交链孢酚单甲醚对人胚食管上皮的作用

用人胚食管上皮体外培养,经交链孢酚单甲醚(Alternariol monomethyl ether,AME)处理后,食管上皮底层细胞比对照组的层次明显增多,细胞排列紧密紊乱,细胞核浆比增加,核不规则,大小不等.浓染,可见核分裂相,且有乳头状向内增生。该变化与甲基硝基亚硝基胍(MNNG)和甲基苯基亚硝胺(MPNA)所诱发的人胚食管上皮癌前病变相类似。结果提示,AME与人的食管癌发生很可能有关。

河南马氏钳蝎蝎毒素对Eca109细胞的杀伤及生长抑制作用

本文研究了河南马氏钳蝎蝎毒（ＳＶＣ）的三个分离毒素：ＳＶＣⅠ、ＳＶＣⅡ及ＳＶＣⅢ对Ｅｃａ１０９细胞株的杀伤及生长抑制作用。结果表明，ＳＶＣⅠ和ＳＶＣⅡ对Ｅｃａ１０９细胞有直接杀伤作用，它们对Ｅｃａ１０９细胞的半数杀伤浓度（ＬＣ＿（５０））分别为７．９９９μｇ／ｍｌ、４．４９９μｇ／ｍｌ；ＳＶＣⅡ和ＳＶＣⅢ处理细胞９６ｈ后，对Ｅｃａ１０９细胞的生长抑制率（ＩＲ％）分别达８３．４７％和９２．２９％；ＳＶＣⅡ、ＳＶＣⅢ对Ｅｃａ１０９细胞的集落抑制率分别达８１．３％、８０．１％，它们对Ｅｃａ１０９细胞的半数抑制浓度（ＩＣ＿（５０））分别为９．９００μｇ／ｍｌ、３．０９９μｇ／ｍｌ；经ＳＶＣⅡ、Ⅲ作用后，Ｅｃａ１０９细胞有丝分裂指数（ＭＩ％）亦明显减少；ＭＴＴ法的实验结果显示，ＳＶＣⅡ、Ⅲ对Ｅｃａ１０９细胞具有明显的细胞毒性作用。未观察到ＳＶＣⅠ对Ｅｃａ１０９细胞的作用。

钳蝎蝎毒组分Ⅱ对人直肠腺癌C1184细胞生长的影响

蝎毒组分Ⅱ（ＳｃｏｒｐｉｏｎＶｅｎｏｍｃｒｕｄｅⅡ，ＳＶＣⅡ）为河南马氏钳蝎粗毒（ＳＶＣ）经分离纯化后获得的有效成分之一。实验结果表明，以丝裂霉素作为阳性对照，ＳＶＣⅡ（４～２０μｇ／ｍｌ）对人直肠腺癌Ｃ１１８４细胞株有明显杀伤作用。与空白对照相比，ＳＶＣⅡ使细胞生长抑制率、细胞毒性和克隆形成抑制率增大（Ｐ＜０．０５或（Ｐ＜０．０１），并存在剂量效应关系，其半数抑制浓度分别为１１．２０μｇ／ｍｌ、１１．９３μｇ／ｍｌ和１７．３８μｇ／ｍｌ。从生长曲线可见，ＳＶＣⅡ对细胞生长呈剂量和时间依赖性抑制。ＳＶＣⅡ还能使细胞分裂指数下降。提示ＳＶＣⅡ具有抗癌细胞增殖作用。

蝎毒组分Ⅱ对入喉癌细胞毒性的研究

采用细胞毒试验、肿瘤细胞杀伤试验、集落形成试验和生长抑制试验等多种方法,检测了东亚钳蝎Buthus martensil karsch蝎毒组分Ⅱ(SVC Ⅱ)对人喉痛HEp-2细胞的毒性。结果表明,以丝裂霉素为阳性对照,所用剂量范围内SVC Ⅱ(4-20μg/ml)能抑制HEp-2细胞生长和有丝分裂,对人癌细胞的毒性与药物剂量和作用时间成正相关,其中大剂量的SVC Ⅱ的抑制作用略强于MMC,提示SVC Ⅱ是蝎毒中具有抗癌活性的细胞毒素,可望成为来源于中药的新抗癌药。

