治疗后的表达变化,探讨其表达变化对APL诊断和预后的意义,采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色或四色流式细胞术细胞表面及浆内分化抗原分析,应用RT-PCR技术检测骨髓中PML/RARα融合基因的mRNA表达。结果表明APL与CML慢性期都高表达MPO、CD13和CD33,而几乎不表达CD34、HLA-DR及T,B淋巴系列标志。有14.5%的APL患者表达CD56,有48.2%的APL患者表达CD15,CD15在APL的表达明显低于CML慢性期(48.2%vs95.2%,P<0.01)。有78.3%的APL患者表达CD117,而在CML慢性期不表达CD117。CD11b在APL的表达率仅为16.9%,而在CML慢性期几乎都表达CD11b。有72.3%的APL患者呈CD117+CD11b-表型,而在CML慢性期患者细胞中均未见此表型,它几乎均呈CD117-CD11b+表型。11例表型为CD117+CD11b-的APL患者经治疗获完全缓解,在2个月以后CD117阳性细胞百分率均小于5%,同时细胞高表达CD11b,呈CD117-CD11b+表型。检测31例APL患者PML/RARα融合基因,25例该融合基因阳性,阳性率为80.6%,其中16例(64%)为PML/RARα基因L型,9例(36%)为S型。16例PML/RARα融合基因L型APL患者CD117表达有14例(87.5%),9例S型CD117表达有4例(44.4%),6例PML/RARα融合基因阴性APL患者CD117表达有2例(33.3%)。结论CD117/CD11b表型分析有助于APL与其它AML亚型及CML慢性期细胞的鉴别,CD117+CD11b-表型有助于APL细胞和APL患者缓解恢复期的良性髓系增生细胞的区分,对APL患者的治疗方案选择、预后判断以及发病机理的研究等均有重要价值。 展开更多
关键词 CD117/CD11b 急性早幼粒细胞白血病 免疫表型 流式细胞术 PML/RARΑ融合基因
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CD56在急性白血病细胞中的表达及临床意义 被引量:3
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作者 张瑛 汤永民 +5 位作者 杨世隆 沈红强 钱柏芹 宋华 石淑文 徐卫群 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第3期187-190,共4页
为了探讨CD5 6在急性白血病细胞中的表达情况及意义 ,采用多色流式细胞术 (FCM )对 70例急性白血病患者细胞表面CD5 6及其它白细胞分化抗原表达进行了分析。结果表明 ,70例中有 16例 ( 2 2 .86 % )表达CD5 6 ,急性髓性白血病 (AML)的CD... 为了探讨CD5 6在急性白血病细胞中的表达情况及意义 ,采用多色流式细胞术 (FCM )对 70例急性白血病患者细胞表面CD5 6及其它白细胞分化抗原表达进行了分析。结果表明 ,70例中有 16例 ( 2 2 .86 % )表达CD5 6 ,急性髓性白血病 (AML)的CD5 6阳性表达率 ( 15 / 31,4 8.39% )明显高于急性淋巴细胞白血病 (ALL) ( 1/ 35 ,2 .86 % )(P <0 .0 1)。CD5 6在AML各亚型中表达也有差异 ,AML M0 , M1和 M2 中阳性率 ( 11/ 15 )明显高于AML M3 , M4和 M5( 4 / 16 ) (P =0 .0 13)。 15例CD5 6 +的AML病例中表达HLA DR 13例 ( 4 1.94 % ) ,两者呈明显正相关(r =0 .4 39,n =31,P =0 .0 14 )。结论 :CD5 6主要在AML中表达 ,对AML的诊断。 展开更多
关键词 急性白血病 CD56 免疫表型 多色流式细胞术 AML 急性髓性白血病
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急性白血病细胞CD19和CD20表达比较(英文) 被引量:2
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作者 宁铂涛 汤永民 +2 位作者 陈英虎 沈红强 钱柏芹 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期943-947,共5页
