羊吕氏泰勒虫PCR检测方法的建立与应用

为建立一种准确、敏感的羊吕氏泰勒虫检测方法,根据Gen Bank上发表的羊吕氏泰勒虫18S rRNA基因序列(登录号:KC735166.1),设计1对特异性引物,建立了PCR检测方法。筛选该方法的最佳反应条件及体系,并进行了敏感性、特异性、重复性试验及临床血液样品检测。结果表明,该方法能扩增出大小为962 bp的羊吕氏泰勒虫特异性片段,与GenBank收录的相关参考序列同源性高达99.4%~99.9%;与绵羊泰勒虫、尤氏泰勒虫、环形泰勒虫、莫氏巴贝斯虫和弓形虫基因组DNA均无交叉反应;DNA最低检测量为29.13 fg·μL^(-1);具有良好的重复性;对76份羊临床血液样品检测结果表明,羊吕氏泰勒虫感染率为77.63%,高于已报道的常规PCR检测结果。

不同含量伊维菌素长效透皮制剂在家兔体内的药代动力学研究

研究制备伊维菌素含量分别为0.5%、1.0%、1.5%的长效透皮剂,进行3组相同药量不同体积伊维菌素长效透皮剂在家兔体内的药代动力学试验,研究其代谢过程。优化高效液相色谱-荧光检测器测定血浆中伊维菌素含量的方法,通过绘制标准曲线、对精密度、回收率、检测限和定量限的测定,表明该方法符合生物样品的分析要求。对家兔外耳廓单次均匀喷洒给药,通过血浆中伊维菌素质量浓度随时间的数据变化表明,药物可快速经皮肤吸收入血,发挥效应。伊维菌素含量为0.5%、1.0%、1.5%的伊维菌素长效透皮剂依次记为1、2、3组,通过PKSolver药动学处理软件对数据分析发现,1、2、3组吸收半衰期分别为0.52、0.35和0.75 d;达峰时间分别为1.47、1.13和1.23 d;峰质量浓度分别为91.09、37.61和69.53μg·L^-1;消除半衰期分别为3.55、4.95和4.61 d;平均滞留时间依次为9.995、11.902和6.995 d。药时曲线面积分别为7578.33、5530.75和2542.20μg·d·L^-1。3组药物在家兔血浆内均符合有吸收一室开放模型,且第2组吸收半衰期和达峰时间最短,平均滞留时间最长,效果最好。结果表明,本研究制备的伊维菌素长效透皮剂在家兔体内的血药质量浓度变化平稳,释药时间较长,在体内维持有效药物质量浓度时间长达35 d,有明显的长效作用。

伊维菌素长效透皮剂和普通注射剂在家兔体内的药代动力学比较研究

为比较研究制备的伊维菌素长效透皮制剂与普通伊维菌素注射剂药物代谢及药效时间,本研究制备伊维菌素含量分别为0.5%、1.0%和1.5%的长效透皮制剂,采用高效液相色谱法检测不同药量相同体积伊维菌素长效透皮制剂和普通伊维菌素注射剂(1.0%)在家兔体内的药代动力学,并通过PKSolver药代动力学处理软件对数据进行分析。结果显示,0.5%、1.0%、1.5%伊维菌素长效透皮剂和1.0%普通注射剂吸收半衰期分别为0.81、0.52、1.02和0.12 d;达峰时间为1.55、0.97、1.62和0.42 d;峰浓度为47.36、72.02、115.30和99.53 ng/mL;消除半衰期为3.61、5.92、5.59和1.79 d;平均滞留时间为5.27、7.37、5.13和2.16 d;药时曲线面积为1488.70、3081.98、3161.20和480.00 ng·d/mL,伊维菌素长效透皮剂体内维持有效药物浓度的时间长达35 d,普通注射剂仅为9 d。结果表明,伊维菌素长效透皮剂效果稳定,可进行更深入的研究。

河南部分地区湖羊血液无浆体感染情况调查

为了解湖羊血液无浆体病的流行情况,采用巢式PCR对采自河南省驻马店、洛阳、安阳、汝州市共4个地区湖羊的165份血液样品,基于无浆体16S rRNA和MSP4基因进行检测。结果表明,共测出嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum)、牛无浆体(A.bovis)和绵羊无浆体(A.ovis)3种无浆体,阳性率分别为1.21%(2/165)、9.70%(16/165)和24.85%(41/165);无浆体总阳性率为32.73%(54/165)。表明湖羊无浆体感染普遍存在,不同饲养方式、不同年龄湖羊的无浆体阳性率存在差异。

