基于网络药理学和分子对接探究黄连解毒散治疗猪传染性胃肠炎的作用机制

为探究黄连解毒散(HLJDS)治疗猪传染性胃肠炎(TGE)的作用靶点及作用机制,本研究通过中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)检索HLJDS中的所有化学成分,以口服生物利用度(OB≥30%)、类药性(DL≥0.18)为条件筛选HLJDS的活性化合物及HLJDS活性化合物潜在靶点的数量和名称。利用Gene cards数据库和CTD数据库检索与筛选TGE的相关靶点和HLJDS作用于TGE的相关靶点。采用微生信在线Venn图制作工具分析HLJDS活性化合物和TGE的共同靶点。将上述数据采用Cytoscape 3.9.1软件构建中药-活性化合物-靶点的网络,其中度值>32的化合物可能是关键的化合物或者作用靶点。将HLJDS作用于TGE的相关靶点上传至STRING数据库,获得HLJDS作用于TGE的PPI网络。利用Cytoscape软件中的相关工具分析靶点的网络拓扑学参数,并通过这些参数筛选HLJDS作用于TGE的关键靶点。结果显示,从HLJDS共筛选到77个活性成分和825个药物作用靶点,并筛选到950个TGE相关靶点,其中HLJDS的活性成分与TGE交集的靶点有202个。中药-活性化合物-靶点的网络图结果显示,HLJDS通过77个有效活性化合物作用于202个HLJDS与TGE交集的靶点。PPI网络分析结果显示,肿瘤坏死因子(TNF)、表皮生长因子受体(EGFR)、一氧化氮合酶3 (NOS3)、Toll样受体4 (TLR4)与信号转导和转录活化因子3(STAT3)等31个靶点可能是HLJDS治疗TGE的关键靶点。通过DAVID数据库对HLJDS作用于TGE的相关靶点进行GO功能分析和KEGG信号通路富集分析。采用Auto Dock Vina 1.1.2将HLJDS度值前6的主要活性化合物PPI网络中前6的关键靶点进行分子对接并获得结合能。将度值前15的HLJDS活性化合物和关键靶点TLR4、TNF-α进行分子对接,通过结合能预测HLJDS活性化合物及对照化合物(姜黄素和维A酸)与TLR4、TNF-α的分子对接效果。GO功能和KEGG信号通路分析结果显示,HLJDS作用于TGE的相关靶点涉及生物过程333个、细胞组分51个、分子功能88个主要功能;涉及AGE-RAGE信号通路、PI3K-Akt信号通路和沙门氏菌感染等与TGE相关的信号通路。分子对接结果显示,HLJDS 6个主要活性化合物与6个关键核心靶点均能够自发结合。且相较于对照化合物姜黄素和维A酸,HLJDS中的黄藤素、黄连素、黄芩素和槲皮素等14个活性化合物与TLR4、TNF-α的结合能更低,结合效果更好。上述结果表明,HLJDS可通过多成分、多靶点、多信号通路作用于TGE的相关靶点,发挥治疗TGE的作用。本研究为HLJDS的进一步开发与应用提供研究基础与方向。

广西地区鸽圆环病毒Cap和Rep基因的克隆及遗传进化分析

研究旨在了解广西某肉鸽场鸽圆环病毒(PiCV) Cap和Rep基因的遗传变异情况,通过PCR技术对感染PiCV的鸽组织样品克隆Cap和Rep基因并进行测序及序列分析。结果显示,克隆的Cap和Rep基因大小分别为816 bp和954 bp。核苷酸序列同源性比对分析结果显示,克隆的Cap和Rep基因与XJ1毒株核苷酸同源性最高,分别为95.5%和97.6%。遗传进化分析结果显示,Cap和Rep基因与XJ1毒株亲缘关系较近。研究表明,广西鸽群中存在PiCV流行,其Cap和Rep基因与XJ1毒株核苷酸同源性最高,亲缘关系较近,这为广西地区PiCV的诊断及防控提供了重要参考。

