Toll样受体2亚家族基因单核苷酸多态性与哮喘的关系研究

目的：探讨Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）2亚家族基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNP）与中国东南方成人哮喘以及其临床表型之间的关系。方法：共招募哮喘患者318例,正常对照352例,TLR2亚家族中共8个SNP使用SNPstream方法进行了基因分型。对各SNP和单倍型与哮喘及其表型进行了分析。结果：运用Logistic回归分析后,发现rs7656411/TLR2突变基因型TT与野生型rs7656411 GG比较能明显降低37%哮喘的发生（校正OR=0.63,95%CI：0.41-0.98,P=0.41）,rs7656411 TT＋GT与哮喘无明显关系（校正OR=0.77,95%CI：0.54-1.09,P〉0.05）。携有rs2381289/TLR6 T等位基因的哮喘患者患过敏性鼻炎的危险度为不携带此等位基因哮喘患者的1.79倍（95%CI：1.10-2.91,P=0.025）,然而携有rs11466651/TLR10 A等位基因的哮喘患者患过敏性鼻炎的危险度较不携带此等位基因的哮喘患者下降了51%（95%CI：0.26-0.95,P=0.046）。结论 ：TLR2亚家族基因的突变可能在哮喘易感性中起着重要作用。

下呼吸道感染革兰阳性细菌及其敏感性的分析

目的：了解苏州大学附属第一医院1999．1～2002．12月间下呼吸道感染住院患者临床分离阳性细菌及其对常见抗生素的敏感情况。方法：回顾性分析了1999．1～2002．12月苏州大学附属第一医院下呼吸道感染住院患者的痰标本细菌培养分离结果，用Kirby-Bauer法进行药敏试验。结果：年分离的耐药细菌数有上升趋势，每年分离的革兰阳性球菌在该年分离细菌总数所占比例也有上升趋势。粪肠球菌和屎肠球菌对克林霉素、环丙沙星、庆大霉素敏感差，二者对万古霉素敏感性最高。发现34株肠球菌(13．28％)为万古霉素中介株，12株肠球菌(4．69％)为万古霉素耐药株。MRSA，MRCNS分别占葡萄球菌的34．60％和42．75％，MSS对多种抗生素敏感率较MRS的敏感率高，MRSA及MRCNS对克林霉素、环丙沙星、复方磺胺及青霉素敏感率无显著统计意义。结论：苏州大学附属第一医院下呼吸道感染细菌耐药是目前临床上面临的难题，值得进一步研究，并用合理的手段降低耐药率的发生。

Toll样受体3单核苷酸多态性与中国东南方汉族人群哮喘关系的研究

目的:探讨TLR3单核苷酸多态性(SNPs)与中国东南方汉族人群哮喘发病危险性和哮喘相关表型的关系。方法:挑选位于TLR3第4外显子区的非同义SNPs rs3775291。连续性招募哮喘患者318人,正常对照352人。采用多重PCR结合标签阵列单碱基延伸技术进行基因分型。通过病例-对照研究分析该位点与哮喘及哮喘表型的关系。结果:rs3775291在整体上与哮喘发病危险度无相关性,但是与过敏性哮喘独立相关,GA+AA基因型降低过敏性哮喘发病危险性31%(校正OR=0.69,95%CI=0.49-0.97)。携带GA或AA基因型的哮喘患者比GG基因型者发生夜间哮喘的机会少,但与哮喘患者的外周血嗜酸性粒细胞、血浆总IgE、哮喘严重度分级无相关性。结论:TLR3 SNPs与哮喘密切相关,这对筛选哮喘高危人群和哮喘的预防有重要意义。

