渗透压对角膜上皮细胞的影响及牛磺酸对高渗环境细胞的保护作用

目的观察渗透压对体外培养的兔角膜上皮细胞的影响及牛磺酸对高渗环境细胞的保护作用,为人工泪液的处方制定提供理论依据。方法采用分离培养的兔角膜上皮细胞,分为低渗组(143,229和257 mOsm·L^-1)、等渗对照组(286 mOsm·L^-1)和高渗组(315,343和429 mOsm·L^-1),用不同渗透压的培养液作用3 h后,换回正常培养液培养3 d,记录作用3 h及恢复培养3 d时的细胞形态,并用MTT法检测作用3 h、恢复培养1 d和恢复培养3 d后的细胞活性。在正常培养液286 mOsm·L^-1中加入牛磺酸培养细胞24 h后,换为429 mOsm·L^-1的高渗培养液培养3 h后,换回含牛磺酸的等渗培养液恢复培养1 d,倒置显微镜下记录作用3 h及恢复培养1 d时的细胞形态,并用MTT法检测细胞活性。结果高渗环境会导致细胞活性降低,甚至死亡;低渗环境会改变细胞形态及活性。257 mOsm·L^-1渗透压组与等渗对照组相比,在作用3 h及恢复培养1和3 d后细胞形态及细胞活性差异无统计学意义。含有不同浓度牛磺酸培养基的各组细胞也有轻度肿胀,高渗培养基作用3 h后以及恢复正常培养基培养1 d后,细胞活性差异具有显著统计学意义(P<0.05)。结论泪液高渗透压会造成眼表损伤。应用渗透压为257 mOsm·L^-1的人工泪液,在对正常细胞无影响的条件下,可降低干眼患者泪液的高渗透压,有助于干眼病的治疗。牛磺酸作为细胞保护剂,可降低高渗透压对细胞的损害,在干眼病治疗方面,具有很好的应用前景。

HPLC与微生物检定法测定阿奇霉素滴眼液含量的比较研究

目的运用微生物检定法与HPLC法测定阿奇霉素滴眼液的含量,并比较其适用性。方法不同时间点抽取3个批号的阿奇霉素滴眼液,同时采用微生物检定法与HPLC进行检测阿奇霉素质量浓度。微生物检定法参照中国药典2005年版;HPLC法采用反相ODS-C18柱色谱柱,流动相为乙-腈0.1 mol·L-1磷酸二氢钾水溶液（30∶70）,流速为0.5 mL·min-1,柱温40℃,紫外检测波长为215 nm。结果室温留样观察12个月,经抗生素微生物检定法（效价法）检测,阿奇霉素滴眼液中阿奇霉素含量下降了8.53%~12.39%;经HPLC检测,阿奇霉素含量下降了17.29%~23.50%。结论高效液相色谱法与微生物检定法相比差异较大,前者只适用于阿奇霉素的检定,微生物检定法更能准确的反映阿奇霉素滴眼液的抗菌活性,在应用时应根据具体情况选择合适的检定方法。

眼库工作相关伦理学问题探讨

结合西安市眼库多年临床实践,着重探讨眼库实际工作中的相关伦理学问题,包括"自愿无偿捐献角膜"、"捐献者(供体)与手术患者(受体)的关系"、"手术适应症的选择"和"异种角膜的使用",以促进眼库工作的全面发展。

儿童穿透角膜移植50例临床研究

目的:探讨儿童穿透角膜移植的治疗及如何提高治愈率的问题。方法:对50例因各种原因所致角膜混浊儿童的54眼进行穿透角膜移植,术后随访6～18mo。结果:移植片透明率为80%(43/54)。术后38例患者裸眼视力有不同程度的提高。结论:在提高视力,预防弱视和完善视觉发育方面,儿童穿透角膜移植有重要意义。尽管儿童术后效果较成人差,但有重要的临床及社会意义。

浅谈眼库的建设与发展

本文结合西安市眼库实际工作经验,针对我国眼库的建设与发展提出观点。认为眼库工作除了在重视立法、宣传、标准性、安全性等问题的同时,还应在独立性、统一性和社会性三方面加强。独立性指眼库的机构设置、人员编制、资金管理应具有独立性。统一性指应加强中华眼库协会作用,统一全国眼库的操作模式。社会性指眼库同社会各界加强合作,加强眼库社会学理论的研究。再次呼吁政府和社会关注眼库的建设,支持眼库的发展。

