猪MOV10基因克隆表达及其对PRRSV增殖的影响

为了研究猪MOV10基因功能及其在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染过程中的作用,试验成功克隆出猪MOV10基因并进行序列比对,在细胞水平上过表达猪MOV10基因并检测其在细胞中的表达和定位,通过双荧光报告系统检测试剂盒和实时荧光定量PCR检测猪MOV10基因诱导Ⅰ型干扰素的表达,以及Western-blot和空斑试验检测MOV10基因对PRRSV增殖的影响。结果表明:猪MOV10基因氨基酸序列与人MOV10基因的同源性为92.1%,猪MOV10基因能在细胞中表达,且为胞浆定位蛋白;PK-15细胞过表达猪MOV10基因可诱导IFN-β的表达,Marc-145细胞过表达猪MOV10基因可显著抑制PRRSV的增殖。说明猪的免疫系统与人的相似度较高,有可能成为研究人类免疫更好的动物模型,MOV10基因可抑制PRRSV的增殖,也为PRRSV防治药物的开发提供了新药物靶标。

血红素氧化酶1调控巨噬细胞极化对动脉粥样硬化的影响

目的探讨血红素氧化酶1(HO-1)调节巨噬细胞对动脉粥样硬化的作用。方法100 mg/L脂多糖(LPS)和20 mg/L白介素4(IL-4)分别诱导RAW264.7细胞24 h,提取信使核糖核酸(mRNA)和蛋白,实时定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测LPS和IL-4诱导后巨噬细胞中HO-1、CD163和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测LPS和IL-4诱导巨噬细胞后HO-1蛋白表达。大体油红O染色检测载脂蛋白E敲除(ApoE-/-)小鼠喂食高脂饮食后主动脉斑块面积变化,RT-qPCR和Western blot检测主动脉中HO-1 mRNA和蛋白表达。组织免疫荧光检测HO-1在主动脉窦部斑块中与促炎型(M1)和抑炎型(M2)巨噬细胞的共定位表达。结果LPS和IL-4成功诱导巨噬细胞分化为M1型与M2型巨噬细胞;IL-4诱导巨噬细胞中HO-1表达显著高于LPS及对照组(P<0.05);动脉粥样硬化模型构建成功;HO-1在ApoE-/-小鼠中表达显著高于C57BL/6对照组(P<0.05),主动脉窦中HO-1与CD206的共定位表达显著高于HO-1与CD86。结论HO-1在M2型巨噬细胞中的表达显著高于M1型巨噬细胞,在动脉硬化发展中起保护作用。

真核起始因子4E对小鼠动脉粥样硬化发生、发展的炎症调节作用

目的探讨真核起始因子4E(eIF4E)在小鼠动脉粥样硬化发生、发展过程中的炎症调节作用。方法分别用200 ng/μl脂多糖(LPS)和20 ng/μl白细胞介素-4(IL-4)诱导RAW264.7细胞12 h后提取mRNA,24 h后提取蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting检测eIF4E mRNA和蛋白在M1型和M2型巨噬细胞中的表达变化。复制ApoE^-/-动脉粥样硬化小鼠模型,检测小鼠腹主动脉eIF4E mRNA和蛋白表达变化;组织免疫荧光检测eIF4E在主动脉根部中分别与M1型和M2型巨噬细胞中的共表达。结果M1型巨噬细胞eIF4E mRNA和蛋白表达高于M2型巨噬细胞(P<0.05)。在ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化模型中,ApoE^-/-小鼠腹主动脉eIF4E mRNA和蛋白表达高于C57BL/6J小鼠(P<0.05);eIF4E与CD86的共定位表达高于eIF4E与CD206的共定位表达。结论eIF4E在动脉粥样硬化的发展过程中主要在M1型巨噬细胞中起作用,进而对动脉粥样硬化产生影响。

中医药多靶点治疗非小细胞肺癌的作用机制和研究进展

肺癌是一种恶性肿瘤,发病率在世界范围内排名第一,具有发病进展迅速、复发频繁、预后差、五年生存率低等较多特点,目前治疗手段主要包括放射治疗、药物治疗和免疫治疗等。近年来,中医药在肿瘤发生发展过程中所发挥的重要作用已备受关注,中医药与非小细胞肺癌连接愈发紧密。文章对近3年来中医药在非小细胞肺癌症中的作用机制及研究进展进行简要分析,进而总结近年来对非小细胞肺癌有明显治疗效果的中医药物并深入讨论其作用靶点和作用机制。