本研究目的是观察CD19和CD20在急性白血病(AL)细胞中的表达与分布,为急性B系白血病靶向分子 的选择提供合理依据。采用27个荧光直标单克隆抗体及CD45/SSC双参数设门多色流式细胞术对321例AL细胞 进行免疫诊断和分型,并对CD19和CD20在各... 本研究目的是观察CD19和CD20在急性白血病(AL)细胞中的表达与分布,为急性B系白血病靶向分子 的选择提供合理依据。采用27个荧光直标单克隆抗体及CD45/SSC双参数设门多色流式细胞术对321例AL细胞 进行免疫诊断和分型,并对CD19和CD20在各种类型AL细胞中的表达情况进行分析。结果表明,在116例B系 ALL病例中,CD19持续稳定表达,其阳性率(115/116,99.1%)明显高于CD20(33/116,28.4%,P=0.001);在 17例含B系成分的混合型白血病(acutemixedlineageleukemia,AMLL)细胞中,前者的阳性率也明显高于CD20(P <0.01),而在29例T细胞系ALL和7例T/MyHAL细胞中,两者均无表达;在152例急性髓系白血病(AML)细胞 中,CD19和CD20阳性率均很低,分别为7.2%和2.0%;CD19和CD20在B ALL及B/MyAMLL组中的荧光强度差 别有显著性(t=20.68,P<0.001);CD19和CD20的特异性分别为92.3%(132/143)和92.7%(38/41),敏感 性分别为99.2%(132/133)和28.6%(38/133),前者敏感性明显高于后者(χ2=144.018,P=0.001)。结论: CD19在B细胞系细胞的各分化阶段上持续稳定表达,反应谱比CD20宽,特异性及敏感性均高,尤其是其敏感性显 著高于后者。这提示CD19抗原分子可能成为治疗B系ALL的最佳靶点。 展开更多
关键词 急性白血病 CD19 CD20 流式细胞术
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ABCG2在白血病细胞中的表达及其意义 被引量:3
5
作者 张玲燕 汤永民 +5 位作者 沈红强 宁铂涛 钱柏芹 石淑文 杨世隆 徐卫群 《浙江医学》 CAS 2004年第11期803-805,853,共4页
目的探讨三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)在白血病细胞膜上的表达规律及其意义。方法应用CD45/SSC参数设门多色流式细胞术分析61例白血病患者白血病细胞膜ABCG2及其他白血病细胞相关抗原的表达情况。结果61例急慢性白... 目的探讨三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)在白血病细胞膜上的表达规律及其意义。方法应用CD45/SSC参数设门多色流式细胞术分析61例白血病患者白血病细胞膜ABCG2及其他白血病细胞相关抗原的表达情况。结果61例急慢性白血病患者的白血病细胞ABCG2表达阳性率为36.07%。ABCG2表达阳性率,急性白血病(AL)患者眼34.48%(20/58)演与慢性白血病(CL)患者眼66.67%(2/3)演鸦儿童患者眼26.09%(6/23)演与成人患者眼42.11%(16/38)演差别均无显著性意义(均P>0.05);急性髓细胞性白血病(AML)患者眼46.67%(14/30)演高于急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者眼16.67%(4/24)(P<0.05)演;AML患儿眼55.56%(5/9)演也高于ALL患儿眼7.14%(1/14)(P<0.05)演。ABCG2与另一耐药蛋白P糖蛋白(P-gp)及其他细胞表面抗原的表达均无关(r=0.152、-0.075、-0.063、0.026、-0.149,均P>0.05),与髓系标志CD13的表达有关(r=0.307熏P<0.05)。结论ABCG2在AML患儿中的表达较高,其高表达可能导致AML患儿临床耐药。ABCG2和P-gp可能参与了不同的白血病耐药机制。 展开更多
关键词 ABCG2 白血病 基因表达 三磷酸腺苷 多药耐药性 流式细胞术
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非亲缘异基因脐带血造血干细胞移植治疗儿童白血病二例 被引量:1
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作者 汤永民 宋华 +8 位作者 杨世隆 石淑文 魏健 陈英虎 张玲燕 陈文君 陆亚红 沈红强 钱柏芹 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2007年第6期626-628,共3页
关键词 脐带血造血干细胞移植 造血干细胞移植治疗 异基因骨髓 儿童白血病 外周血造血干细胞移植 非亲缘 自体造血干细胞移植 血液系统恶性肿瘤
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儿童急性早幼粒细胞白血病46例长期随访及预后分析 被引量:1
