狂犬病疫联合干扰素的应用研究

目的研究IFN＋2-2-1程序和2-2-1程序应用的可行性，探讨IFN的免疫调节作用。方法IFN＋2-2-1程序：于0、7、14天分别注射5．0、5．0、2．5IUPHKCV，于0天同时加注20万IUα-IFN；2-2-1程序：于0、7、14天分别注射5．0、50、2．5IUPHKCV；对照：应用WHO推荐的常规程序。结果①3种程序免疫后的GWT：7天时分别为1．71、1．57、1．21（P＜0．05）；14天时分别为62．77、58．79、28．36（P＜0．01）；45天时分别为76．64、72．90、62．77。②各组的阳转率：7天时分别为55．00％、33．3％、20．00％（P＜0．05）；14天时全部达到100％。③各组的各种副反应发生率（在0～55％之间）均无显著性差别。结论小剂量的IFN有增强免疫应答的作用；首次免疫时用双倍剂量的疫苗有显著的高免疫应答效应；IFN＋2-2-1程序优于2-2-1程序，后者又优于常规程序。

IFN-α对人体液免疫功能调节作用的实验研究

目的：以狂犬病疫苗为抗原进行人体免疫实验，了解低剂量干扰素－α对人体的体液免疫功能的影响，并探讨其影响机制。方法：试验组：将疫苗于０、７、１４天时分别接种５．０、５．０、２．５ＩＵ，并在０天同时注射２０万单位的人白细胞干扰素（ＩＦＮ－α）；对照Ⅰ组：除不注射ＩＦＮ－α外，同试验组；对照Ⅱ组：仅按常规方法接种狂犬病疫苗。结果：抗体ＧＭＴ在７、１４天检测时，试验组均高于对照Ⅰ、Ⅱ组，尤较对照Ⅱ组有显著性；抗体阳转率在第７天时即显著高于对照Ⅰ、Ⅱ组；而达到保护水平的达标率在第７天时，试验组为１０％，对照Ⅰ、Ⅱ组均为０。结论：低剂量２０万单位的ＩＦＮ－α可使人体接受狂犬病疫苗免疫后的抗体产生速度加快、产量增高，即可有效增强人的体液免疫功能。

半巢式 PCR 一步法扩增伤寒患者单核细胞中伤寒沙门菌DNA

建立适用于临床检测血中伤寒沙门菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉ）ＤＮＡ扩增方法。分离患者单核细胞，加热裂解制备模板ＤＮＡ，半巢式ＰＣＲ一步法扩增Ｓ．ｔｙｐｈｉ鞭毛基因。结果７例血培养阴性而临床拟诊伤寒及３８例由血培养阳性伤寒患者单核细胞均获得了４５８ｂｐ的扩增产物，其他２８例发热待查的患者单核细胞无扩增产物出现。连续１∶１０稀释Ｓ．ｔｙ－ｐｈｉＤＮＡ最低可检测到４０ｆｇＤＮＡ（约１０个细菌）。ｓｌｏｔ－ｂｌｏｔ探针杂交证实４５８ｂｐ扩增产物是Ｓ．ｔｙｐｈｉ鞭毛素基因。该法是一项简便、省时、灵敏和特异的实验室诊断伤寒的新技术，尤其对培养阴性的伤寒患者可提供早期、快速的实验室诊断。

APAAP桥联酶标技术快速诊断合胞病毒

本文报告应用 APAAP 桥联酶标技术,对116例急性下呼吸道感染的患儿,进行合胞病毒抗原快速诊断研究,并与免疫荧光(IFA)技术对照.二者阳性符合率98.00%,阴性符合率95.38%,准确性为96.55%.进一步证明:APAAP 桥联酶标技术特异性好、敏感性高,用于呼吸道细胞检测,无内源性酶的干扰,且操作简便,无需荧光显微镜,利于基层推广应用,优于 IFA 技术,是较为理想的合胞病毒感染的快速诊断技术;若与 IFA 技术联用,可提高阳性检出率.