鸽Ⅰ型副黏病毒、圆环病毒和疱疹病毒混合感染的诊断

研究旨在确诊广西某肉鸽场中出现神经症状的病鸽并为该场提供相应的防治方案,通过临床诊断、病理解剖、分子生物学检测、细菌分离、病毒分离等方法对广西某肉鸽场病鸽进行诊断。结果显示,剖检可见病鸽肝脾肿大、坏死,花斑肾;分子生物学检测结果显示,鸽Ⅰ型副黏病毒(pigeon paramyxovirus type 1,PPMV-1)、圆环病毒(pigeon circovirus,PiCV)和疱疹病毒(pigeon herpesvirus,PiHV)为阳性;对病样进行细菌培养,结果未分离到细菌;将病样接种SPF鸡胚进行病毒分离,结果显示,尿囊液血凝效价稳定在8 log2,其血凝性可被新城疫病毒(NDV)阳性血清抑制,但不能被禽流感病毒(AIV)阳性血清抑制。研究表明,最终诊断结果为PPMV-1、PiCV和PiHV混合感染。

不同采摘时期桃金娘叶三萜的动态变化研究

为探究不同采摘时期桃金娘叶三萜含量的动态变化,寻找桃金娘叶最佳采摘时期,本文以乙酸乙酯为提取溶剂超声辅助提取桃金娘叶三萜,采用香草醛-高氯酸显色法在545 nm处测定吸光度,计算不同采摘时期桃金娘叶三萜含量的变化。结果显示,2019年3—6月采摘的桃金娘叶中三萜含量呈上升趋势,6月以后桃金娘叶中三萜含量逐渐下降,其中5月14日至7月24日采摘的桃金娘叶三萜含量较高,6月20日采摘的桃金娘叶三萜含量最高,为22.54 mg·g^(-1)。因此,桃金娘叶适宜在6月份进行采摘。

超临界CO_2流体萃取苦丁茶多糖的工艺优化

为了探讨超临界CO_2萃取广西苦丁茶中多糖的工艺条件,该研究采用超临界CO_2流体萃取技术分离苦丁茶多糖,利用苯酚-硫酸法对苦丁茶多糖含量进行测定,并考察不同萃取温度(35、40、45、50、55、60℃)、萃取压力(20、25、30、35、40、45、50 MPa)、萃取时间(30、60、90、120、150 min)、夹带剂(甲醇、95%甲醇、50%甲醇、无水乙醇、95%乙醇、50%乙醇)以及夹带剂(95%乙醇)用量(2.0、2.5、3、3.5、4.0、4.5、5.0 mL·min^(-1))对多糖得率的影响,通过设计正交实验方案,对超临界CO_2萃取广西苦丁茶多糖的提取工艺进行优化。结果表明:通过单因素和正交实验考察了苦丁茶多糖提取的主要影响因素,得到的最佳萃取工艺条件为萃取温度50℃,萃取压力40 MPa,夹带剂流量3.5 mL·min^(-1),萃取时间150 min;采用苯酚-硫酸法对苦丁茶多糖含量进行测定。在最优萃取条件下得到的苦丁茶多糖的提取率为7.05%。由此可知,采用超临界CO_2流体萃取,具有提取温度低、萃取率高、萃取周期短、低耗以及污染小等优点,适用于苦丁茶多糖的提取。