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作者 徐晓军 石淑文 +11 位作者 汤永民 宋华 杨世隆 魏健 徐卫群 潘斌华 陈英虎 赵芬英 沈红强 钱柏芹 张玲燕 宁铂涛 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 2007年第1期28-32,共5页
目的探讨儿童急性早幼粒细胞白血病(APL)的治疗、长期生存和预后因子。方法对该院1998年4月至2005年10月收治的APL患儿46例进行临床分析。诱导缓解采用全反式维甲酸(ATRA)+柔红霉素(DNR)或吡柔吡星(THP),巩固治疗采用大剂量阿糖胞苷与DA... 目的探讨儿童急性早幼粒细胞白血病(APL)的治疗、长期生存和预后因子。方法对该院1998年4月至2005年10月收治的APL患儿46例进行临床分析。诱导缓解采用全反式维甲酸(ATRA)+柔红霉素(DNR)或吡柔吡星(THP),巩固治疗采用大剂量阿糖胞苷与DA(柔红霉素+阿糖胞苷)、HA(高三尖杉酯碱+阿糖胞苷)、EA(足叶乙甙+阿糖胞苷)方案交替给药,维持阶段ATRA与DA,HA,EA方案交替治疗,总疗程为2.5年。结果39例患儿进行了正规治疗,36例(92.3%)获完全缓解(CR)。39例患儿1年、3年和5年总体生存率(OS)分别为(86.1±5.8)%,(76.1±7.5)%和(70.2±8.9)%,1年、3年、5年的无事件生存率(EFS)分别是(78.4±6.8)%,(63.6±8.7)%和(53.1±10.0)%。5年累积复发率(CIR)28.6%。其中WBC≤10.0×109/L者的5年OS[(81.4±10.3)%]明显高于WBC>10.0×109/L者[(51.6±14.7)%,P<0.05]。获CR的PML/RARα融合基因短型(S型)的患儿5例最后全部死亡,而长型(L型)患儿13例无死亡发生,两者差异有统计学意义(P<0.01)。结论ATRA+DNR或THP诱导缓解治疗儿童APL安全、有效,可以作为初发儿童APL的标准诱导治疗方案。联合蒽环类及阿糖胞苷等药物化疗能明显改善长期生存率。高WBC和S型PML/RARα融合基因阳性的患儿预后不佳。 展开更多
关键词 白血病 早幼粒 急性 预后 生存分析 儿童
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抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单抗轻重链可变区基因克隆与序列分析 被引量:1
8
作者 宁铂涛 汤永民 +2 位作者 曹江 沈红强 钱柏芹 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2007年第4期348-354,共7页
目的:获取抗人CD14单克隆抗体(单抗)ZCH-7-2F9(简称2F9)轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,为2F9单链抗体(ScFv2F9)的构建奠定基础。方法:复苏2F9和NS-1细胞株,并亚克隆2F9细胞株,从其最佳克隆93A10提取总RNA,RQ1 RNase-Free DNase处... 目的:获取抗人CD14单克隆抗体(单抗)ZCH-7-2F9(简称2F9)轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,为2F9单链抗体(ScFv2F9)的构建奠定基础。方法:复苏2F9和NS-1细胞株,并亚克隆2F9细胞株,从其最佳克隆93A10提取总RNA,RQ1 RNase-Free DNase处理污染的DNA,与NS-1细胞进行同步对照,通过RT-PCR,扩增获得2F9单抗VL基因和VH基因,分别克隆入pGEM○R-T Easy载体,然后转化DH5α细菌,酶切鉴定并纯化阳性重组子,测序后进行在线核苷酸序列分析。结果:2F9单抗VL基因全长321 bp,编码107个氨基酸,归属于小鼠Ig的Vκ基因,氨基酸序列分析结果显示,VL含有明确的4个框架区(FR)和3个抗原决定簇互补区(CDR),在第23位和第88位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸;其VH基因全长360 bp,编码120个氨基酸,归属于小鼠Ig的VH基因,氨基酸序列分析结果显示,VH含有明确的4个框架区和3个抗原决定簇互补区,在第22位和第96位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸。结论:经核苷酸序列分析证明所克隆的基因分别是2F9单抗的VL和VH基因,为2F9基因工程抗体研究奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 抗体 单克隆 抗原 CD14 序列分析 免疫球蛋白可变区/遗传学 基因