马氏钳蝎蝎毒分离组分Ⅲ体外抗癌活性的实验研究

蝎毒组分Ⅲ（ｓｃｏｒｐｉｏｎｖｅｎｏｍｃｏｍｐｏｏｃｎｔⅢ，ＳＶＥⅢ）是从马氏钳蝎粗毒分离纯化获得的有效成分之一。本文用ＳＶＣⅢ处理体外培养的人喉癌ＨＥｐ￣（－２）细胞系和人直肠腺癌Ｃ１１８４细胞系，研究其抗癌活性。结果表明，以丝裂霉素做为阳性对照，ＳＶＣⅢ（１．６～８．０μｇ／ｍｌ）对两种癌细胞呈毒性和杀伤作用（Ｐ＜０．０１）。当ＳＶＣⅢ浓度为４．８、６．４和８．０μｇ／ｍｌ时，ＨＥｐ￣（－２）细胞和Ｃ１１８４细胞的克隆形成率降低（Ｐ＜０．０１），具有剂量依赖性，半数抑制浓度分别为５．０１μｇ／ｍｌ和６．６μｇ／ｍｌ。较大剂量ＳＶＣⅢ处理癌细胞２４ｈ，生长抑制率呈明显增高，以后趋于坪式。ＳＶＣⅢ还使有丝分裂指数和多核率减少。分化程度较高的ＨＥｐ－２细胞对ＳＶＣⅢ更为敏感。提示ＳＶＣⅢ是存在于蝎毒中的天然、高效低毒的抗癌成分。

亚硒酸钠对体外培养人喉癌细胞的杀伤和抑制作用

本文采用抗肿瘤药物筛选试验观察了亚硒酸钠（Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３）对体外培养人喉癌细胞株ＨＥｐ－２生长的影响。结果表明，当Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３浓度为０．２、０．５和１．０μｇ／ｍｌ时，可使细胞集落形成率下降，细胞存活比由对照组１００．００％分别降至８４．１４％、７０．２８％和３４．５４％（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０·００５）。噻唑兰法的细胞生长抑制率分别是５６．５２％、７４．６３％和８１．８８％（Ｐ＜０．０１），半数抑制浓度（ＩＣ＿５０）为０．１６６μｇ／ｍ１。台盼兰拒染法生长抑制率分别是５２．３６％、７４．６６％和８７．３０％（Ｐ＜０．０１），ＩＣｓ０为０．１８６μｇ／ｍｌ。Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３抑制作用与剂量呈正相关。进一步分析时效关系可见，Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３抑制ＨＥｐ－２细胞生长速率，但Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３剂量大于０．５μｇ／ｍｌ时或作用时间超过４８小时出现抑制坪段效应。此外，较大剂量Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３对ＨＥｐ－２细胞的分裂指数和多核率亦有抑制作用，提示硒在产生较强的抑制癌细胞生长和杀伤作用时，需慎重考虑硒的用量和作用时间。

互隔交链孢霉毒素对人胚肺2BS细胞DNA的损伤作用及维胺酸Ⅲ号的抑制作用

本文应用碱性洗脱-荧光分析法对互隔交链孢酶产生的两种主要毒素——交链孢酚单甲醚(AME)和交链孢酚(AOH)引起人胚肺2BS细胞DNA单链断裂效应进行了探讨。实验结果表明,AME和AOH都能导致2BS细胞DNA单链断裂,并有剂量依赖性,与溶剂对照相比,DNA在滤膜上的存留比明显降低,如洗脱6小时对照组的存留比为0.87±0.02,AME浓度为10,25,50,100μg/ml时分别为0.57±0.04、0.45±0.02、0.30±0.02、0.18±0.01,AOH浓度为0.1、1、5、10μg/ml时分别为0.68±0.03、0.54±0.01、0.47±0.03、0.34±0.01,统计学分析均有显著意义(P<0.01)。本实验还用同样的方法检测了维胺酸Ⅲ号(RⅢ)对AME和AOH所致的DNA单链断裂的抑制作用。

交链孢醇单甲醚诱发V_(79)细胞突变的研究

交链孢醇单甲醚是从林县污染粮食中分离的互隔交链孢霉的提取物,经进一步纯化结晶获得,它是该霉菌的主要代谢产物之一。本文用V_(79)细胞突变的方法进行了交链孢醇单甲醚的致突变性研究。结果表明,在不加S-9和加S-9情况下,交链孢醇单甲醚均能诱发V_(79)细胞6-巯基鸟嘌呤抗性突变,随交链孢醇单甲醚剂量增大,突变频率增高,具有直线回归关系(P<0.01),但不加S-9时比加S-9时致突变作用更强,提示交链孢醇单甲醚是直接致突变物,可能与食管癌病因有一定关系。

