目的:探究Rho-GTPase激活蛋白15(Rho-GTPase activating protein 15,ARHGAP15)在乳腺癌中的表达及临床意义。方法:利用TCGA数据库检测ARHGAP15在乳腺癌中的表达,采用Kaplan-Meier、Logistics回归分析和单因素/多因素COX回归分析检测ARHG...目的:探究Rho-GTPase激活蛋白15(Rho-GTPase activating protein 15,ARHGAP15)在乳腺癌中的表达及临床意义。方法:利用TCGA数据库检测ARHGAP15在乳腺癌中的表达,采用Kaplan-Meier、Logistics回归分析和单因素/多因素COX回归分析检测ARHGAP15与临床预后相关性。同时收集我院61例乳腺癌患者病理切片,检测ARHGAP15在乳腺癌中的表达并分析其与临床相关性。体外实验检测ARHGAP15对MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖和凋亡的影响。结果:TCGA数据库中ARHGAP15与T、N、M分期、预后、病理分级和年龄相关。本研究临床样本显示,ARHGAP15在乳腺癌中低表达,且与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移和分子分型相关。COX单因素分析结果显示,TNM分期Ⅲ期、分子类型为三阴性、肿瘤直径≥3 cm与ARHGAP15低表达是影响乳腺癌患者预后的危险因素;多因素分析结果显示:肿瘤直径≥3 cm与ARHGAP15低表达是影响乳腺癌预后的危险因素。CCK-8和克隆实验发现过表达ARHGAP15抑制乳腺癌细胞增殖。细胞凋亡实验发现,ARHGAP15过表达组凋亡率较高。结论:ARHGAP15基因影响乳腺癌细胞的增殖和凋亡,且ARHGAP15低表达与乳腺癌的不良预后结局相关。展开更多
目的探讨沉默RPMI-8226 DEPTOR基因表达在非接触式共培养体系下,对破骨细胞分化因子(RANKL)蛋白表达及THP-1细胞向破骨样分化的作用,并研究其可能机制。方法构建DEPTOR sh RNA重组慢病毒载体转染RPMI-8226细胞。通过Western blot技术从...目的探讨沉默RPMI-8226 DEPTOR基因表达在非接触式共培养体系下,对破骨细胞分化因子(RANKL)蛋白表达及THP-1细胞向破骨样分化的作用,并研究其可能机制。方法构建DEPTOR sh RNA重组慢病毒载体转染RPMI-8226细胞。通过Western blot技术从蛋白水平检测RPMI-8226细胞中DEPTOR及RANKL的表达,Western blot检测自噬相关蛋白LC-3和Atg5表达。构建共培养体系,分三组:THP-1细胞单培养组、THP-1+RPMI-8226细胞组和THP-1+DEPTOR sh RNA组。应用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法检测THP-1向破骨样细胞分化过程中抗酒石酸酸性磷酸酶活性改变,应用RT-PCR法检测THP-1细胞降钙素受体(CTR)和组织蛋白酶(Cathepsin)-K m RNA表达水平。结果 DEPTOR sh RNA可明显抑制RPMI-8226细胞中DEPTOR及RANKL蛋白表达(P<0.05),DEPTOR sh RNA组自噬相关蛋白LC-3和Atg5的蛋白的表达水平较阴性对照转染组及未转染组下降(P<0.05)。THP-1细胞与RPMI-8226细胞共培养条件下可诱导THP-1细胞破骨样分化,CTR和Cathepsin-K基因表达上调(P<0.05);DEPTOR sh RNA共培养条件下可抑制THP-1细胞向破骨样细胞分化,CTR和Cathepsin-K基因表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DEPTOR sh RNA能明显抑制共培养体系中THP-1细胞的破骨样分化,该作用可能与DEPTOR下调RPMI-8226细胞RANKL有关,抑制自噬可阻碍破骨细胞的分化成熟。展开更多
文摘目的探讨沉默RPMI-8226 DEPTOR基因表达在非接触式共培养体系下,对破骨细胞分化因子(RANKL)蛋白表达及THP-1细胞向破骨样分化的作用,并研究其可能机制。方法构建DEPTOR sh RNA重组慢病毒载体转染RPMI-8226细胞。通过Western blot技术从蛋白水平检测RPMI-8226细胞中DEPTOR及RANKL的表达,Western blot检测自噬相关蛋白LC-3和Atg5表达。构建共培养体系,分三组:THP-1细胞单培养组、THP-1+RPMI-8226细胞组和THP-1+DEPTOR sh RNA组。应用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法检测THP-1向破骨样细胞分化过程中抗酒石酸酸性磷酸酶活性改变,应用RT-PCR法检测THP-1细胞降钙素受体(CTR)和组织蛋白酶(Cathepsin)-K m RNA表达水平。结果 DEPTOR sh RNA可明显抑制RPMI-8226细胞中DEPTOR及RANKL蛋白表达(P<0.05),DEPTOR sh RNA组自噬相关蛋白LC-3和Atg5的蛋白的表达水平较阴性对照转染组及未转染组下降(P<0.05)。THP-1细胞与RPMI-8226细胞共培养条件下可诱导THP-1细胞破骨样分化,CTR和Cathepsin-K基因表达上调(P<0.05);DEPTOR sh RNA共培养条件下可抑制THP-1细胞向破骨样细胞分化,CTR和Cathepsin-K基因表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DEPTOR sh RNA能明显抑制共培养体系中THP-1细胞的破骨样分化,该作用可能与DEPTOR下调RPMI-8226细胞RANKL有关,抑制自噬可阻碍破骨细胞的分化成熟。