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急性白血病细胞中CD19的表达 被引量:1
9
作者 陈英虎 汤永民 +6 位作者 沈红强 宋华 杨世隆 石淑文 钱柏芹 徐卫群 宁铂涛 《实用肿瘤杂志》 CAS 北大核心 2004年第1期32-35,共4页
目的 观察 CD19在急性白血病 (AL )中的表达与分布 ,为白血病的诊断、鉴别以及导向治疗提供依据。方法 采用 2 7个荧光直标单克隆抗体 (单抗 )及 CD45/ SSC双参数设门多色流式细胞术对 3 2 1例 AL细胞进行免疫诊断和分型 ,并对 CD19... 目的 观察 CD19在急性白血病 (AL )中的表达与分布 ,为白血病的诊断、鉴别以及导向治疗提供依据。方法 采用 2 7个荧光直标单克隆抗体 (单抗 )及 CD45/ SSC双参数设门多色流式细胞术对 3 2 1例 AL细胞进行免疫诊断和分型 ,并对 CD19在各类型 AL细胞中的表达情况进行分析。结果 在 116例 B细胞系急性淋巴细胞性白血病 (AL L)患者中 ,CD19的阳性率 (99.1% )明显高于 B细胞系其它相关性抗原的阳性率 ;CD19在 17例含 B细胞系成分的杂合型白血病 (HAL )中全部表达 ,而在 2 9例 T细胞系 AL L和 7例 T/ My HAL则均无表达 ;在 152例急性髓系白血病 (AML)中 ,仅 11例 (7.2 % ) CD19阳性 ,明显低于其在 B细胞系 AL L 中的阳性率 (P=0 .0 0 1) ;CD2 2在 B/ My HAL的阳性率 (12 / 15,80 .0 % )明显高于 CD19+ -AML (0 / 11,0 % ,P<0 .0 0 1)。结论  CD19对 B系AL L 细胞的特异性较好 ,敏感性较高 ,是诊断 B细胞系 AL L 较为可靠的表面标记 ,也可作为导向治疗 B细胞系AL 展开更多
关键词 急性白血病 CD19 抗原表达 多参数流式细胞术
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鼠抗人CD14单链抗体ScFv2F9原核表达载体的构建和表达
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作者 宁铂涛 汤永民 +2 位作者 曹江 沈红强 钱柏芹 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2008年第1期51-59,共9页
目的:构建ZCH-7-2F9(简称2F9)单链抗体(ScFv2F9)原核表达载体,获得活性目的蛋白,为2F9免疫毒素及其它类型的基因工程抗体的研究奠定基础。方法:根据VH2F9、VL2F9、(G4S)3基因序列以及pIVEX2.3-MCS空载体多克隆位点内切酶位点NdeI和SmaI... 目的:构建ZCH-7-2F9(简称2F9)单链抗体(ScFv2F9)原核表达载体,获得活性目的蛋白,为2F9免疫毒素及其它类型的基因工程抗体的研究奠定基础。方法:根据VH2F9、VL2F9、(G4S)3基因序列以及pIVEX2.3-MCS空载体多克隆位点内切酶位点NdeI和SmaI的核酸序列设计引物,采用高保真的Taq酶,通过重叠延伸拚接法(splicing by overlap extension,SOE)扩增克隆到ScFv2F9基因,T-A克隆、测序核实后克隆到pIVEX2.3-MCS空载体中,阳性重组质粒转化大肠杆菌菌株E.coli BL21star(DE3)plysS,IPTG诱导目的蛋白表达,镍树脂纯化后体外复性浓缩,流式细胞术观察其识别和结合CD14的能力。结果:成功构建ScFv2F9的原核表达载体pIVEX2.3-MCS/ScFv2F9;对大肠杆菌的包涵体进行纯化复性,其复性率为32.6%;通过流式细胞术观察到复性ScFv2F9对亲本单抗2F9-FITC有部分的阻滞效果,复性ScFv2F9阻滞1次后阳性细胞百分数、平均荧光强度(MFI)和高峰频道(peakCh)分别下降了11.73%、11.96%和31.57%,阻滞2次后分别下降了26.44%、21.75%和42.11%。结论:ScFv2F9在原核细胞中获得成功表达,复性后目的蛋白对人CD14有一定的识别和结合能力,为2F9单抗的进一步改造打下了坚实的基础。 展开更多
关键词 抗原 CD14/免疫学 原核细胞 大肠杆菌 重组 遗传 抗体 单克隆 流式细胞术 质粒 基因表达
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大肠癌细胞系HR8348白细胞分化抗原的表达