维胺酸对交链孢醇单甲醚致突变性的抑制作用

交链孢醇单甲醚(AME)是直接致突变物,可能是林县食管癌病因之一。维胺酸是国内合成的毒性较小的新维甲衍生物,本文采用V_(79)细胞6-疏基鸟嘌呤抗性突变试验的方法,研究了维胺酸对AME致突变性的影响。结果表明,所用剂量范围内的维胺酸对V_(79)细胞无明显毒性和致突变性(P>0.05)。一定剂量维胺酸(15μg/ml)对不同剂量(25～100μg/ml)AME诱发的V_(79)细胞突变频率低于AME单独作用(P<0.01)。此外,与仅含AME对照相比,不同剂量维胺酸(5～20μg/ml)能分别降低AME的突变频率(P<0.05或P<0.01),并随维胺酸剂量增大,相对抑制率增高,呈现剂量相关性,显示维胺酸对AME致突变性有抑制作用,为林县食管癌的化学预防提供了实验依据。

人食管癌细胞系Eca109在抗癌药物筛选试验中的应用

用人食管癌细胞株（Ｅｃａ１０９）进行了丝裂霉素（ＭｉｔｏｍｙｃｉｎＣ，ＭＭＣ）抗癌药物敏感性研究。结果表明，与对照组相比，ＭＭＣ浓度为０．２５μｇ／ｍｌ时，其细胞生长抑制率为６１．９６％（Ｐ＜０．０１）；集落形成抑制率为６４．４６％（Ｐ＜０．０１）．ＭＴＴ显色法证实，ＭＭＣ引起的细胞毒性与药物作用时间成正相关（ｒ＝０．９９９６，Ｐ＜０．０１），ＭＭＣ可抑制细胞的增殖速度，还使癌细胞的有丝分裂指数降低，提示ＭＭＣ对Ｅｃａ１０９细胞呈毒性作用，该细胞株保持了人体食管癌的药物敏感性，故可用于体外筛选新抗癌药。

交链孢酚诱发人胚食管上皮鳞癌的研究

互隔交链孢霉是食管癌高发区林县粮食中的优势污染菌,我们曾证明该菌产生的毒素之一交链孢酚(Alternariol,AOH)能引起大鼠肝细胞的DNA单链断裂,激活人胚食管上皮的H-ras和myc癌基因,与人食管上皮DNA的各种碱基呈共价结合。为研究AOH能否引起人食管上皮癌,将水囊引产的胎儿食管在体外培养一周后,用AOH处理,再培养2周,

真菌类及其毒素在人食管癌中的病因学意义互隔交链孢霉与食管癌发生关系的研究

河南省林县为食管癌高发区,发病率之高居世界之冠,它严重地威胁着人民健康。要预防食管癌,研究食管癌病因是十分重要的。关于食管癌的病因,国外强调饮酒、吸烟、热食、亚(?)胺、微量元素缺乏、营养不足和遗传因素的作用。关于霉菌在食管癌病因学中的作用,仅南非有几篇研究粮食中霉菌毒素的报道。

肿瘤体外化疗药物敏感性检测方法的研究

研究结果表明，人喉癌ＨＥ＿ｐ－２细胞接种数与克隆形成数、ＭＴＴ法ＯＤ值呈正相关、与空白对照相比，２．５×１０－４ｍｇ／ｍｌ丝裂霉素（ＭｉｔｏｍｙｃｉｎＣ，ＭＭＣ）引起克隆形成率、ＯＤ值和拒染活细胞数减少（Ｐ＜０．０１），细胞生长抑制率分别为９６．８０％、８９．５８％和７５．５１％．ＭＭＣ的抑制作用具有时间依赖关系（ｒ＝０．９９９５．Ｐ＜０．０５）。ＭＭＣ造成细胞有丝分裂指数和多核率明显低于对照（Ｐ＜０．０１）．提示ＭＭＣ对ＨＥ＿ｐ－２细胞有较强的毒性作用。本文对体外肿瘤化疗药物敏感试验的方法学进行了探讨，为进一步临床应用奠定了基础。