TLR4基因单核苷酸多态性与哮喘严重度及哮喘相关临床指标的关系

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)单核苷酸多态性(SNPs)与哮喘发病严重度和哮喘相关临床指标的相关性。方法:在HapMap上挑选TLR4的全部标签SNPs。连续性招募哮喘患者318例。采用SNPstream和Taqmans法进行基因分型。流式细胞技术检测外周血中CD4+CD25high调节性T细胞及其表面TLR4的表达。结果:TLR4的4个标签SNPs rs1927914、rs10983755、rs11536879、rs1927907与哮喘患者外周血嗜酸性粒细胞、血清总IgE和hsCRP无相关性。但是rs1927914 TT基因型比TC和CC基因型的FEV1%要低(P=0.043),哮喘发病程度更严重(P=0.024)。同样,rs10983755 GG基因型比GA和AA基因型、rs1927907 GG基因型比GA和AA基因型哮喘发病程度更严重(P=0.009和P=0.013)。TLR4 SNPs与哮喘患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞无相关性,但是和CD4+CD25high调节性T细胞表面TLR4的表达量有关。结论:TLR4 SNPs和哮喘严重度分级及CD4+CD25high调节性T细胞表面TLR4的表达量相关,与哮喘其他表型无相关性。TLR4 SNPs可能影响哮喘症状的严重度,这为哮喘的基因治疗提供了一定理论基础。

胶体金免疫层析试验检测乙肝两对半时HBsAg假阴性结果的处置

目的胶体金免疫层析试验(GICA)检测乙肝两对半时,对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)结果疑似假阴性的标本分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)和时间分辨荧光分析法(TRFIA)定量试验进行HBsAg检测,并用抗体中和确认试验进行确认,以获得一个处理GICA检测HBsAg产生假阴性结果的可靠方法。方法 2014年1月至2015年2月用GICA检测乙肝两对半的标本3 078例,选取其中结果为单乙型肝炎核心抗体(抗-HBc),或单乙型肝炎e抗体(抗-HBe)为阳性,或抗-HBc和抗-HBe同为阳性,而HBsAg、乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)均为阴性的标本86例,分别用ELISA和TRFIA检测其HBsAg,对检测为阳性的标本进行抗体中和确认试验确认。结果 86例标本经抗体中和确认试验确认阳性的为35例;ELISA检出阳性标本28例,其中2例为假阳性;TRFIA检出阳性标本35例与抗体中和确认试验符合率100%。结论 GICA检测乙肝两对半时,对HBsAg结果疑似假阴性的标本可选用TRFIA进行复查确认。

虫草素抑制脂多糖诱导的支气管上皮细胞炎症反应

目的:探究虫草素对支气管上皮细胞炎症反应的调节作用及其机制。方法:培养人支气管上皮细胞系(16HBE),选择状态良好的16HBE细胞分别用不同浓度的虫草素(0、10、20、40、60μmol/m L)处理4 h后,脂多糖(1mg/L)处理12 h,MTT法检测细胞存活力;采用荧光定量PCR检测炎症细胞因子IL-8、TNF-α的mRNA相对表达水平;蛋白质印迹法检测p-AKT2、AKT2的蛋白表达水平。结果:虫草素能以剂量依赖的方式提高细胞存活力(P<0.05),抑制脂多糖诱导的IL-8、TNF-α的mRNA相对表达量(P<0.05),减少脂多糖活化的p-AKT2水平(P<0.05)。结论:虫草素在减弱脂多糖诱导的支气管上皮细胞炎症反应中起重要作用,其机制可能涉及AKT2信号通路的下调。

下呼吸道感染多重耐药鲍曼不动杆菌临床病例的治疗分析

目的:分析头孢哌酮舒巴坦、替加环素单药及联合治疗下呼吸道多重耐药鲍曼不动杆菌感染患者的临床疗效。方法:收集呼吸内科及重症监护室(ICU)多重耐药鲍曼不动杆菌感染患者的临床资料及实验室检查资料,将患者分为三组。A组采用头孢哌酮舒巴坦单药治疗;B组采用头孢哌酮舒巴坦与替加环素联合治疗;C组采用替加环素单药治疗。回顾性分析多重耐药鲍曼不动杆菌感染患者临床治疗疗效情况。结果:A组治愈10例(43.5%),无效13例(56.5%),其中死亡5例,自动出院8例;B组治愈8例(32.0%),无效17例(68.0%),其中死亡11例,自动出院6例;C组治愈2例(40.0%),无效3例(60.0%),其中死亡3例。三组临床疗效差异无统计学意义(χ2=0.684,P>0.05)。结论:下呼吸道多重耐药鲍曼不动杆菌感染患者中,头孢哌酮舒巴坦及替加环素为临床主要治疗药物,但其单药治疗与联合治疗对于临床疗效无显著差异。