中药对猪场常见病原菌的药敏特性及联合抑菌活性评价

以常见的50味中药提取液对大肠杆菌、巴氏杆菌、链球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和放线杆菌等6种猪场常见病原菌进行药敏试验,并在测定单味中药对上述病原菌最小抑菌浓度(MIC)的基础上,采用微量棋盘稀释法进行中药两两联用抑菌活性试验,通过计算抑菌浓度指数(FICI)判断药物互作效应。药敏试验结果表明,乌梅、大黄、黄芩、金银花、连翘、野菊花和五倍子对6种猪场常见病原菌均表现为高度敏感。药物MIC测定结果显示,以乌梅、大黄、桂枝、金银花、连翘、野菊花和五倍子等7味中药对6种猪场常见病原菌的MIC较低,故选取这7味中药进行两两联合用药试验。在中药两两联用抑菌活性试验中,乌梅+桂枝、大黄+桂枝、桂枝+连翘、桂枝+野菊花、桂枝+五倍子呈拮抗效应;乌梅+五倍子、大黄+连翘、大黄+野菊花、大黄+五倍子、金银花+连翘、金银花+野菊花、连翘+野菊花呈协同效应;乌梅+大黄、乌梅+金银花、乌梅+连翘、乌梅+野菊花、大黄+金银花、桂枝+金银花、金银花+五倍子、连翘+五倍子、野菊花+五倍子呈相加效应。

复合益生菌对鸽粪发酵生产饲料的影响

目的:益生菌发酵鸽粪生产饲料研究。方法:本文用复合益生菌(枯草芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌、放线菌、放线菌等)、鸽粪、玉米粉、麸皮和豆粕混合发酵10 d,比较发酵鸽粪前后的品质变化。结果:经过复合益生菌发酵后不添加辅料组和添加辅料组粪臭味变成酸香味,质地变松软,pH值下降,粗蛋白和粗纤维含量少量提升。结论:通过复合益生菌发酵鸽粪生产饲料,可改善鸽粪适口性,消除鸽粪异味,维持鸽粪营养价值,为生产廉价鸽粪蛋白质饲料提供依据。

铜绿假单胞菌生物膜研究进展

条件致病菌铜绿假单胞菌(PA)是一种能形成生物膜的革兰氏阴性菌,作者综述了PA生物膜形成的生物学机制,包括菌体黏附、胞外多糖Psl和Pel、藻朊酸盐等参与细菌生物膜成熟的过程及群体感应系统调节相关因子表达,从而调控细菌形成生物膜应对不良环境。此外还概括了将生物膜作为靶点开发的药物等生物膜相关的研究进展。生物膜是菌体逃避有害刺激的护盾,研究其结构、形成及致病机理,了解PA产生耐药性的分子机制,对于通过调节生物膜形成或调控生物膜相关因子的表达进而优化PA的抗感染治疗有十分重要的意义。

响应面法优化超声辅助提取桃金娘叶三萜工艺及抗氧化活性研究

利用超声辅助提取法对桃金娘叶三萜进行提取,采用单因素试验和响应面法优化超声辅助提取工艺,通过香草醛-高氯酸法对三萜含量进行测定,并探讨其抗氧化能力。结果表明,各因素对三萜含量的影响大小依次为超声功率>液料比>超声时间,三萜最佳提取工艺为提取溶剂乙酸乙酯,液料比50∶1(mL/g)、超声功率294 W,超声时间90 min。在最优的提取条件下,桃金娘叶三萜的平均含量为15.72 mg/g,优于传统浸提法和水浴提取法。在桃金娘叶三萜浓度为12.27μg/mL时,对DPPH自由基清除率可达92.52%,具有较强的抗氧化性。

超临界CO_(2)萃取桃金娘果及其挥发性成分研究

为研究超临界CO_(2)萃取桃金娘果工艺条件及其挥发性成分的物质组成,实现桃金娘资源综合利用,考察了不同夹带剂、萃取温度、CO_(2)流量、萃取压力、萃取时间对桃金娘果提取得率的影响,通过单因素、正交试验,以桃金娘果萃取物得率为考察指标对超临界CO_(2)萃取工艺参数进行优化;采用气相色谱-质谱分析桃金娘果萃取物中的挥发性成分。结果显示,最佳萃取工艺条件为:萃取压力12 Mpa、萃取温度35℃、CO_(2)流量17.5 g/min、萃取时间为150 min。在优化的萃取条件下桃金娘果萃取物得率为10.52%。桃金娘果萃取物共分离鉴定出20种挥发性成分,占总量的74.56%,主要为酯类、酸类、烃类、醇类、醛类成分。此研究为超临界CO_(2)萃取桃金娘果中的活性成分提供基础数据,并为桃金娘的进一步开发利用提供参考。