陕西麟游县山羊吕氏泰勒虫感染调查及其遗传进化分析

为了解陕西麟游县山羊吕氏泰勒虫感染情况,应用聚合酶链反应(PCR)方法对采自陕西麟游的209份山羊血液样品进行吕氏泰勒虫18S小亚基核糖体核糖核酸基因扩增,并对部分阳性样品进行遗传进化分析。调查显示,吕氏泰勒虫总感染率为61.2%(128/209);不同饲养方式、不同年龄、不同季节山羊的吕氏泰勒虫感染率均差异性显著(P<0.05,P<0.05,P<0.05)。遗传进化分析表明,研究获得的泰勒虫分离株与吕氏泰勒虫(GenBank登录号:LC326009)位于同一分支上。该调查结果丰富了我国吕氏泰勒虫流行病学资料,并为该地区及同类地区羊泰勒虫病的防控提供科学依据。

中国不同地区羊吕氏泰勒虫分子流行病学调查及遗传进化分析

为了解吕氏泰勒虫在中国不同地区山羊和绵羊中的流行情况,本研究应用基于吕氏泰勒虫18S rRNA基因位点的PCR检测方法,对采自中国河南、甘肃、陕西、山西、贵州、云南、新疆7个地区的281份羊血液样品进行检测,并对阳性样品测序以进行序列分析。结果显示,羊吕氏泰勒虫总感染率为35.23%(99/281)。不同采样点羊吕氏泰勒虫感染率差异极显著(P<0.01),其中河南省羊吕氏泰勒虫感染率最高(98%,49/50),新疆最低(0)。绵羊和山羊吕氏泰勒虫感染率分别为51.67%(31/60)和30.77%(68/221),差异极显著(P<0.01);放牧羊吕氏泰勒虫感染率(41.55%,86/207)极显著高于舍饲羊(17.57%,13/74)(P<0.01);羊吕氏泰勒虫感染率在春、夏、秋及冬四季分别为56.00%(28/50)、42.75%(59/138)、9.43%(5/53)和17.50%(7/40),差异极显著(P<0.01);≥12月龄和<12月龄羊吕氏泰勒虫感染率分别为33.50%(67/200)和39.51%(32/81),差异不显著(P>0.05)。此外,遗传进化分析表明,本研究获得的羊吕氏泰勒虫分离株与中国流行的吕氏泰勒虫分离株同源性高达99.60%以上,且位于同一分支上。本研究为进一步了解中国不同地区羊吕氏泰勒虫的流行现状及分布提供了重要参考依据。

规模化全舍饲湖羊消化道寄生虫感染情况调查

为了解规模化舍饲湖羊消化道寄生虫感染情况,本研究应用饱和蔗糖溶液漂浮法、饱和盐水漂浮法、卢戈氏碘液染色法、离心沉淀法和麦克马斯特氏计数法等对采自河南部分地区规模化全舍饲湖羊养殖场共计553份粪便样品进行了调查。调查结果显示:寄生虫总感染率高达97.47%,75.23%的样品混合感染,样品混合感染的寄生虫种类最多为5种;共查到球虫、隐孢子虫、贾第虫、阿米巴、鞭虫、圆线虫和绦虫7种寄生虫,感染率分别为90.42%、0.90%、4.88%、65.64%、12.48%、42.13%和4.88%;感染强度最大的为球虫,每克粪便的卵囊数(OPG)最高达652 000,其次为圆线虫,每克粪便的虫卵数(EPG)最高为7 000;湖羊消化道寄生虫感染无明显的年龄、性别差异(P>0.05);季节流行动态显示,春、夏、秋三季的寄生虫感染率与冬季相比有较大差异。以上结果说明,湖羊消化道寄生虫感染较为普遍,应采取有效的综合防控措施,以保障羊群的健康发展。

地克珠利防控泌乳母羊及其羔羊球虫病用药程序与效果研究

选择24只经粪检确诊为自然感染球虫的妊娠母羊为研究对象,探讨了地克珠利(Diclazuril)对泌乳母羊及其哺乳羔羊球虫病的防控效果。结果表明:供试羊在试验期间未见不良症状;在妊娠母羊产前1周和产后1周,分别按1 mg/kg的剂量经口喂服Diclazuril,每天1次,连用2 d,球虫卵囊转阴率、减少率与不给药对照组差异极显著(P<0.01),哺乳羔羊平均增重率与对照组相比增加显著(P<0.05);Diclazuril可有效防控苍白艾美尔球虫、小型艾美尔球虫和阿萨艾美尔球虫,且能保持较长时间的药效。

基于绵羊无浆体Groel基因的PCR方法的建立

利用绵羊无浆体(Anaplasma ovis)高度保守的Groel基因,建立了快速、特异、敏感的绵羊无浆体检测方法。根据GenBank上登录的绵羊无浆体Groel基因序列(FJ460438),设计1对特异性引物,建立了绵羊无浆体PCR检测方法,并对其进行特异性、敏感性、重复性试验及临床样品检测。结果显示,该方法能特异性地检测绵羊无浆体,与山羊无浆体、嗜吞噬细胞无浆体、牛无浆体、边缘无浆体、吕氏泰勒虫、绵羊泰勒虫、羊附红细胞体、弓形虫基因组均无交叉反应;该方法检测下限可达到7.7×10-15 g·μL-1,比文献报道的PCR敏感10倍(77×10-15 g·μL-1);具有良好的重复性;对81份羊临床血液样品检测结果表明,绵羊无浆体感染率为32.1%(26/81),高于文献报道的PCR(MSP4基因)检测结果(18.5%,15/81)。