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作者 杨世隆 汤永民 +6 位作者 沈红强 钱柏芹 宋华 石淑文 宁铂涛 陈英虎 徐卫群 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2004年第2期118-120,共3页
目的 :了解大肠癌细胞的免疫表型特征。方法 :采用三色直接免疫荧光标记法 ,使用流式细胞仪检测了4 0种抗白细胞分化抗原单克隆抗体 (Mo Abs)与大肠癌细胞系 HR8348的反应性。结果 :抗 CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、TCR (α/β)、TCR ... 目的 :了解大肠癌细胞的免疫表型特征。方法 :采用三色直接免疫荧光标记法 ,使用流式细胞仪检测了4 0种抗白细胞分化抗原单克隆抗体 (Mo Abs)与大肠癌细胞系 HR8348的反应性。结果 :抗 CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、TCR (α/β)、TCR (δ/γ)、CD10、 CD11b、 CD14、CD16、CD19、CD2 2、CD2 5、CD2 8、CD33、 CD34、CD35、CD36、CD38、CD4 1a、CD4 5、CD4 5 RA、CD4 5 RO、CD5 6、CD6 1、CD6 4、CD6 6 b、CD6 9、CD71、CD117、CD12 2和 LambdaF (ab') 2 Mo Abs与 HR8348细胞系均不反应 (阳性率 (10 % )。抗 CD13、CD15、CD2 0、CD38、CD95和 HLA- DRMo Abs与细胞系 HR8348呈不同程度的阳性反应 (阳性率 11.33%~ 86 .39% )。结论 :实验证明 ,大肠癌细胞系HR8348与白细胞谱系有部分相同的细胞表面抗原决定簇。 展开更多
关键词 结肠结肠肿瘤 病理学 大肠癌 细胞系 白细胞分化抗原 表达
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自体外周血造血干细胞移植治疗小儿急性早幼粒细胞白血病二例
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作者 石淑文 宋华 +6 位作者 汤永民 杨世隆 沈红强 郭淑芬 魏键 鲍兴儿 钱柏芹 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2002年第4期234-234,249,共2页
关键词 自体外周血造血干细胞移植 小儿 急性早幼粒细胞白血病 APL APBSCT
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白细胞新单克隆抗体ZCH-2B8a的表达谱分析及其意义
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作者 汤永民 郭莉 +4 位作者 杨世隆 沈红强 钱柏芹 张怡 张海忠 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期990-994,共5页
ZCH-2B8a(IgG2a)是作者研究室最近采用髓细胞性白血病细胞系KG1a作为免疫原自行研制的鼠抗人造血细胞分化抗原的单克隆抗体,已提交第8届国际人类白细胞分化抗原协作组会议(HLDA8)鉴定。根据HL-DA8总部反馈信息表明,该抗体识别的抗原性... ZCH-2B8a(IgG2a)是作者研究室最近采用髓细胞性白血病细胞系KG1a作为免疫原自行研制的鼠抗人造血细胞分化抗原的单克隆抗体,已提交第8届国际人类白细胞分化抗原协作组会议(HLDA8)鉴定。根据HL-DA8总部反馈信息表明,该抗体识别的抗原性质不明,后者属国际上尚未认识的血细胞膜新的分化抗原。本研究旨在分析ZCH-2B8a单克隆抗体与正常人外周血细胞成分、骨髓及G-CSF动员的外周血CD34+造血干/祖细胞和血液肿瘤细胞系的反应规律及其意义。采用多参数流式细胞术分析2B8a抗体与正常及恶性肿瘤细胞表面的反应性,每种细胞成分重复实验3次,以阳性细胞数≥20%为阳性。结果表明:2B8a抗原在外周血B细胞上表达(3/3例,平均阳性细胞数为26.29%),而在T淋巴细胞和NK细胞上不表达(0/3例);在粒细胞和单核细胞上阳性表达均为2/3例,平均阳性细胞数分别是23.72%和59.84%;在DC细胞、红细胞和血小板上均不表达(0/3例)。2B8a抗原在骨髓CD34+细胞上的阳性表达是3/3例,平均阳性细胞数39.33%,而在G-CSF动员的外周血CD34+细胞上的阳性表达仅1/3例,平均阳性细胞数为1.25%。