增殖诱导配体在自身免疫病患者外周血中的表达

为检测增殖诱导配体(APRIL)在自身免疫病(SLE和RA)患者中的表达情况以及它与B细胞刺激因子(BAFF)表达、疾病预后、抗-dsDNA抗体之间的相关性。收集58名自身免疫病患者以及20名健康对照的外周血,用实时定量RT-PCR方法检测PBMC中APRIL和BAFF mRNA的表达,用ELISA方法检测血浆中APRIL和BAFF蛋白水平。同时,检测血浆中IgG、IgA、IgM、BF和抗-dsDNA抗体水平。结果同对照组相比,APRIL mRNA水平在自身免疫病患者中显著升高,与BAFF mRNA表达水平有相关性。与疾病初发组和治疗后缓解组相比,治疗后来缓解组患者APRIL mRNA表达显著升高。疾病组外周循环中BAFF蛋白显著升高,APRIL蛋白未见升高,APRIL和BAFF之间未见显著意义相关性,A-PRIL蛋白与抗-dsDNA和疾病活动度之间未见显著相关。检测APRIL mRNA含量是判断自身免疫病患者治疗情况和疾病预后的有用指标。循环中APRIL和BAFF蛋白的产生可能受到不同机制调节,在自身免疫病的发生、发展以及转归中所起的作用也不同,为研究APRIL的产生机制、表达水平和自身免疫病程度、早期诊断、预后等的关系打下基础。

抗Granulysin多克隆抗体的制备及鉴定

目的构建人颗粒溶素(granulysin,GNLY)质粒并在大肠杆菌中表达,纯化得到9kD目的蛋白片段,免疫新西兰大白兔制备兔抗颗粒溶素多克隆抗体。方法采用RT-PCR的方法获得编码人颗粒溶素的cDNA序列,将测序正确的片段克隆入pET-28a(+),构建pET28a(+)-GNLY表达载体。在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中IPTG诱导下表达6×His-融合蛋白,纯化后免疫新西兰兔,制备兔抗人颗粒溶素血清,以Western Blotting和ELISA方法分析其特异性和效价。结果6×His融合蛋白免疫新西兰兔成功获得多克隆抗体,Western Blotting结果显示制备的抗体具有较高的特异性,ELISA显示效价为1∶6000。结论获得了纯化的颗粒溶素9kD蛋白和anti-GNLY多抗血清,为今后对疾病中CTL和NK细胞活性的研究打下了基础。

生长激素联合生长抑素对重症急性胰腺炎细胞免疫的影响

目的:探讨联合应用八肽生长抑素(善宁)、生长激素(思增)治疗重症急性胰腺炎(SAP)对机体细胞免疫功能的影响。方法:36例重症急性胰腺炎随机分为对照组(n=12),单用八肽生长抑素(善宁组,n=12),联合应用善宁和生长激素(联合组,n=12)。比较3组病人d1、d14血浆中CD4、cd8阳性细胞百分比,CD4/CD8比值,住院天数、并发症发生率和病死率。结果:联合组并发症发生率明显低于善宁组及对照组(P<0.05);联合组d14 CD4阳性细胞百分比、CD4/CD8值高于单用善宁组和对照组(P<0.05)。结论:联合应用生长抑素和生长激素改善SAP患者的细胞免疫功能,降低了临床并发症发生率。

上皮性卵巢癌组织中p33^(ING1)的表达及其意义

目的探讨p33ING1表达在上皮性卵巢癌发生、发展过程中的病理生物学及临床意义。方法应用免疫组化EnV ision法,分别检测了39例原发性上皮性卵巢癌癌组织、淋巴结及12例良性卵巢肿瘤组织中p33ING1的表达情况。结果良性卵巢肿瘤组织p33ING1阳性表达率为94.44%(17/18),卵巢癌组织p33ING1表达率仅为58.97%(23/39),显著低于良性肿瘤组(P<0.05);p33ING1表达在转移淋巴结中表达较无转移淋巴结低(P<0.05);癌组织中p33ING1表达与肿瘤的浸润、淋巴结的转移及分期有关(P<0.05)。结论p33ING1在上皮性卵巢癌组织及转移性淋巴结组织中表达下降,对上皮性卵巢癌发生、发展可能起重要作用。

原发性胆汁性肝硬化患者三种免疫效应分子的表达及临床意义

目的研究颗粒溶素(granulysin,GNLY)、颗粒酶 B(granzyme B,GrB)及穿孔素(perforin,PF)三种免疫效应分子在原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)外周血中的表达并探讨其与 PBC 的关系。方法以正常健康人和肝炎后肝硬化患者为对照,用实时荧光定量 RT-PCR 方法检测 PBC 患者 PBMC 中 GNLY、GrB 及 PF mRNA 的含量。用 ELISA 方法检测 PBC 患者血清中 GNLY 表达情况并分析其与肝功能的相关性。结果 PBC 组 GNLY、GrB mRNA 平均拷贝数显著高于健康对照组(P<0.01)和疾病对照肝炎后肝硬化组(P<0.001),而 PF mRNA 与对照组相比差异无统计学意义。PBC 患者血清中的 GNLY 蛋白表达显著高于健康对照组(P<0.01)和乙型肝炎后肝硬化组(P<0.01)。血清中 GNLY 浓度与血清 GGT、ALP 的浓度呈正相关(P<0.01)。结论 PBC 患者 GNLY、GrB mRNA 和含量显著高于对照组,同时 ELISA 方法检测出 PBC 患者血清中 GNLY 蛋白含量显著高于对照组,GNLY、GrB 表达与 PBC 的发病存在一定的关联性,为临床 PBC 病情的监控提供可靠依据。