交链孢酚单甲醚对食管癌旁上皮组织脂质过氧化的影响

用从林县粮食中分离的互隔交链孢霉提取材交链孢酚单甲醚(AME),对22例培养的食管癌患者的癌旁上皮组织进行了攻击。并用抗氧化剂维生素E做了抑制实验。结果发现:(1) AME可以使食管癌旁上皮组织的丙二醛含量升高,与对照组相比较有明显的统计学差异(P<0.01)。在实验浓度范围5～50μg/ml内,存在剂量效应关系(r=0.9740,P<0.025)。(2) 每毫升培养基加入25μg的AME一个小时后,丙二醛含量就升高,八个小时达到高峰,与对照组相比较有明显的差异(P<0.01)。(3) 加入抗氧化剂维生素E后,可以降低AME所诱发的组织中的丙二醛含量,实验组和对照组之间存在着明显的统计学差异(P<0.01)。实验结果说明:AME可以引发食管癌旁上皮组织的脂质过氧化,使丙二醛含量升高,维生素E可以降低这种变化。

吡蚜酮·氯虫苯甲酰胺25%悬浮剂高效液相色谱分析

采用高效液相色谱法分析吡蚜酮.氯虫苯甲酰胺复配制剂,使用C18反相柱和紫外可变波长检测器,以甲醇-水为流动相,用外标法对有效成分进行分析和定量。吡蚜酮和氯虫苯甲酰胺的标准偏差分别为0.031、0.035,变异系数分别为0.15%和0.34%,平均回收率分别为99.3%和98.5%。

交链孢酚诱发人胚食管上皮癌的研究

将体外培养的水囊引产的人胎儿食管用交链孢酚(Alternariol,AOH)处理24h,再培养两周,分别接种于裸小鼠皮下和腹腔内。皮下接种的3个食管组织块中之一形成鳞状细胞癌,其余2个和接种于腹腔的2个食管组织块上皮细胞呈明显增生或乳头状增生。空白对照组的食管组织块未见增生。溶剂对照组者仅呈轻度增生。结果提示互隔交链孢霉在人食管癌病因学中起着重要作用。

地茂散的高效液相色谱分析

采用高效液相色谱法对地茂散进行定量分析。该方法简便、快捷、准确。采用C18HPLC液谱柱,甲醇与水(体积比75∶25)为流动相,流速为1.0mL/min,采用紫外检测器,在UV254nm下,进行分离和测定。标准偏差为0.01。

互隔交链孢霉在人食管癌病因学中的意义

霉菌在食管癌病因学中的意义,70年代开始受到人们的关注,现已有多篇综述。甄应中等报道河南省五个食管癌高发县粮食互隔交链孢霉(Alternatia alternata)的污染率高于三个低发县粮食中的污染率。之后。

槐定对互隔交链孢霉霉菌毒素所致DNA损伤的抑制作用

本文应用碱性洗脱荧光分析法探讨了槐定对互隔交链孢霉的两种毒素——交链孢酚单甲醚(AME)和交链孢酚(AOH)引起2BS细胞DNA单链断裂的抑制作用。实验结果表明,槐定能抑制AME和AOH引起的2BS细胞DNA单链断裂,加入不同浓度的槐定作用后洗脱9小时DNA在滤膜上的存留分数分别为:AME组,由对照组的0.205=0.02回升至0.57±0.02、0.61±0.05、0.74±0.03;AOH组,由对照组的0.11±0.01回升至0.45±0.04、0.58±0.03、0.85±0.06,实验组与对照组比较统计学处理均有显著差别(P<0.01)。

交链孢酚单甲醚对人胚肺2BS细胞DNA含量和细胞周期的影响

用显微分光光度计方法研究了食管癌高发区林县粮食中分离的优势污染菌互隔交链孢霉提取物交链孢酚单甲醚(AME)对人胚肺成纤维细胞(2BS株)的DNA含量和细胞周期的影响。结果发现:AME作用人胚肺2BS细胞两个倍增时间后,随着AME浓度的加大,G_1期细胞峰(2C细胞)降低,出现了较高的G_2+M期细胞峰(4C细胞),S期细胞增加,分裂指数降低.并出现了一些非整倍体的细胞,这些改变与对照组相比较有显著性差异。说明AME可以抑制人胚肺2BS细胞的周期,使S期细胞受阻,堆积和损伤,导致非整倍体细胞出现,这些将有可能成为细胞突变的遗传基础。从而为互隔交链孢霉与林县人食管癌的发生可能有一定关系的说法提供了实验佐证。