2B8a抗原在B系细胞系Raji、SMS-SB、Nalm-6和Nall-1上的平均阳性细胞数分别为98.78%、98.61%、94.93%和5.68%;在T系细胞系Molt-3上的平均阳性细胞数为31.40%,而在Molt-4、JM和CCRF-CEM细胞上不表达;在髓系细胞系U937、Meg-01、HL-60、K562、KG1a和HEL92.1.7上的平均阳性细胞数分别为67.78%、33.40%、29.70%、28.19%、16.23%和8.02%;在神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH、KCNR、BE、LAN-1和SK-N-AS细胞以及结肠癌细胞系HR8348细胞上均不表达,而在羊膜细胞系FL细胞上呈一定的阳性表达,平均阳性细胞数为45.03%。结论:在正常外周血,2B8a抗体主要与B淋巴细胞和单核巨噬细胞反应,在骨髓和外周血CD34+造血干/祖细胞中也有不同程度的反应性;在细胞系上,2B8a抗体主要与B系细胞系、单核巨噬细胞系及上皮性肿瘤细胞系反应,提示该抗体有可能用于上述肿瘤的免疫学诊断与治疗。 展开更多
关键词 ZCH-288a抗体 白细胞单克隆抗体 造血干/祖细胞 白血病 淋巴瘤
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新单抗ZCH-7-2D3与白血病细胞的反应性及其临床意义
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作者 郭莉 汤永民 +4 位作者 沈红强 钱柏芹 宁铂涛 张海忠 张怡 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2006年第4期390-393,共4页
目的:观察新抗人白细胞分化抗原ZCH-7-2D 3单克隆抗体(单抗)与白血病细胞的反应性及其在白血病免疫学诊断分型中的意义。方法:采用CD 45设门和多色流式细胞术,对经30余种标准单抗业已定型的100例白血病患者新鲜的骨髓细胞或外周血标本... 目的:观察新抗人白细胞分化抗原ZCH-7-2D 3单克隆抗体(单抗)与白血病细胞的反应性及其在白血病免疫学诊断分型中的意义。方法:采用CD 45设门和多色流式细胞术,对经30余种标准单抗业已定型的100例白血病患者新鲜的骨髓细胞或外周血标本进行流式细胞术分析。结果:2D 3抗原在急性淋巴细胞性白血病(ALL)病例中的阳性率(10/31)明显低于急性髓细胞性白血病(AM L)(39/55,P<0.01);2D 3在3例B系/髓系混合型白血病病例中均有表达,而在6例慢性粒细胞性白血病(CM L)中不表达,在慢性淋巴细胞性白血病(CLL)中阳性率(3/5)与B系ALL病例中的阳性率(9/28)差异无显著意义(P=0.2389)。2D 3在ALL各免疫亚型中的表达差异无显著意义(P=0.5632);在AM L各亚型中除2例AM L-M 6患者不表达外,其余AM L亚型间无统计学意义(P>0.05)。结论:单抗2D 3主要与AM L细胞反应,但在识别白血病细胞分化阶段上未发现特殊性。 展开更多
关键词 白血病 单克隆抗体 流式细胞术 免疫分型
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急性白血病患者白血病细胞CD19和CD20反应谱分析
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作者 陈英虎 汤永民 +6 位作者 沈红强 宋华 杨世隆 石淑文 钱柏芹 徐卫群 宁铂涛 《浙江医学》 CAS 2003年第8期461-463,共3页
目的 观察CD19和CD20在急性白血病 (AL)细胞中的表达与分布 ,为免疫毒素导向治疗药物的合理应用提供依据。方法 采用27个直接荧光素标记的单克隆抗体 (单抗 )及CD45/SSC双参数设门多色流式细胞术对321例AL患者白血病细胞进行免疫学诊断... 目的 观察CD19和CD20在急性白血病 (AL)细胞中的表达与分布 ,为免疫毒素导向治疗药物的合理应用提供依据。方法 采用27个直接荧光素标记的单克隆抗体 (单抗 )及CD45/SSC双参数设门多色流式细胞术对321例AL患者白血病细胞进行免疫学诊断和分型 ,并对CD19和CD20在各种类型AL细胞中的表达情况进行分析。 结果 在116例B系ALL患者中 ,CD19持续稳定表达 ,其阳性率(99.1%)高于CD20阳性率(28.4%,P=0.001) ;在17例具B系特征的杂合型白血病 (HAL)细胞中 ,CD19阳性率也明显高于CD20(P<0.01) ,而在29例T细胞系ALL和7例T/MyHAL细胞中 ,两者均无表达。在152例急性髓系白血病(AML)细胞中 ,CD19和CD20阳性率均很低 ,分别为7.2%和2.0%。 结论 CD19在B细胞系细胞的各分化阶段上持续稳定表达 ,且反应谱比CD20宽 ,CD19免疫毒素可能成为治疗大多数B系ALL的最佳选择。 展开更多