肿瘤坏死因子β基因多态性在中国汉族SLE病人中的分布特点及与不同人种的比较研究

目的 :探讨中国江苏地区汉族人群TNFβ基因多态性在SLE病人中分布特点 ,并与不同人种进行比较研究。 方法 :收集江苏地区 16 8名无血缘关系健康个体及 6 6例SLE病人的静脉血提取DNA ,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR RFLP) ,分析TNFβ基因的多态性。 结果 :中国汉族SLE病人与白种SLE病人TNFβ基因频率差异无统计学意义 ;中国汉族健康个体TNFβ 1等位基因频率明显高于白种健康个体 ;SLE病人TNFβ 2基因频率较正常人明显升高 (SLE病人 6 7 4% ,正常人 5 5 1% ,P <0 0 5 ,R =1 6 8) ;中国汉族SLE病人与白种SLE病人TNFβ基因频率差异无统计学意义。 结论 :TNFβ等位基因频率在正常人分布具有种族差异 ,但在SLE病人分布无种族差异。

肿瘤坏死因子受体2基因多态性与SLE易感性的相关性

为探讨肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)第六外显子基因多态性与系统性红斑狼疮(SLE)易感的相关性,采用病例对照研究的方法,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP)检测50例SLE患者和117例健康对照人群的TNFR2第六外显子的基因型和等位基因,SLE患者组TNFR2第六外显子基因型196R/R、196M/R和等位基因196R的频率明显比对照组高,经χ2检验,其差异具有统计学意义。(两组基因型之间:χ2=6.23P=0.044;两组等位基因之间:χ2=6.39P=0.011)。结果表明TNFR2第六外显子基因多态性与SLE的易感性相关。

44KD受体相关蛋白在实验性高脂血症家兔心肌、血管壁中的表达分析

目的 探讨 4 4KD受体相关蛋白 (RAP)与脂代谢的关系。方法 制备实验性家兔高脂血症动物模型 ,运用分子生物学技术克隆RAP基因片段 ,制备GST -RAP融合蛋白 ,用单克隆技术制备抗RAP单克隆抗体rapF2 ,用Western -Blot方法及免疫组化法观察高脂血症家兔心肌、血管壁中RAP的表达及分布。结果 与对照组相比 ,高脂血症组心肌、血管壁中RAP表达增加 ,且主要分布于心脏的外膜、冠状动脉内壁与外周血管壁的内、外膜 ,并在6 7～ 94KD间出现特异表达带。结论 血液中过量的脂质及脂质代谢的紊乱可引起血管壁的病理改变并伴随RAP表达增加 。

PHA与PMA对外周血单个核细胞产生IL-4、IFN-γ水平的研究

目的 :比较 PHA(植物血凝素 )与 PMA(佛波醇乙酯 )对 PBMCs(外周血单个核细胞 )的刺激效果。方法 :选择健康人群 ,取外周静脉血 ,分离得到 PBMCs,分别加入 PHA+ ionomycin(离子霉素 )及 PMA+ ionomycin进行刺激并孵育 2 h、4h、6h、12 h、2 4h、48h,采用双抗体夹心 ABC-ELISA法 ,分别测定不同时相培养上清中 IL -4和 IFN-γ水平。结果 :刺激 2 h后 ,PHA组与 PMA组 IFN-γ和 IL -4水平无差别 ;刺激 4h后 ,PMA组 IFN-γ和 IL-4水平均高于 PHA组 (P<0 .0 1) ;刺激 6h后 ,PHA组 IFN-γ水平低于 PMA组 (P<0 .0 5 ) ,IL -4水平高于 PMA组 (P<0 .0 5 ) ;刺激 12 h后 ,PHA组 IFN-γ与 PMA组接近 ,两组 IL -4水平亦无差别 ;刺激 2 4h和 48h后 ,PHA组 IFN-γ和 IL-4水平均高于 PMA组 (P<0 .0 5 )。结论 :PHA和 PMA对 PBMCs不同时间的刺激效果不同。