黄藤素对铜绿假单胞菌QS毒力因子的影响

为了研究黄藤素对铜绿假单胞菌群体感应系统中毒力因子表达的影响,试验使用亚抑菌浓度的黄藤素(6.25×10^(-2)g/m L、3.13×10^(-2)g/m L)作用于铜绿假单胞菌,并测定亚抑菌浓度的黄藤素对铜绿假单胞菌生长曲线、外毒素A、绿脓菌素、弹性蛋白酶、蛋白水解酶的影响。结果表明:在亚抑菌浓度条件下,黄藤素对铜绿假单胞菌的生长均无明显影响,但能明显下调铜绿假单胞菌群体感应系统中外毒素A、绿脓菌素、弹性蛋白酶、蛋白水解酶的表达。说明黄藤素能够通过影响铜绿假单胞菌群体感应系统中毒力因子的表达来影响铜绿假单胞菌生物膜的形成,发挥抗病抑菌的作用。

桃金娘根中没食子酸和总多酚含量测定

目的：测定桃金娘根中没食子酸和总多酚的含量。方法没食子酸的含量测定采用超高效液相色谱法。色谱条件：以甲醇-0.5%磷酸（15︰85）为流动相,采用二级管阵列检测器（PDA）检测,检测波长为215 nm,流速为0.2 mL/min。总多酚的含量测定采用分光光度法,以没食子酸为对照品,福林酚试剂为显色剂,在748 nm波长下进行测定。结果没食子酸在3.853～115.6μg/mL（r=0.9999）浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,回收率为98.73%～100.76%。总多酚分析的线性范围为1.0～7.0μg/mL（r=0.9995）,回收率为98.04%~101.17%。结论该方法简便、快速、重现性好,可用于桃金娘根的质量控制及定量分析。

桃金娘根总多酚的超声提取及抗氧化活性研究

目的探讨桃金娘根总多酚的超声提取工艺条件及其抗氧化活性。方法采用单因素和正交实验,对桃金娘根总多酚的提取工艺进行优化;采用福林酚试剂法在紫外-可见分光光度计下对桃金娘根总多酚的吸光度进行测定,计算其提取得率。采用1,1-二苯-2-苦基肼自由基(DPPH·)清除率和总抗氧化活性能力对桃金娘根总多酚的抗氧化活性进行评价。结果最佳提取工艺条件为乙醇浓度60%,料液比1∶40(g/mL),提取温度60℃,提取时间50 min,在此条件下提取得率达78.03 mg/g;桃金娘根总多酚的总抗氧化活性和DPPH·清除率均高于抗坏血酸。结论超声提取适用于桃金娘根总多酚的提取;桃金娘根总多酚为一种天然的抗氧化活性剂和自由基清除剂。

桃金娘果多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

【目的】探讨桃金娘果多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。【方法】腹腔注射环磷酰胺80μg/g BW,1次/d,连续3 d,建立小鼠免疫抑制模型。将造模成功的小鼠随机分为5组(每组16只):模型组、黄芪多糖组、桃金娘果多糖低、中、高剂量组。另设16只健康小鼠为正常组。黄芪多糖组每只小鼠按200μg/g BW剂量腹腔注射黄芪多糖混悬液,桃金娘果多糖低、中、高剂量组分别按50、100、200μg/g BW剂量腹腔注射桃金娘果多糖混悬液,正常组和模型组每只小鼠腹腔注射等体积的生理盐水,1次/d,连续7 d。试验结束后,分别测定小鼠脏器指数(胸腺、脾脏)、血清中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)、溶菌酶(LZM)的含量和过氧化物酶(POD)活性。【结果】桃金娘果多糖不同剂量组小鼠胸腺指数和脾脏指数均有不同程度提高,尤以桃金娘果中剂量组最高,与模型组相比差异极显著(P<0.01)。桃金娘果多糖不同剂量组IL-6、IL-1β血清细胞因子含量均极显著高于模型组(P<0.01);桃金娘果多糖低、中剂量组的血清IFN-γ、IL-2含量相较于模型组都有所提升,但差异均不显著(P>0.05),桃金娘果多糖高剂量组的IFN-γ、IL-2含量均极显著高于模型组(P<0.01)。桃金娘果多糖不同剂量组小鼠的POD活性和LZM含量均极显著或显著高于模型组(P<0.01;P<0.05)。【结论】桃金娘果多糖中剂量即100μg/g BW对免疫抑制小鼠免疫功能的恢复效果最佳。

