蓝狐β-防御素1基因(vBD1)的真核表达及其抑菌活性分析

为研究蓝狐β-防御素1(vBD1)蛋白的生物学特性,本研究通过PCR扩增获得蓝狐v BD1基因的编码区全长序列,利用生物学软件对蓝狐v BD1基因编码的氨基酸序列进行生物信息学分析,并构建了真核表达重组质粒p PIC9K-v BD1,电转化至毕赤酵母菌株GS115,鉴定阳性的重组酵母菌经甲醇诱导表达,对表达目的蛋白进行了抑菌活性研究。生物信息学分析结果显示,蓝狐v BD1蛋白的三级结构与人类β-防御素1(hBD1)序列相似性达63.89%。Tricine-SDS-PAGE和western blot鉴定结果显示,蓝狐v BD1蛋白在毕赤酵母中能够分泌表达,诱导96 h其表达量最大。CFU计数法结果显示,终浓度为60μg/mL和120μg/mL的v BD1重组蛋白对大肠杆菌的抑菌率分别为22.92%和29.17%,对金黄色葡萄球菌的抑菌率分别为28.40%和30.18%,抑菌活性均在12 h达到最佳。本研究为探究蓝狐v BD1蛋白生物学功能及作用机制奠定基础。

鹿血提取物联合顺铂对卵巢癌小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响

目的:研究鹿血提取物鹿血晶、鹿血浆分别与顺铂联合使用对ID8卵巢癌荷瘤小鼠的抑瘤作用,以及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:建立小鼠ID8卵巢癌皮下荷瘤模型,接种第6 w随机分为模型对照组、顺铂1 mg/kg组、顺铂1 mg/kg+鹿血晶260 mg/kg组、顺铂1 mg/kg+鹿血浆65 mg/kg组。连续给药14 d后分离肿瘤、脾脏、卵巢等组织,游标卡尺测肿瘤直径计算肿瘤抑制率;流式细胞术检测荷瘤小鼠脾脏中CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞、MDSCs细胞和巨噬细胞体积分数;ELISA法检测小鼠血清促卵泡素(FSH)和促黄体生成激素(LH)含量;Real-time PCR检测卵巢的血管内皮生长因子(Vegf)mRNA表达;HE染色法检查组织形态学改变。结果:与模型对照组比较,各给药组小鼠肿瘤体积明显减小,顺铂1 mg/kg+鹿血浆65 mg/kg组肿瘤抑制率显著升高(P<0.01);与顺铂1 mg/kg组比较,联合给药各组小鼠脾脏MDSCs细胞体积分数显著降低(P<0.01),顺铂1 mg/kg+鹿血浆65 mg/kg组CD4^(+)T细胞体积分数明显升高(P<0.05)、CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞体积分数显著升高(P<0.01),顺铂1 mg/kg+鹿血晶260 mg/kg组中CD86^(+)/CD206^(+)巨噬细胞体积分数显著升高(P<0.01),联合给药各组卵巢内生长卵泡数量明显增加、闭锁卵泡数量减少,血清FSH、LH含量显著下降(P<0.01),顺铂1 mg/kg+鹿血晶260 mg/kg组小鼠卵巢组织中Vegf mRNA表达明显上调(P<0.05)。结论:鹿血提取物鹿血晶、鹿血浆分别与顺铂联用对卵巢癌小鼠具有抑瘤作用,可能与其对荷瘤小鼠的免疫调节、卵巢功能保护有关。

哺乳动物雄性生殖系统β-防御素的研究进展

β-防御素是哺乳动物体内一种重要的抗菌肽,广泛分布于黏膜上皮细胞和中性粒细胞中,在先天性免疫和获得性免疫中具有重要作用。近年来,β-防御素（beta-defensin,DB）被发现在哺乳动物雄性生殖系统中广泛表达,并参与对抗生殖系统微生物的感染,维持附睾上皮、附睾腔内的环境稳定,发挥抑菌抗炎的作用,同时与精子结合,调节精子的功能,参与动物有效生殖。迄今为止,雄性生殖系统β-防御素在人及鼠等物种的研究比较深入,但在其他哺乳动物的研究还很有限。本文结合已有的研究成果对β-防御素在哺乳动物雄性生殖系统的表达分布、参与哺乳动物有效生殖的方式和机制进行了综述,并对其应用前景做出展望。