蜡梅热激蛋白基因CpHSP70-1的克隆、亚细胞定位与表达分析

在已构建的蜡梅花转录组数据库EST序列分析的基础上,采用RACE技术克隆获得蜡梅热激蛋白HSP70的cDNA序列,命名为CpHSP70-1(GenBank登录号:KR071130).该序列全长2 520bp,包括1 962bp的完整开放阅读框,编码653个氨基酸蛋白序列,含有3个HSP70家族典型基序.CpHSP70-1蛋白与其他真核生物的HSP70蛋白具有较高的同源性,聚类分析显示其属于定位于细胞核/细胞质的蛋白.亚细胞定位结果支持该蛋白分布于细胞核的预测.利用实时荧光定量PCR对CpHSP70-1基因的表达特性进行分析,其在各组织中均有不同程度的表达,其中在成熟叶片中表达量最高;在不同花发育阶段呈现持续稳定的表达模式;该基因在低温和高温诱导下表达量提高,而且对高温的响应更为敏感.

乙烯对蜡梅切花开放衰老及乙烯受体基因表达的影响

为探索乙烯是否参与蜡梅花朵开放衰老进程的调控,利用气相色谱法测定分析不同发育阶段花朵的乙烯释放情况,同时分析乙烯、1-甲基环丙烯(1-MCP)处理对切花开放衰老进程和乙烯受体基因表达的影响。结果表明:蜡梅花朵开放衰老过程中有微量乙烯的产生,在盛开期出现峰值;外源乙烯显著加快了花朵开放衰老进程,缩短切花瓶插寿命1.9 d,而1-MCP处理则延长瓶插寿命2.4 d;存在受乙烯和1-MCP影响其在蜡梅花朵中表达的乙烯受体基因成员CpETR-1、CpETR-2、CpETR-3,且3个基因的转录水平变化与开放衰老进程关联较为紧密。说明蜡梅乙烯释放量虽然很低,但乙烯参与了蜡梅花朵开放和衰老的调控,影响其进程和相关乙烯受体基因的表达。

蜡梅小GTP结合蛋白基因CpRAC1的克隆及表达分析

从蜡梅(Chimonanthus praecox)花cDNA文库中克隆获得了1个植物特有的小GTP结合蛋白基因CpRAC1(GenBank accession:KR071131.1),该基因cDNA全长1 089 bp,包含1个597 bp的ORF框。生物信息学分析表明该基因编码的蛋白无信号肽和跨膜结构域,同源比对和进化树分析表明CpRAC1含有Rho超家族的保守结构域,与其他物种的Rac蛋白同源性高,属于第一类植物Rac蛋白。实时荧光定量PCR分析表明,该基因在蜡梅各组织中均有表达,但在雄蕊中的表达量最高;在蜡梅花发育的早期阶段未检测到CpRAC1的表达,随着蜡梅花发育,该基因表达量逐渐升高,在蜡梅花衰老期表达量达到最高;CpRAC1对多种非生物胁迫产生响应,在高温、低温、高盐、重金属和脱落酸处理后表达下调,而在H_2O_2处理后表达上调。推测蜡梅CpRAC1可能在蜡梅花发育和抵御非生物胁迫过程中扮演多种角色。