尿液中黄曲霉毒素──DNA加合物与肝癌关系的前瞻性研究

应用单克隆抗体系和层析柱结合高效液相色谱法测定了５０例肝瘤及２６７名对照尿液中ＡＦＢ１及其代谢物，ＡＦＰ１、ＡＦＭ１及ＡＦ－Ｎ７－乌嘌呤加合物，同时用ＲＩＡ试剂检测其血清中ＨＢｓＡｇ．肝癌病例尿液中含一种或一种以上ＡＦ标志物的检测率显著高于对照，ＲＲ＝４．０．肝癌病例尿液中ＡＦ－Ｎ７－乌嘌呤加成物的检出率也显著高于对照，ＲＲ＝７．６．尿液中如只检出ＡＦＭ１、ＡＦＰ１或ＡＦＢ１，不同时伴有ＡＦ－Ｎ７－乌嘌呤加合物。其发生肝癌的相对危险度比同时伴有ＡＦ－Ｎ７－乌嘌呤加合物者低得多。而且在调整ＨＢｓＡｇ及吸烟等混杂因素后，尿液中ＡＦＰ１或ＡＦＢ１阳性与肝癌的关系无统计学上显著性联系。过表明尿液中ＡＦ标志物，尤其是ＡＦ－Ｎ７－乌嘌呤加合物与肝癌的发生有较强联系并在个体水平上提供了ＡＦ暴露与ＨＢＶ感染对肝癌发生有明显协同作用的证据。在上海，花生及酱油是饮食中ＡＦＢ１的最主要来源，队列对象摄入ＡＦＢ１总量的８０％以上均来自这二种食品。

黄曲霉毒素与人肝癌关系的最新研究进展

全文就AFT暴露与人HCC关系的研究进展作五方面的综述 :(1)AFT的分子标志物 ;(2)AFT暴露与HCC关系的分子流行病学研究 ;(3)AFT暴露与249位点 p53突变的关系 ;(4)AFT致肝癌效应与宿主遗传易感性关系 ;(5)AFT的化学预防。

鸭乙型肝炎病毒感染对鸭肝中黄曲霉毒素-DNA加成物形成的影响

人类肝癌的发生可能与乙型肝炎病毒（HBV）和黄曲霉毒素B1（AFB1）等致癌因素有关。有人推测HBV感染可能会导致肝微粒体酶对AFB1代谢模式的改变,从而增强AFB1的致癌效应,也有人认为HBV与AFB1在人类肝癌发生中可能具有协同作用。但迄今尚缺少直接的实验依据。鸭乙型肝炎病毒（DHBV）与HBV同属嗜肝DNA病毒科。鸭对AFB1非常敏感,因此家鸭是研究HBV与AFB1相互作用的良好动物模型。本文以DHBV感染及未感染的家鸭为材料,在给予AFB1后,比较两组鸭肝中形成黄曲霉毒素-DNA（aflatoxins-DNA）加成物的百分率,为阐明DHBV感染是否会增强AFB1的致癌效应提供实验依据。

鸭乙型肝炎病毒母系传递特性的研究

鸭乙型肝炎病毒(DHBV)与人乙型肝炎病毒(HBV)同属嗜肝DNA病毒科。Mason等在一日龄雏鸭中发现了DHBV,从而提出了垂直传递是DHBV传播的主要途径。随后,很多学者支持了上述观点。但对DHBV的垂直传递仅仅是与携带病毒的母系有关,还是与带毒的父母双亲均相关,至今尚缺乏明确的实验依据。我们以DHBV阳性与阴性的成年雌雄麻鸭为材料,分成4个不同组别配对繁殖,观察其子代血清中DHBV的携带状态,并据以推论自然鸭群中DHBV的传递途径。

