流行性乙型脑炎病毒NS5蛋白的表达

目的 在大肠杆菌中表达并纯化流行性乙型脑炎病毒NS5蛋白 ,为进一步研究乙脑病毒NS5蛋白的结构与功能奠定基础。方法 根据乙脑病毒NS5蛋白的基因序列 ,设计两对PCR引物 ,采用RT -PCR法分别扩增乙脑病毒JaOH0 5 66株部分及全长NS5基因。将扩增产物分别克隆到表达载体 pQE3 0。筛选重组质粒 ,转化大肠杆菌表达重组蛋白。重组蛋白经金属柱亲和层析纯化。结果与结论 获得了含部分及全长乙脑病毒NS5基因的重组质粒 ,重组质粒经限制性酶双酶切、DNA序列分析及PCR扩增筛选证实。在大肠杆菌中表达出了带 6个组氨酸头的部分及全长的重组乙脑病毒NS5蛋白。经SDS -PAGE及Western