细胞吸附浓集法分离水中微量脊髓灰质炎病毒的实验研究

目的 :建立一种简便、实用的检测大量水样中的微量病毒的方法。方法 :将 L 2 0 B细胞加入大量的含微量脊髓灰质炎病毒的水中 ,充分作用后收集细胞 ,作病毒的分离培养。同时以 Na Cl— Al Cl3沉淀法作对照。结果 :10 0 0 ml水样中含病毒 10 0、10 TCD5 0时能全部检出 ;当含 1— 2 TCD5 0 时 14份样本可检出 13份。 Na Cl— Al Cl3沉淀法 :在 10 0 TCD5 0 时 4份样本中仅检出 1份 ,其它各浓度的 4份样都未能检出。结论 :细胞吸附浓集法分离水中病毒敏感、实用。

再生障碍性贫血患者骨髓和外周血中FL水平的测定及意义

目的 :测定再生障碍性贫血 (AA)患者骨髓 (BM)和外周血 (PB)中酪氨酸激酶受体 3的配体 (FL)的水平 ,并探讨其意义。方法 :用常规 EL ISA法检测 16例再障患者骨髓和外周血中 FL、s Fas L和 IL - 2的水平。结果 :再障患者骨髓和外周血中 FL 水平显著升高 ,为正常对照的 2 0倍以上 (P<0 .0 1)。再障患者骨髓及外周血中 s Fas L、IL- 2含量也明显高于正常对照组 (P <0 .0 1)。结论 :再障患者骨髓和外周血中 FL、s Fas L、IL - 2含量与患者疾病的严重程度呈负相关。

细菌脂多糖对人外周血单核细胞来源的树突状细胞发育和功能的影响

目的 :探讨细菌脂多糖 (LPS)对正常成人外周血单核细胞来源的树突状细胞 (Dendritic cell,DC)表面分子表达及免疫功能的影响。方法 :分离正常人 (n=5 )外周血单个核细胞 (PBMC)以 GM-CSF、IL-4联合诱生 DC,实验组在培养的第 2天加入LPS,正常对照组不加。于第 4、8天 FACS检测 DC表面分子 CD1a、CD14、CD83、CD80、HL A-DR的表达。同期检测 DC的增殖和刺激同种异体 T淋巴细胞的增殖情况。结果 :经 LPS刺激后 ,正常人 DC早期、晚期表面分子 CD1a、CD83、CD80表达增高 ,CD14表达降低 (P<0 .0 5 )。DC数量的增加及刺激同种异体 T细胞能力明显增强。结论 :GM-SF、IL-4和 L PS联合刺激能促进正常人

聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测肿瘤坏死因子β基因多态性

目的 建立聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)检测肿瘤坏死因β(TNFβ)多态性的方法。方法 采用PCR方法扩增TNFβ第一外显子到第二外显子包含G→A突变在内的DNA片段,扩增产物用限制性内切酶Nco I酶切后电泳,分析TNFβ的基因型。结果 TNFβ检测到3种基因型,分别为TNFβ*1/1、TNFβ*1/2和TNFβ*2/2。结论PCR—RFLP检测肿瘤坏死因子β多态性方法快速、简便、准确、可靠,适合普通实验室开展及大规模研究。

PCR-RFLP法检测肿瘤坏死因子受体基因多态性

目的 建立聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性分析 (PCR -RFLP)检测肿瘤坏死因子受体Ⅱ (TNFR2 )第 6外显子基因多态性的方法。方法 用碘化钾法从外周血白细胞中提取基因组DNA ,PCR扩增其TNFR2包括编码 196位氨基酸残基在内的第 6外显子基因 ,扩增产物用限制性内切酶NIaⅢ酶切后干含溴化乙锭的 35 g/L琼脂糖凝胶中电泳 ,紫外灯下直接观察TNFR2的基因型。结果 通过观察电泳条带可确定TNFR2的三种基因型 ,196R/R纯合子、196M/M纯合子、196M/R杂合子分别出现一、二、三条条带 ;江苏地区健康汉族人TNFR2第 6外显子各基因型的频率为 :196M /M 6 1 6 %,196R/R 5 6 %,196M /R 32 8%;等位基因的频率为 196M 77 9%,196R 2 2 1%。结论 RCR -RFLP是一种高效敏感、简单快速、准确可靠的分析TNFR2基因多态性的方法 ,适于普通实验室开展。