DNA修复基因XPD多态性和肝细胞肝癌危险性的病例-对照研究

目的 探讨DNA修复基因XPD多态性和肝细胞肝癌 (Hepatocellularcarcinoma ,HCC)发生的关系。方法 应用病例 对照研究方法 ,选择了江苏启东地区 72例HCC患者以及 137例正常对照 ,以年龄 (± 3岁 )和性别为配对因素进行了配对 ,对XPD 75 1位点基因多态性作PCR RFLP分析。结果 XPD 75 1位点的Gln/Lys或Gln/Gln基因型的发生频率在病例组中明显高于对照组 ,差别有显著性 (OR =3.13,95 %CI =1.16～ 8.4 7) ,在调整了HBV感染因素后 ,差别的显著性虽然消失 ,但可信限下限位于临界处 (OR =2 .70 ,95 %CI =0 .98～ 7.4 2 )。对HBV感染患者并同时伴有XPD 75 1位点为Gln/Lys或Gln/Gln基因型的个体 ,其HCC发生的危险性是HBV阴性及XPD 75 1位点为Lys/Lys野生型基因型个体的 6 .6 8倍 ,差别有显著性 (OR=6 .6 8,95 %CI=3.4 3～ 13.0 1)。结论 本次研究的结果首次应用病例 对照研究发现XPD 75 1位点基因多态性可能影响HCC的发生 ,同时指出XPD 75

健脾理气方对HBV转基因小鼠肝脏AFB_1—DNA加成物水平的影响

对HBV转基因小鼠灌服健脾理气方,再予AFB_1,用RIA法测定经治疗和未经治疗的转基因小鼠及正常小鼠7个时相肝脏AFB_1-DNA加成物浓度。发现HBV转基因小鼠较正常小鼠易于对AFB_1终致癌物聚积,高峰相加成物水平显著升高(P<0.01),24h时相仍维持较高水平(P<0.01)。健脾理气方则能显著降低该加成物水平,在24h时相使其降至近正常水平(P>0.05)。结果示,HBV与AFB_1协同致肝癌是由于HBV致肝损伤,对终致癌物清除障碍所致,健脾理气方可能通过加速终致癌物清除而抑制肿瘤发生。

胃癌术后早期表阿霉素腹腔内化疗的药代动力学变化

对１２例进展期胃癌患者根治术后用表阿霉素灌注，观察腹腔液和血中表阿霉素的浓度变化。方法术后第１天用表阿霉素１０ｍｇ（０．２ｍｇ／ｋｇ）加入１０００ｍｌ（２０ｍｌ／ｋｇ）乳酸钠林格氏液行腹腔保留灌注。用高效液相色谱法测定腹腔液和外周静脉血中表阿霉素在２４小时内的浓度变化。结果表阿霉素在术后早期腹腔内化疗时腹腔液峰值浓度比外周静脉高２２８倍，且持续时间长；腹腔液总平均浓度比外周静脉高１６７倍。结论进展期胃癌术后早期表阿霉素腹腔内化疗对防治术后腹腔复发，具有药代动力学优势和合理性。

用cDNA微阵列技术研究HBV X基因与AFB_1对HBVx转基因小鼠药物代谢酶基因表达谱的影响

目的 研究乙型肝炎病毒X基因和黄曲霉毒素诱发小鼠肝癌过程中药物代谢酶基因表达谱的变化,探讨两因素协同致肝癌的机制。方法 用BiostarM 40s微阵列芯片比较研究HBVx组、AFB1 组和(AFB1+HBVx)组的肝组织基因表达谱与对照组的差异。结果 各实验组分别与对照组相比基因表达谱发生了明显的改变,各实验组上调与下调的基因数目分别为(AFB1+HBVx)组69项;AFB1 组101项;HBVx组35 项;其中与代谢酶相关的基因有18 项表达发生改变,分别为(AFB1 +HBVx)组13项(13/18,72%);HBVx组4项(4/18,22%);AFB1 组8项(8/18,44%)。结论 小鼠受到HBV X基因和AFB1双重攻击后,其体内的GST、EPHX和UDPGT等药物代谢酶基因表达水平明显低于HBVx组和AFB1 组。HBV与AFB1 协同致癌的分子机制很可能与两者引起药物代谢酶基因表达水平下调有关。