圆锥角膜相关成纤维细胞的培养与鉴定

目的分离、培养并鉴定人圆锥角膜相关成纤维细胞(HKCs)。方法采用组织块贴壁法培养HKCs和正常人角膜成纤维细胞(HCFs),倒置相差显微镜和电子显微镜下分别观察细胞形态和超显微结构,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增生,Westernblot法检测成纤维细胞标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及α1-1型胶原蛋白(COL1A1)和α1-3型胶原蛋白(COL3A1)蛋白的表达水平。结果与HCFs相比,HKCs生长速度较快,胶原纤维变细减少,线粒体肿大,嵴消失,高尔基体明显扩张,内质网严重肿胀。培养后不同时间点2种角膜成纤维细胞A值比较,差异均有统计学意义(F组间=5023.13,P<0.01;F时间=38518.16,P<0.01),其中同一时间点HKCs细胞A值均明显大于HCFs细胞A值,差异均有统计学意义(均P<0.01)。HKCs和HFCs中α-SMA的相对表达量分别为120.00±5.77和100.00±0.00,COL3A1的相对表达量分别为158.33±4.41和100.00±0.00,COL1A1相对表达量为88.33±1.67和100.00±0.00,HKCs中α-SMA和COL3A1的相对表达量均较HCFs明显升高,HKCs中COL1A1的相对表达量较HCFs明显降低,差异均有统计学意义(t=-3.46,P<0.05;t=-13.23,P<0.01;t=7.00,P<0.05)。结论成功培养并鉴定HKCs,该细胞适用于建立体外圆锥角膜细胞模型。

现代护理伦理学在重症监护室31例角膜捐献者护理中的应用分析

角膜移植是临床治疗严重性角膜病变的最终手段。角膜捐献是角膜移植工作开展的基础,而医院发现潜在角膜捐献者是移植开展的重要环节。供体紧缺匮乏是角膜移植面临的最大难题[1]。自2015年停止死囚器官使用后,公民器官捐献成为我国唯一合法移植器官来源[2]。

金视清滴眼液抗炎、止痒和对微循环影响的实验研究

目的研究金视清滴眼液抗炎、止痒和对微循环的影响,探讨其治疗干眼病的作用机制。方法观察金视清滴眼液对角叉菜胶造成大鼠右足肿胀和磷酸组织胺引起的豚鼠右足痒阈的影响,以及对小鼠耳部微循环的影响。结果金视清滴眼液明显减轻了角叉菜胶造成大鼠右足肿胀,提高磷酸组织胺所致豚鼠致痒阈,并改善了小鼠耳部微循环。结论金视清滴眼液防治干眼病的作用与其抑制炎症、止痒和改善微循环作用有关。

异种角膜移植的伦理学探讨

通过实验室方法处理后,异种角膜具有无细胞、无病源、低抗原的特点,所以异种角膜移植在临床应用具有了技术上的可能性,但其能否通过伦理学的论证需要探讨:①异种角膜移植后能否引起人的特性改变,是否违背伦理道德;②动物保护问题;③异种角膜移植是否会传播某些人源性疾病从而可能危害公众健康。异种角膜移植同其他异种器官移植相比较有明显优势,可操作性强。在临床使用前应对其"安全性、有效性和伦理学"问题进行论证评估,对使用异种角膜的患者进行心理疏导,加强异种角膜"安全性"的研究,应重视对实验动物的尊重。异种角膜移植的开展在一定程度上可解决临床角膜匮乏的问题,为众多盲人重见光明开辟新的治疗途径。

HSV特异性转移因子治疗复发型HSVK的临床观察

利用单纯疱疹病毒特异性转移因子联合无环鸟苷滴眼液治疗４０例复发型单纯疮疹病毒性角膜炎（Ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｋｅｒａｔｉｔｉｓ，ＨＳＶＫ）患者，总有效率为１００％，治愈率为８６．６％。采用红细胞Ｃ３ｂ受体花环试验研究红细胞免疫功能的变化。其结果，１０例正常人与４０例治疗前患者比较（Ｐ＜０．０１），两组有显著性差异。４０例患者，治疗前与治疗后比较两组有显著差异（Ｐ＜０．０１）。表明ＨＳＶＫ患者治疗前免疫功能低下，用ＨＳＶ特异性转移因子治疗后，红细胞免疫功能显著提高。