中国江苏地区汉族人群肿瘤坏死因子β遗传多态性研究

目的 探讨中国江苏地区汉族人群肿瘤坏死因子 β遗传多态性分布。方法 收集江苏地区 16 8名无血缘关系健康个体的静脉血提取DNA ,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性 (PCR -RFLP) ,对TNFβ基因多态性进行分析。结果 TNFβ检测到三个等位基因 ,其基因型频率分别为TNFβ 1/ 1=2 1 4 % ,TNFβ 1/ 2 =4 7% ,TNFβ 2 / 2 =31 5 % ,基因型分布符合Hardy-Weinberg定律。统计分析显示 :江苏地区汉族人群TNFβ等位基因频率分布与欧美白种人均有显著性差异(P <0 0 5 )。

抗B7-1功能性单克隆抗体对B淋巴瘤细胞生长的抑制作用

目的 分析抗B7- 1功能性单克隆抗体对表达B7分子的人恶性淋巴瘤细胞株Raji和Daudi细胞体外生长的抑制作用及其可能机制。方法 采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析肿瘤细胞的B7- 1分子表达 ;以不同浓度抗B7- 1功能性单克隆抗体 ,加入体外培养细胞中 ,经细胞计数和MTT法 ,观察单克隆抗体对肿瘤细胞体外生长的作用。结果 Raji和Daudi细胞均表达B7- 1分子 ,表达阳性百分率分别为 92 .7%和 89.2 % ;抗B7- 1单克隆抗体浓度在 5 μg/ml时就对这两种细胞株有显著的抑制作用 ,并随浓度增高而增强。 结论 抗B7- 1单克隆抗体对高表达B7- 1分子的人恶性淋巴瘤细胞体外生长有明显的抑制作用 。

呼吸道合胞病毒与小儿急性下呼吸道感染

对75例急性下呼吸道感染(ALRI)小儿,以呼吸道合胞病毒(RSV)-单克隆抗体-碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标快速诊断法作 RSV 抗原检测。阳性者32例.阳性率42.7%;其中以1岁以内婴儿阳性率最高,达71.9%.毛细支气管炎、喘息性支气管炎、肺炎阳性率分别为46.9%、40.0%及38.5%.观察说明,RSV 为本地区婴幼儿 ALRI 主要病原.流行季节非喘憋型患儿亦应考虑 RSV 感染的可能.

伤寒沙门菌生化特性分析

目的 :了解现在的伤寒沙门菌可能发生的变异。方法 :用纯化的伤寒沙门菌检测其抗原性、生化反应性等特性。结果 :1与标准菌株的反应模式相比较 ,现在的菌株的 H2 S、MR反应、枸橼酸盐、肌醇、山梨醇、阿拉伯糖的反应性发生了改变 ,其中 MR反应的变异有高度显著性差异 (P<0 .0 0 5 ) ;2 Hd抗原可消失而不丧失动力且很易发生变异 (5 2 .0 0 % ) ,O9抗原性亦可消失或减弱 ;3SS平板培养时 ,其菌落可发生侏儒型变异 ,变异后抗原性、生化反应性亦随之发生变异。结论 :现在的伤寒沙门菌与标准菌株相比较 。

外环境中脊髓灰质炎病毒分离的实验研究

建立一种简便、实用的检测大量水样中的微量脊髓灰质炎病毒的方法。这种方法是将L2 0B细胞加入大量的含微量脊髓灰质炎病毒的水中 ,充分作用后收集细胞 ,作病毒分离培养。同时以NaCl-AlCl3 沉淀法作对照。结果表明 ,10 0 0ml水样中含病毒 10 0、10TCD50 时能全部检出 ;当含1～ 2TCD50 时 14份样本可检出 13份。NaCl-AlCl3 沉淀法在 10 0TCD50 时 4份样本中仅检出 1份 ,其它各浓度的 4份样都未能检出。