肝癌高发地区人群黄曲霉毒素暴露水平的评估

目的 :通过对我国原发性肝癌高发区居民进行较为全面的黄曲霉毒素 (AFT)暴露水平的评估 ,为进一步研究AFT与肝癌的关系提供依据。方法 :选择甲地 (广西扶绥县竹琴村 )、乙地 (江苏启东通兴乡 )和丙地 (启东天汾镇 )作为调查地区 ,应用AFT生物标记物的检测 ,对人群AFT暴露水平进行评估。结果 :食物结构调查表明 ,甲地居民以玉米为主食 ,乙地和丙地居民则以大米为主食 ,粮食中黄曲霉毒素B1(AFB1)的污染水平以甲地最为严重 ;居民膳食中AFB1的摄取量即AFT外暴露水平、血清中AFB1 白蛋白 (AFB1 ALB)加合物水平、肝癌发病率均以甲地最高 ,丙地最低 ,且有显著性差异。结论 :AFT外接触水平高的居民 ,AFB1 ALB加合物水平、尿中AFM1水平亦高 ,说明两者是反映AFB1外接触剂量的良好指标。在现有膳食结构条件下 ,AFT暴露仍是肝癌危险因素之一。

启东肝癌高发区乙肝病毒流行株全基因分析

目的:通过对江苏启东地区乙型肝炎病毒(HBV)全基因序列的分析,探讨该地区肝癌高发的分子病毒学病因。方法:以蛋白酶K消化后,酚/氯仿抽提7例肝炎和7例肝癌患者血清中DNA。应用聚合酶链反应(PCR),扩增血清中HBV基因全长,克隆至T载体后行全自动测序。以PHYLIP软件构建的系统进化树判断HBV的基因型;以Clastal W软件对序列进行突变分析。结果:14例标本中有12例为C基因型,2例为B基因型。肝癌和肝炎组中HBV基因型类别分布无差异。有5例HBV发生了PreS2的缺失突变,其中肝癌标本4例(57.1%),肝炎标本仅1例(14.3%)。HBV基因组中常见的点突变为PreS1区的nt.3116及核心启动子区的nt.1762/1764,发生率高达78.6%(11/14)。与肝炎组相比,肝癌中点突变发生率显著增高的位点为前C区nt.1899 G→A的突变(P=0.01)及核心启动子区nt.1653 C→T的突变(P=0.05)。结论:启东地区HBV以C基因型为主;启东HBV基因组中可能存在着与肝癌相关的点突变和缺失突变。

乙型肝炎病毒X蛋白氨基端变异与肝癌发生的相关性分析

目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)氨基端1～90位氨基酸(amino acid,AA)变异与肝细胞癌发生之间的关系。方法:采用PCR扩增产物直接测序的方法,对48例肝癌组织、159例肝癌和144例慢性肝炎患者血清中HBVX基因进行序列分析。通过病例-对照研究HBx变异与肝癌发生之间的关系。结果:肝癌组织中HBx氨基端变异集中于1～49 AA区域,突变率为4.1%;50～90 AA为保守区,突变率仅为0.46%。血清检测结果显示,HBx氨基端突变在肝癌患者中的发生率显著高于肝炎患者(2.2%vs1.8%,P<0.05);HBx第36位Ala/Thr/Pro→Ser的突变,在肝癌患者中的发生率为10.1%,显著高于肝炎患者中的2.1%[P<0.01,比数比(odds ratio,OR)=5.259,95%可信区间为1.499～18.444)]。A/T/P36S突变仅发生于C基因型病毒。结论:HBx氨基端突变的累积可能与肝癌的发生有关。HBx A/T/P36S突变能增加C基因型HBV感染者发生肝癌的危险度。

乙肝病毒对DNA修复基因和肝癌发生的作用

目的 以HBV转基因动物模型研究乙型肝炎病毒 (HBV) ,黄曲霉毒素 (AFB1) ,DNA修复基因和肝细胞肝癌 (HCC)发生的关系。方法 对HBVx基因转基因小鼠以相同的方式和剂量给予黄曲霉毒素 (AFB1)攻击 ,比较肝癌的发生率 ;同时用逆转录———热标记扩增 (RT -HOT -PCR)的方法 ,检查HBVx基因转基因小鼠HBVx整合阳性和阴性以及AFB1攻击后 ,癌组织与癌旁组织的DNA修复基因Brca2和Nthl1的RNA表达水平。结果 (1)黄曲霉毒素诱导 ,5 2周肝癌发生率HBVx整合阳性小鼠 2 9只 ,14只发生肝癌 (48.3% ) ;HBVx整合阴性小鼠 15只 ,3只发生肝癌 (2 0 .0 % )。两者有显著的差异 (P <0 .0 1)。(2 )HBVx整合阳性小鼠的肝组织DNA修复基因Brca2和Nthl1的RNA表达水平都低于HBVx整合阴性小鼠。经AFB1攻击形成的肝癌和癌旁组织 ,其DNA修复基因Brca2和Nthl1的RNA表达水平也低于HBVx整合阴性小鼠。结论 结果表明HBVx在宿主细胞的整合 ,影响了宿主DNA修复能力 ,从而导致宿主对致癌物质的敏感性增加 ,最终引起肝癌发生率的增加。