嗜麦芽窄食单胞菌下呼吸道感染临床及药敏分析

对 35例嗜麦芽窄食单胞菌下呼吸道感染的患者 (研究组 )在基础疾病、免疫功能、气管插管 /切开激素治疗、抗菌药物使用 5个方面进行回顾性分析 ,并与同期住院下呼吸道感染患者 (对照组 )进行比较。采用美国临床实验室标准化委员会 (NCCLS)推荐的纸片扩散法 ,测定嗜麦芽窄食单胞菌的体外药物敏感性。认为伴有严重基础病 ,免疫低下或行有创性治疗患者 ,合并对多种抗生素治疗不敏感的下呼吸道感染 ,需考虑到嗜麦芽窄食单胞菌的可能 ,及时行微生物检查 ,根据本地耐药情况及药敏结果 。

AKT2 3'-UTR荧光素酶报告基因载体构建及与miRNA-625靶向关系验证

目的:通过构建荧光素酶报告基因重组质粒验证miRNA-625与AKT2基因的靶向调控关系。方法:通过生物信息学软件预测AKT2为miRNA-625靶基因;构建野生型AKT2基因3'端非翻译区荧光素酶报告基因载体及miRNA-625靶序列突变型载体;将HEK-293T细胞株随机分为野生型+miRNA-625组、野生型+miRNA内参组、突变型+miRNA-625组、突变型+miRNA内参组;Lipofectamine 2000转染相应的质粒与miRNA,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果:构建野生型及突变型荧光素酶报告载体鉴定正确,双荧光素酶报告基因检测系统显示野生型+miRNA-625组相对荧光素酶活性较野生型+miRNA内参组明显降低(t=14.176 4,P<0.05)。结论:miRNA-625对野生型AKT2重组质粒荧光活性有明显的抑制作用,证实miRNA-625能够靶向调控AKT2基因。

miR-146a和miR-185对恶性胸腔积液的诊断价值

目的:探讨胸腔积液中miR-146a、miR-185的表达水平对临床上恶性胸腔积液的诊断价值。方法:采用实时荧光定量PCR技术检测40例恶性胸腔积液和41例良性胸腔积液中miR-146a、miR-185的相对表达量,构建受试者工作特征(ROC)曲线并与癌胚抗原和细胞角蛋白19片段(CYFRA 21-1)进行比较,评估两种miRNA的诊断价值。结果:miR-146a、miR-185在恶性胸腔积液中的表达量均明显低于良性胸腔积液(P均<0.01)。ROC曲线显示,两种miRNAs的曲线下面积(AUC)均低于癌胚抗原,但高于CYFRA 21-1。miR-146a诊断的敏感性均高于癌胚抗原及CYFRA 21-1,miR-185的诊断敏感性高于CYFRA 21-1低于癌胚抗原,但两类miRNA诊断的特异性均低于癌胚抗原及CYFRA 21-1。两种miRNAs联合诊断的AUC明显低于单独诊断的AUC,敏感性亦较单独诊断的敏感性降低,而特异性高于miR-146a,但低于miR-1 85。联合癌胚抗原能进一步提高两类miRNA诊断恶性胸腔积液的AUC。但两种miRNAs共同联合癌胚抗原诊断恶性胸腔积液的AUC较任一种miRNA联合癌胚抗原无明显上升。两种miRNA的表达量与临床参数无明显相关性(P>0.05)。结论:miR446a、miR-185在恶性胸腔积液中的低表达使之有可能作为临床诊断恶性胸腔积液的标志物。

慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者血浆纤维蛋白原和血清总胆红素水平的变化

目的探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者血浆纤维蛋白原(Fib)和血清总胆红素水平的变化及二者对AECOPD的诊断价值。方法连续纳入2016年1月至2018年7月在江苏大学附属医院进行治疗的慢性阻塞性肺疾病患者107例,其中AECOPD 75例(观察组),慢性阻塞性肺疾病稳定期32例(对照组)。比较2组血浆Fib和血清总胆红素水平,分析二者单独及联合检测对AECOPD的诊断价值。结果观察组入院24 h血浆Fib水平高于对照组[(4. 6±1. 3) g/L比(3. 0±0. 5) g/L],而血清总胆红素水平低于对照组[(7. 3±2. 8)μmol/L比(11. 5±3. 9)μmol/L],差异均有统计学意义(均P <0. 001)。血浆Fib与血清总胆红素联合检测诊断AECOPD的曲线下面积大于二者单独检测(0. 951比0. 890、0. 821)。结论检测血浆Fib和血清总胆红素水平对AECOPD的诊断具有重要提示意义,二者联合检测对AECOPD的诊断价值更高。

MicroRNA在恶性胸腔积液中的研究进展

胸腔积液在临床上是一种常见疾病,它是由多种病因引起人体胸膜腔内大量液体形成而导致。健康人胸膜腔内仅存在约5-10mL液体,在人体做呼吸运动时起润滑作用。胸腔积液分为良性胸腔积液和恶性胸腔积液,临床上恶性胸腔积液多由胸膜原发肿瘤或继发肿瘤转移至胸膜后引起。

急性脑卒中合并糖尿病患者肺部感染的病原菌分布和耐药性以及多重耐药的影响因素分析

目的探讨急性脑卒中合并糖尿病患者肺部感染的病原菌分布、耐药性以及发生多重耐药的影响因素。方法回顾性分析江苏大学附属医院2017年6月至2020年12月收治的95例急性脑卒中合并肺部感染患者的临床资料,根据是否合并糖尿病将95例患者分为糖尿病组(44例)及非糖尿病组(51例)。患者入院后均进行痰培养查找病原菌,并进行药物敏感试验。比较2组病原菌检出情况及其耐药率,以及急性脑卒中合并肺部感染患者发生多重耐药的影响因素。结果糖尿病组共检出91株病原菌,其中革兰阴性菌62株、金黄色葡萄球菌15株、白色念珠菌14株;非糖尿病组共检出81株病原菌,其中革兰阴性菌66株、革兰阳性菌7株、白色念珠菌8株。糖尿病组革兰阴性菌对哌拉西林舒巴坦、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星的耐药率均高于非糖尿病组[21.6%(8/37)比6.1%(3/49),40.5%(15/37)比16.3%(8/49),24.3%(9/37)比6.1%(3/49),54.1%(20/37)比24.5%(12/49)],革兰阳性菌对青霉素的耐药率高于非糖尿病组[100%(15/15)比3/7](均P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,住院时间(比值比=2.199,95%置信区间:1.365~3.542,P=0.001)和美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分(比值比=1.124,95%置信区间:1.032~1.255,P=0.007)是急性脑卒中合并肺部感染患者出现多重耐药菌的独立危险因素。结论本院急性脑卒中合并肺部感染患者,无论是否合并糖尿病,痰培养检出的病原菌均以革兰阴性菌为主,糖尿病组病原菌对主要抗菌药物的耐药率高于非糖尿病组。住院时间和NIHSS评分是急性脑卒中合并肺部感染患者出现多重耐药菌的危险因素。

竞争性内源RNA在支气管哮喘中的研究进展

支气管哮喘是一种以气道炎症、气道高反应性和气道重塑为特征的慢性气道疾病,常表现为反复的喘息、咳嗽和胸闷。近期许多研究表明,lncRNA和circRNA可通过与microRNA应答元件与靶miRNA分子发生相互作用,形成竞争性内源RNA调控网络,参与转录后水平基因表达的调控,影响哮喘发生发展过程。本文就ceRNA调控机制及其对哮喘的影响进行综述。