浅谈遗体、器官捐献理论的建立

尸体解剖是医学科学研究发展的基础,器官移植是拯救生命、恢复健康的重要方法。在我国,因相关体制不健全和民众捐献意识淡薄,遗体和器官来源匮乏,长期制约着相关学科的发展。如何加强遗体、器官捐献工作成为亟待解决的重要问题。遗体、器官捐献理论系统科学地阐述民众在该项工作中的思想理论、意识形态所存在的问题,通过对古今、中外相关理论的总结研究,建立一套适合国情、深入浅出的理论体系,利用科学理论逐步改变传统观念对人们思想的束缚。该理论主要包括开展死亡教育,建立科学生死观、生命价值观。

人角膜基质间充质干细胞的分离培养及表型鉴定

目的建立人角膜基质间充质干细胞(HCS-MSC)体外分离培养、传代和鉴定等方法。方法无菌条件下,取眼科临床角膜移植术后剩余的供体角膜缘组织,去除上皮和内皮组织,将基质组织切成1mm×2mm的组织块,采用无动物源性血清的间充质干细胞培养液进行组织块贴壁法培养,倒置显微镜下动态观察细胞的生长形态及贴壁状态,将传代培养后的第三代细胞采用流式细胞分析法进行表型鉴定,液氮冷冻保存。结果采用人角膜缘基质组织块贴壁法培养,于培养后第7天开始向周围呈放射状长出细胞,14天左右长满培养皿,细胞形态呈均一梭形;传代培养后生长快速,于2~4天达90%融合;连续传代3次,其生长特性和形态不变,CD90,CD29和CD105阳性率>95%,CD34和CD-HLA-dr阳性率<3%。结论采用人角膜缘基质组织可分离培养出间充质干细胞,为角膜组织修复、重建及对抗免疫排斥反应等奠定基础。

鸵鸟去细胞异种角膜基质载体异位移植对BALB/c小鼠外周血T细胞亚群的影响

背景 鸵鸟去细胞角膜基质具有与人角膜基质相似的天然结构,有望成为直接应用或构建生物角膜理想的载体材料之一. 目的 用鸵鸟角膜制备去细胞基质载体,研究其免疫原性,为产业化开发早日用于临床提供实验基础.方法 收集新鲜鸵鸟和猪眼球各20个,采用低温冷冻联合酶消化及干燥剂脱水法制备鸵鸟及猪去细胞角膜基质载体,用Co^60照射法进行消毒.按随机数字表法将雄性BALB/c小鼠45只随机分为伪手术组、猪去细胞角膜基质组和鸵鸟去细胞角膜基质组,伪手术组小鼠仅制作囊袋,不植入异种角膜基质片,其余两组分别取干燥脱水法制备的猪、鸵鸟去细胞角膜基质载体（复水后每片湿质量为10 mg）异位植入BALB/c小鼠背部皮下,术后观察伤口愈合情况,并分别于术后7、14、28 d获取BALB/c小鼠外周血,进行免疫荧光标记及流式细胞仪分析,比较两种异种角膜基质对小鼠CD4^＋、CD8^＋、CD25^＋表型的动态影响.结果 猪、鸵鸟去细胞角膜基质载体小鼠植入处皮肤无红肿及渗出,伤口愈合良好.术后7、14和28 d,伪手术组、猪去细胞角膜基质组和鸵鸟去细胞角膜基质组外周血中CD4^＋细胞百分率的差异均无统计学意义（F=0.74,P=0.50;F=0.39,P=0.05;F=3.46,P=0.58）;外周血中CD8^＋细胞百分率的差异均无统计学意义（F=1.75,P=0.21;F=1.14,P=0.35;F=0.78,P=0.48）;外周血中CD25^＋细胞百分率差异亦均无统计学意义（F=0.52,P=0.61;F=3.53,P=0.62;F=2.42,P=0.13）.结论 鸵鸟去细胞角膜基质载体的免疫原性低,具有重要的开发价值.