UPLC法同时测定桃金娘果中4种酚类成分

建立了UPLC同时测定桃金娘果中没食子酸、鞣花酸、白皮杉醇和白藜芦醇4种酚类物质的方法。桃金娘果样品经甲醇超声提取后采用WatersCORTECSUPLCT3色谱柱(2.1mm×100mm,1.6μm);流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液进行梯度洗脱程序;流速0.2mL/min;柱温35℃;检测波长为280nm。结果显示桃金娘果中的4种成分10min内能够完全分离,在测定的质量浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9990;平均加样回收率在95.1%~102%之间,RSD1.5%~2.8%;检出限分别为7.55、2.32、63.7、4.59ng/mL。该法简便快速,具有较高准确性和重复性,可用于桃金娘果药材的质量控制。

混合益生菌发酵桃金娘的工艺优化及其抗氧化性研究

试验以植物乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌4种混合益生菌发酵桃金娘,采用单因素试验和正交试验优化桃金娘的发酵工艺。在桃金娘发酵过程中控制含水量、接种量、发酵时间,采用比色法,测定其发酵后总黄酮的含量。结果表明,最佳发酵工艺为含水量40%、接种量5%、发酵时间48 h。在此条件下发酵桃金娘水浴提取得到总黄酮含量为417.26 mg/L,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率较低而对2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基清除率较高。

苦丁茶有效成分及药理活性的研究进展

苦丁茶是我国民间的一种传统用药,富含三萜类、黄酮类、多酚类、挥发油以及多糖等多种有效物质成分,具有防治心血管疾病、抗氧化、降血脂以及抗病毒等保健及药用功效。为更好地开发和利用其药用价值,本文综述了近年来苦丁茶主要化学有效成分及其药理活性的研究进展,以期为进一步研究和开发苦丁茶提供参考。

桃金娘多糖对肉鸽生产性能和免疫功能的影响

试验探讨了桃金娘多糖对乳鸽生产性能和免疫功能的影响。将160只初生乳鸽和40对亲鸽平均分成4组,对照组补饲普通保健砂,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在普通保健砂中添加1%、2%、3%的桃金娘多糖。结果发现,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的乳鸽体重、日增重、脾脏指数、法氏囊指数、血清PO活性显著高于对照组(P<0.05);Ⅱ、Ⅲ组血清溶菌酶活性显著高于对照组(P<0.05)。试验表明,桃金娘多糖可提高乳鸽生长性能,促进免疫器官生长发育,提高血清溶菌酶、PO活性,增强机体非特异性免疫;添加浓度以2%～3%为宜。

桃金娘化学成分及生物活性的研究进展

桃金娘(Rhodomyrtus tomentosa)是一种野生药用植物资源,具有新兽药开发潜在利用价值。作者主要介绍了桃金娘资源分布情况,综述了国内外桃金娘化学成分及其生物活性研究进展和临床应用概况,旨在为今后桃金娘在兽药学的研发提供理论基础。

黄藤素研究进展

黄藤素是中国自行研制的纯天然植物药,主要用于治疗妇科炎症、外科感染、菌痢、肠炎、呼吸道及泌尿道感染、眼结膜炎等。作者就近年来黄藤素的提取及人工合成研究、检测方法、药理作用进行综述,以期为黄藤素作为新兽药的开发利用提供参考。