血糖和血脂对慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者气流受限程度的影响分析

目的探讨不同气流受限程度的AECOPD患者血糖、血脂的变化特点及对预后影响。方法收集2017年06月至2018年09月本医院收治的AECOPD患者73例(其中轻中度组36例,重度、极重度组37例),及同期39例健康体检者作为对照组。检测各组的空腹血糖(FBG)、血脂水平,并进行分析比较。结果AECOPD患者组FBG较对照组升高,重度、极重度组FBG高于轻中度组,差异均有统计学意义(P<0.05);轻中度组总胆固醇(TC)较重度、极重度组和对照组升高(P<0.05);重度、极重度组低密度脂蛋白(LDL-C)水平较对照组和轻中度组升高(P<0.05);重度、极重度组FBG与FEV 1%pred呈负相关;logistic回归分析显示,FBG和TC是AECOPD气流受限严重程度的影响因素。结论AECOPD患者存在血糖、血脂紊乱且与气流受限严重程度相关,不利于疾病的治疗及预后。

环状RNA与支气管哮喘相关性研究

环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类特殊的非编码RNA,参与许多细胞过程,与多种疾病的发生发展相关。circRNA在先天免疫、炎症反应中发挥重要作用,已有研究表明circRNA与慢性炎症性疾病关系密切。哮喘是一种慢性气道炎症,其发病机制尚不明确。本文就circRNA与哮喘的关系进行综述。

组织蛋白酶Z基因启动子部分位点在成人哮喘中的差异性甲基化表达及意义

目的探讨组织蛋白酶Z基因(CTSZ)启动子区位点(cg01623438,cg02744249)在哮喘患者中的差异性甲基化表达及其与哮喘控制状态和肺功能的相关性,并探讨在成人哮喘诊断中的应用价值。方法选取于我院就诊的哮喘患者30例为哮喘组,根据哮喘控制评分将其分为三组,同时选取性别年龄匹配的同期健康体检成人30例为对照组。采集鼻黏膜上皮细胞,检测两位点甲基化水平并进行肺功能相关性分析,绘制ROC曲线分析其诊断应用价值。结果哮喘组两位点甲基化水平均低于正常对照组,且哮喘未控制组中甲基化水平最低,部分控制组次之,控制组最高。甲基化水平与肺功能改变呈负相关。单位点cg01623438的ROC曲线分析示,曲线下面积(AUC)为0.806(95%CI:0.683~0.896),敏感性为100%,特异性为50%(P <0.000 1);单位点cg02744249分析示AUC为0.749(95%CI:0.620~0.852),敏感性为43.3%,特异性为100%(P=0.000 1);两位点联合分析示AUC为0.827(95%CI:0.707~0.912),敏感性为66.7%,特异性为83.3%(P <0.000 1)。结论哮喘患者CTSZ启动子区出现明显低甲基化修饰,且与哮喘控制情况及肺功能存在一定相关性,提示可能对成人哮喘患者的诊断具有一定价值。

基于生物信息学分析哮喘患者鼻黏膜上皮细胞DNA及α肌动蛋白2甲基化差异性表达

目的:研究哮喘患者鼻黏膜上皮细胞中全基因组甲基化水平及α肌动蛋白2(actin alpha 2,ACTA2)基因启动子区域甲基化水平改变。方法:利用甲基化850K芯片法检测6例哮喘患者与5例健康者鼻黏膜上皮细胞中全基因组甲基化水平,进行生物功能分析后选择ACTA2为目的基因,以重亚硫酸盐测序法检测12例哮喘患者及12例健康者ACTA2启动子区域甲基化水平。结果:850K芯片测序结果显示,哮喘患者所有常染色体均存在不同程度的甲基化修饰,大部分发生在基因体及基因间区,10%~20%发生在启动子区,且高甲基化和低甲基化改变可存在于同一染色体上;重亚硫酸盐法测序示与健康对照组相比,哮喘组ACTA2基因启动子区出现明显高甲基化改变(P=0.001)。结论:哮喘患者鼻黏膜上皮细胞各染色体均出现广泛甲基化修饰,ACTA2基因启动子区域出现高甲基化改变。

转化生长因子β1单核苷酸多态性与支气管哮喘的关系及与CD14的作用

转化生长因子β1（TGFIM）由于其独有的促炎和抗炎双重作用以及促纤维化作用，在支气管哮喘（以下简称哮喘）气道重塑中具有中心地位。本研究观察哮喘患者TGFIM单核苷酸多态性与哮喘相关表型的关系，探索TGFβ1与CD14间的交互作用。