HBVx转基因小鼠肝组织基因表达谱的微阵列研究

目的 研究乙肝病毒 (HBVx)和黄曲霉毒素(AFB1)在诱发肝癌中的分子机理。方法 用AtlasTM cDNA表达阵列方法比较研究HBVx基因转基因小鼠HBVx基因整合 (+)和 (- )的小鼠肝组织 ,以及转基因小鼠经AFB1一次攻击的肝癌组织的基因表达谱的差异。结果 经HBVx基因整合 (+)的小鼠肝组织的DNA修复基因 ,药物代谢酶基因以及应激反应的效应因子的cDNA基因表达谱显示了明显的变化。实验结果提示出现变异的 30个cDNA基因表达谱中 2 9个 (96 .7% )与X基因的整合相关及 17个 (5 6 .7% )与AFB1的攻击有关。结论 HBV对宿主的感染 ,可能通过改变DNA修复系统和药物代谢酶系统来影响机体对AFB1的致癌敏感性 。

乙型肝炎病毒X基因区序列的系统发育树分析

目的:研究利用乙型肝炎病毒X基因区序列构建系统发育树进行基因型分析的可靠性。方法:从美国NCBI基因库中下载HBV全基因序列共2 49条,其中166条为已知基因型的序列,83条为未知型序列。利用ClustalX 1.8软件和TreeView软件对已知基因型的X区序列构建进化树图,分析由该方法获得的基因型是否与原来的吻合,并对未知型序列进行基因型分析,再用S区的进化树分析加以验证。结果:已明确基因型的166条序列利用X基因区序列分析得到的基因型与原先的基因型完全吻合。用X区和S区序列分析方法对83条未知型序列分析的结果是一致的,分别获得A型16条、B型17条、C型2 7条、D型2 1条及F型2条,未发现E、G和H型。结论:利用乙型肝炎病毒X基因区序列进行基因型分析是完全可靠的,有助于HBV的致病机制研究。

复制型HBV转基因小鼠的遗传与繁育研究

本文采用类似系祖建系的方法，对复制型ＨＢＶ转基因小鼠模型的１７、２１、２５三个系列进行了繁育，通过ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子杂交的方法，检测三个系列小鼠尾组织和血清的ＤＮＡ样品，以确定ＨＢＶ基因的整合和复制情况。结果表明，ＨＢＶ基因已稳定地遗传至第五代（Ｆ５），且各世代小鼠血清中都存在ＨＢＶＤＮＡ，此外，整合阳性小鼠的血清中能测出ＨＢＶＤＮＡ的比率很高，Ｆ１代为９４．４４％（１０２／１０８），Ｆ２、Ｆ３代为９５．３１％（６１／６４），故在繁育中可以通过测血清中的ＨＢＶＤＮＡ来确定小鼠是否整合。

EPHX代谢酶的遗传多态性和肝癌易感性的相关性研究

目的 探讨环氧化物水解酶 (EPHX)和谷胱甘肽转硫酶 (GST)基因型及血清黄曲霉素B1(AFB1)加成物含量和肝癌易感性的相关性研究。方法 以 3对肝癌高发家族 (6 2例 )和相对应的非癌对照家族成员 (5 8例 )为研究对象 ,分别采用放射免疫法 ,PCR法测定所有成员血清中AFB1 白蛋白加成物量、HBsAg及血细胞的EPHX ,GSTT1,GSTM1的基因型。结果 1.高发家族成员有 4 1.9% (2 6 / 6 2 )血清AFB1 白蛋白加成物含量高于所有被测成员的中位值 ,而对照家族仅有 15 .5 % (9/ 5 8)高于中位值 ,二组之间呈显著性差异 (P <0 .0 0 1)。2 .在对照家族和高发家族AFB1 白蛋白含量低于中位值的人群中GSTM 1,GSTT1,EPHX基因型的分布未见明显的差异 ;而AFB1 白蛋白含量高于中位值的高发家族人群 ,其EPHX 113编码位突变型百分率明显高于对照家族 (P <0 .0 0 1) ,但GSTT1,GSTM 1的基因型的分布无显著性差异。结论 EPHX基因 113编密子的突变与机体AFB1暴露后形成的加成物的含量增加有关 ,从而可以推断与个体对黄曲霉素的敏感性和肝癌的易感性相关。