人角膜基质间充质干细胞外泌体的分离制备及鉴定

目的制备人角膜基质间充质干细胞(human corneal stromal mesenchymal stem cells,HC-MSCs)外泌体并进行生物学鉴定。方法采用组织块培养技术获得HC-MSCs,利用超速离心法从HC-MSCs培养上清中分离制备外泌体,通过蛋白免疫印迹、透射电镜、纳米颗粒跟踪分析法进行鉴定。结果分离的纳米囊泡表达外泌体特异性标志蛋白CD63,CD81和TSG101,在透射电子显微镜下可见其呈圆形、卵圆形和杯盘状囊泡,直经113.3 nm。结论从HCMSCs培养上清中可分离出具有典型结构及特征的外泌体,为HC-MSCs外泌体的作用机制及其在眼科的转化应用研究奠定坚实的基础。

圆锥角膜急性角膜水肿治疗后深板层角膜移植临床分析

目的通过对圆锥角膜急性角膜水肿治疗后行深板层角膜移植的病例分析,探讨眼前节相干光层析成像术(AS-OCT)对急性圆锥治疗后行角膜移植手术的手术方式选择的指导意义。方法回顾性病例对照研究。收集2017年6月至2019年12月我院收治的圆锥角膜急性水肿患者32例(32只眼),均采用保守妥布霉素地塞米松眼膏包眼方法待瘢痕形成后行角膜移植,分析急性期AS-OCT影像与最终所行角膜移植手术方式的关系。结果32例圆锥角膜患者急性水肿期AS-OCT影像中后弹力层脱离伴破裂卷曲10例(31.250%),后弹力层脱离伴破裂15例(46.875%),单纯后弹力层脱离7例(21.875%);32例患者最终角膜移植手术方式,穿透角膜移植23例,深板层角膜移植9例(其中大气泡法5例,手剥法4例)。Spearman相关分析深板层角膜移植手术方式完成与无后弹力层破裂呈正相关r=0.605,95%,CI:0.456~0.730,(P<0.01)。结论圆锥角膜急性水肿期单纯后弹力层脱离的病例深板层角膜移植成功率高,AS-OCT对急性水肿期后圆锥角膜患者角膜移植方式的选择有指导意义。

眼部常见酵母样菌的快速鉴别及药敏实验方法的建立

真菌性角膜炎、角膜溃疡等是一种危害极大的眼病,特别是近十年来随着抗生素的滥用,真菌感染,尤其是酵母类菌所致的感染明显增加[1,2].

厂务公开推行的问题及对策

目前企业厂务公开存在认识不到位,操作无规范,监督机构不力等问题.为此首先要加大厂务公开的宣传教育力度,其次要建立规范有效的运行机制,三是要建立健全有力的监替机制.

异种去细胞角膜基质浸提液对CHL细胞毒性的实验研究

目的通过鸵鸟去细胞角膜基质浸提液对中国仓鼠肺纤维细胞（CHL）毒性的实验观察，筛选出浸提液的最大无毒浓度，为进一步完成该去细胞角膜基质材料的染色体畸变实验奠定基础。方法采用细胞培养的方法，将鸵鸟去细胞角膜基质材料制备成浸提液，用浸提原液、1：2，1：4稀释的浸提液与传代培养的CHL细胞共同培养，同时设立阴性、阳性对照，参考MTT比色法评价24h后对细胞生长的影响。结果1：4稀释的浸提液既无毒性，又具有促进细胞生长的作用。结论采用CHL细胞进行细胞毒性试验，依据分级结果并结合细胞形态学特征可筛选出鸵鸟去细胞角膜基质浸提液进行CHL细胞染色体畸变实验的基准无毒浓度。

以干燥脱水法保存的异种角膜基质为载体构建人工生物角膜上皮组织

目的:观察以干燥脱水法保存的鸵鸟角膜基质为载体构建人工生物角膜上皮组织的生物学特性。方法:采用组织块培养法获得新西兰大白兔角膜缘干细胞,经胰蛋白酶消化法获得细胞,种植于干燥脱水法保存的鸵鸟角膜板层基质上,采用气液界面培养法进行培养,通过倒置显微镜、透射电子显微镜、荧光显微镜观察其形态学、生长特点,超微结构及免疫学特征。结果:在干燥脱水法保存的鸵鸟角膜基质上种植兔角膜缘干细胞,接种72h后,细胞形成单层,移置气液交界面后继续培养7～10d,逐渐形成复层。经光镜、透射电镜、及免疫学检测显示其具有角膜上皮组织的生物学特性。结论:兔角膜缘干细胞能够在干燥脱水法保存的鸵鸟角膜基质载体上生长,并可形成复层,基本具有正常角膜上皮细胞的形态、超微结构和生物学特性。