关键词 急性白血病 白血病细胞 CD19 CD20 流式细胞术
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急性B淋巴细胞白血病动物模型的建立 被引量:4
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作者 李丽霞 汤永民 +4 位作者 顾伟忠 汤宏峰 钱柏芹 沈红强 罗春芳 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2008年第5期511-514,共4页
目的:建立急性B淋巴细胞系白血病动物模型,为药物进行体内靶向杀伤研究奠定基础。方法:裸鼠用环磷酰胺预处理后,尾静脉注射5×106个Nalm-6细胞,观察小鼠症状,记录发病时间,取其各个组织做病理检查,了解肿瘤细胞浸润情况。结果:小鼠... 目的:建立急性B淋巴细胞系白血病动物模型,为药物进行体内靶向杀伤研究奠定基础。方法:裸鼠用环磷酰胺预处理后,尾静脉注射5×106个Nalm-6细胞,观察小鼠症状,记录发病时间,取其各个组织做病理检查,了解肿瘤细胞浸润情况。结果:小鼠注射肿瘤细胞(19.4±0.55)d后出现严重消瘦、脊柱侧弯和弓背症状,平均死亡时间(24.75±0.87)d;病理切片观察到小鼠骨髓、肝、脾、肾、脑膜、脑实质、卵巢、肺都有肿瘤细胞浸润,部分肝脾组织出现坏死。结论:采用裸鼠成功建立了急性B淋巴细胞系白血病的动物模型,为靶向治疗白血病研究奠定了基础。 展开更多
关键词 白血病 B细胞 急性 疾病模型 动物 白血病 环磷酰胺/药理学
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儿童急性髓系白血病干细胞的测定及其临床意义 被引量:3
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作者 王迪 汤永民 +2 位作者 徐晓军 沈红强 钱柏芹 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期952-958,共7页
本研究检测儿童急性白血病患儿急性髓系白血病干细胞(AMLLSC)的水平,分析AML患儿缓解后白血病干细胞(leukemia stem cells,LSC)含量与微小残留病(MRD)水平之间的关联。采用流式细胞术(FCM)和直接免疫荧光法标记细胞,分别测定初诊AML、AL... 本研究检测儿童急性白血病患儿急性髓系白血病干细胞(AMLLSC)的水平,分析AML患儿缓解后白血病干细胞(leukemia stem cells,LSC)含量与微小残留病(MRD)水平之间的关联。采用流式细胞术(FCM)和直接免疫荧光法标记细胞,分别测定初诊AML、ALL和缓解AML、ALL及对照组患儿骨髓单个核细胞(mononuclear cell,MNC)中AMLLSC(CD34+CD38-CD123+)表型阳性细胞的含量及AML患儿缓解后MRD水平。结果表明:初诊AML、ALL及对照组患儿骨髓MNC中AMLLSC或AMLLSC相同表型细胞的中位含量分别为166(14-1459)细胞/10万细胞、7(0-560)细胞/10万细胞和0(0-6)细胞/10万细胞,未缓解AML患儿骨髓MNC中AMLLSC的中位含量为36(5-224)细胞/10万细胞,缓解AML、ALL患儿骨髓MNC中AMLLSC或AMLLSC相同表型细胞的中位含量分别为6(0-41)细胞/10万细胞和10(0-105)细胞/10万细胞,缓解期AML患儿AMLLSC含量与同期MRD水平呈负相关(r=-0.466,p=0.006)。结论:初诊AML患儿骨髓细胞中存在AMLLSC,缓解后AMLLSC含量明显减少,维持一个较低水平;在初诊ALL患儿骨髓细胞中也存在AMLLSC(CD34+CD38-CD123+)相同表型细胞,缓解后AMLLSC相同表型细胞含量没有明显变化;AML患儿缓解后AMLLSC含量与MRD水平呈负相关。 展开更多
关键词 白血病干细胞 表面标记 CD123 急性髓系白血病 微小残留病
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CD11b在白血病细胞上的表达 被引量:4
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作者 兰志建 汤永民 +5 位作者 宁铂涛 沈红强 杨世隆 钱柏芹 宋华 石淑文 《浙江医学》 CAS 2003年第8期458-460,共3页