黄曲霉毒素与乙型肝炎病毒对肝癌发生协同作用的前瞻性研究

我们利用最近建立的检测尿液黄曲霉毒素(AF)B_1及其代谢产物(AFP_1、AFM_1)和DNA加成物(AFB_1-N^7-Guanine)的方法,分别检测上海市区队列研究中发现的22例肝癌及其140名对照尿液AFB_1、AFP_1、AFM_1和DNA加成物,同时测定血清乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)。肝癌病例尿液AF检出率(59％)比对照高(38％)。DNA加成物阳性者肝癌相对危险度估计值(OR)为4.9。尽管AFP_1(OR=6.1)、AFM_1(OR=3.0)和AFB_1(OR=2.3)均与OR显著或接近显著增高有关,但伴随DNA加成物阴性时,AFP_1、AFM_1或AFB_1阳性并不显著增高OR。本文还发现HBsAg阴性者尿AF阳性OR仅增高1倍,而HBsAg阳性者伴尿AF阳性使OR增高11.5倍。以条件Logistic回归模型调整HBsAg、受教育程度、吸烟和重度饮酒等因素后,尿液检出AF的OR为3.8(95％CI:1.2～12.2)。

启东肝癌组织p53过表达的免疫组化检测

目的 了解p5 3突变在启东地区的肝癌发生中所起的作用。方法 应用免疫组化 (IHC)的方法对 90例肝癌和 75例癌旁组织切片进行p5 3蛋白检测。结果 在 90例肝癌中 ,有 4 0例 (44 .4 % )在核中表达为强阳性 ,2 5例 (2 7.8% )在核中表达为弱阳性 ;在 75例癌旁中 ,没有细胞核强阳性表达 ,仅 1例 (1.3% )有核弱阳性表达 ;肝癌的p5 3核表达显著高于癌旁 (P =0 .0 0 0 )。另外 ,在肝癌中有 9例 (10 % )为细胞质p5 3表达阳性 ,在癌旁中有 17例 (2 2 .7% )为细胞质表达阳性 ,肝癌的胞质p5 3表达显著低于癌旁 (P =0 .0 2 6 )。结论 p5 3基因突变和p5 3的功能失活在启东的肝癌发展中有着重要意义。

健脾理气方对人乙型肝炎病毒转基因小鼠不同时相血清黄曲霉毒素B_1—白蛋白加成物水平的影响

为了探讨HBV与AFD_1协同致肝癌及健脾理气方防治肝癌的机理,预先予HBV转基因小鼠灌服健脾理气方2.5g/kg.wt,qd×15d,再予AFB1 1mg/kg.wt,I.P.,用RIA法测经治疗和未经治疗转基因小鼠及正常小鼠7个时相血清AFB_1—白蛋白加成物浓度。HBV转基因小鼠较正常小鼠易于聚积AFB_1毒性。高峰相加成物水平显著升高,24h相仍维持较高水平。健脾理气方能显著降低该加成物水平,在24h时相使其降至正常水平,该结果提示,HBV与AFB_1协同致肝癌是由于HBV致肝损伤,对毒性致癌物清除障碍所致,健脾理气方能通过加速毒性致癌物清除而抑制肿瘤发生。

香菇多糖脂质体治疗鸭乙型肝炎初步观察

实验结果提示,单纯应用香菇多糖有降酶作用,并能提高血清白蛋白含量;香菇多糖经脂质体包裹后,能促进 DH BV 病毒血症阴转,抑制 DH BV 在肝内复制:香菇多糖脂质体对 DH BV 的抑制作用是通过增强机体免疫功能而实现的,此作用与肝脏炎症活动程度呈正相关.