目的 探讨细胞表面分化抗原CD11b在各型白血病细胞上的表达规律及其意义。 方法 采用CD45/SSC双参数散点图设门方法对223例白血病患者白血病细胞进行表面分化抗原四色流式细胞术分析。结果CD11b在44.7% (42/94)的急性髓细胞白血病(AML)... 目的 探讨细胞表面分化抗原CD11b在各型白血病细胞上的表达规律及其意义。 方法 采用CD45/SSC双参数散点图设门方法对223例白血病患者白血病细胞进行表面分化抗原四色流式细胞术分析。结果CD11b在44.7% (42/94)的急性髓细胞白血病(AML)表达 ,高于其在急性淋巴细胞白血病 (ALL)中的阳性率11.8 % (12/102 ,χ2=26.55,P<0.01)。CD11b在M5 中的表达率较高 ,为83.3% (10/12) ,明显高于在粒细胞系亚型白血病 (M0、M1、M2、M3)的表达 (36.5%或23/63,χ2=8.97,P<0.01 )。在AML中 ,CD11b与CD34和CD117的表达呈负相关 (r= -0.213,P<0.05;r= -0.282,P<0.05) ,与CD14和CD15的表达呈正相关 (r=0.587,P<0.01 ;r=0.348,P<0.01)。CD11b在2例慢性期CML患者中表达 ,而在2例急变期患者中不表达。 结论 (1)CD11b有助于髓系和淋系白血病的区分 ;(2)CD11b有助于M5 与M0、M1、M2、M3 的区分 ;(3)CD11b结合CD15以及CD34的表达情况可能有助于CML的诊断。 展开更多
关键词 CD11B 白血病 表达 免疫表型 流式细胞术
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K562/VCR单克隆多药耐药亚细胞系的建立
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作者 兰志建 汤永民 +4 位作者 宁铂涛 杨世隆 钱柏芹 沈红强 陈英虎 《实用肿瘤杂志》 CAS 北大核心 2004年第4期301-303,共3页
目的 建立耐药性较为均一的 K5 6 2 / VCR多药耐药 (MDR)亚细胞系 ,为更好研究多药耐药性的产生以及逆转机制提供良好的实验材料。方法 采用三种不同的培养方法和有限稀释法对 K5 6 2 / VCR MDR细胞系进行亚克隆培养 ,并用流式细胞仪 ... 目的 建立耐药性较为均一的 K5 6 2 / VCR多药耐药 (MDR)亚细胞系 ,为更好研究多药耐药性的产生以及逆转机制提供良好的实验材料。方法 采用三种不同的培养方法和有限稀释法对 K5 6 2 / VCR MDR细胞系进行亚克隆培养 ,并用流式细胞仪 (FCM)测定 p170的表达情况。结果 加用培养上清或滋养细胞存在的条件下 ,亚克隆效率明显高于无条件培养液 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。建立的单克隆 MDR亚细胞系 6株 ,FCM分析证实 p170呈不同程度的表达 ,其中表达最高者为 31.4 % (K5 6 2 / VCR A5 - A1)。结论  (1)耐药细胞系的亚克隆培养需要条件培养液或滋养细胞的支持 ,后者较前者更为有效。 (2 )成功建立了 6株 K5 6 2 / 展开更多
关键词 白血病/病理学 K562细胞 抗体 单克隆 流式细胞术 抗药性 多药 肿瘤细胞 培养的
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移植物体外净化白血病细胞模型的建立
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作者 孙飞 汤永民 +5 位作者 沈红强 钱柏芹 宋华 杨世隆 石淑文 徐卫群 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第5期433-437,共5页
本实验采用荧光素Calcein AM标记白血病细胞后分别接种入细胞株或骨髓细胞中以建立 3个白血病移植物细胞模型 ,采用免疫磁珠法对细胞模型进行选择 ,并用流式细胞术 (FCM)评价移植物模型中白血病细胞的净化效果。结果表明 :所建立的移植... 本实验采用荧光素Calcein AM标记白血病细胞后分别接种入细胞株或骨髓细胞中以建立 3个白血病移植物细胞模型 ,采用免疫磁珠法对细胞模型进行选择 ,并用流式细胞术 (FCM)评价移植物模型中白血病细胞的净化效果。结果表明 :所建立的移植物细胞模型既可以用荧光显微镜分析 ,又可以用FCM进行精确评价。模型Ⅱ经免疫磁珠法体外净化后髓系白血病KG1a细胞的清除率为 (0 98± 0 0 9)log,模型Ⅲ中淋巴系白血病NALM 6细胞的清除率为 (1 82± 0 51 )log。结论 :建立的模型直观、稳定、重复性好 。 展开更多
关键词 白血病 免疫磁珠选择法 移植物净化模型 荧光素 Calcein—AM 流式细胞术
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