肠道寄生虫与菌群互作关系研究进展

肠道菌群是动物机体的重要组成部分,与寄生虫和宿主的关系十分密切。寄生虫感染往往会对宿主产生不利影响,其致病作用与寄生虫种类、寄生部位及其与宿主的相互作用有关。寄生虫感染可导致肠道微生态的改变、失调和炎症性疾病;肠道菌群也影响寄生虫在宿主体内的定植、增殖和毒力。肠道寄生虫包括寄生蠕虫和原虫,近年来对肠道寄生虫与菌群相互作用研究发现,无论是原虫还是蠕虫感染均可导致肠道微生物组成和多样性的改变,对宿主产生致病作用,而蠕虫对炎症性肠病的潜在治疗作用一度颠覆了以往人们对于寄生虫的认知。肠道菌群可促进或抑制寄生虫对宿主的致病作用,且益生菌对肠道寄生虫感染有一定的预防或治疗作用。目前对寄生虫与菌群相互作用的研究仍然处于初期阶段,对其相互作用的机制尚不清楚。明确寄生虫与肠道菌群的相互影响及其作用机制,对深入理解寄生虫-肠道菌群-宿主的相互关系、研发有效的抗寄生虫微生态制剂具有重要意义。作者就近年来肠道蠕虫和原虫与菌群相互作用的研究进展进行了综述,并对该领域未来的研究方向进行展望,以期为预防和控制寄生虫病提供新的策略和理论依据。

北京动物园野生动物肠道寄生虫感染情况调查

为了解北京动物园野生动物肠道寄生虫感染情况,收集136种动物共计441份粪便样本,采用离心沉淀法、饱和蔗糖溶液漂浮法对粪便样本进行检查。结果显示,野生动物肠道寄生虫感染率为11.1%(49/441);检查出6种肠道寄生虫虫卵或卵囊;球虫感染率较高,为5.2%(23/441);蛔虫、圆线虫、毛首线虫、毛细线虫和吸虫感染率分别为1.4%(6/441)、2.3%(10/441)、2.5%(11/441)、1.1%(5/441)和0.2%(1/441);哺乳动物和鸟类肠道寄生虫感染率分别为10.1%(32/318)和13.8%(17/123),以毛首线虫、球虫为主要感染种类。感染强度测定结果显示,大多数野生动物粪便样本中虫卵或卵囊感染强度较低。研究表明,北京动物园野生动物肠道寄生虫感染总体防控效果较好,应持续加强检测工作。

地克珠利防控湖羊自然感染球虫用药程序及效果研究

为探讨地克珠利防控湖羊自然感染球虫的用药技术和效果,90只经粪检确诊为自然感染球虫的50日龄湖羊随机分为8组,其中第1~7组为药物试验组,分别按设计用药程序给予地克珠利,第8组为不用药对照组;应用饱和盐水漂浮法检查用药前后供试羊粪样中球虫卵囊,麦克马斯特法计数每克粪便中的卵囊数,收集阳性样品中球虫卵囊进行培养和鉴定,依用药后不同时期的球虫卵囊减少率、转阴率、平均增重率等判定药物防控球虫效果和增重效益。结果显示:按1 mg·kg-1剂量给予地克珠利,每天1次,连用2 d且间隔14 d再次用药对50日龄湖羊自然感染球虫的防控效果最好;用药后第56天,共4次给予地克珠利的试验羊比对照组羊平均每只多增重2.51 kg,经济效益显著;球虫种类鉴定表明,地克珠利抗小型艾美尔球虫(Eimeria parva)、类绵羊艾美尔球虫(E.ovinoidalis)、阿撒他艾美尔球虫(E.ahsata)、槌形艾美尔球虫(E.crandallis)、颗粒艾美尔球虫(E.granulose)、斑点艾美尔球虫(E.punctata)、苍白艾美尔球虫(E.pallida)、温布里吉艾美尔球虫(E.weybridgensis)的效果良好。本研究结果为羔羊和育肥肉羊球虫病防控提供了技术方法。

河南开封某场羊肠道寄生虫感染情况调查报告

为了解河南开封地区某羊场湖羊肠道寄生虫感染情况,笔者采用离心沉淀法、卢戈氏碘液染色法和饱和蔗糖溶液漂浮法,对299份羊新鲜粪便样品进行了肠道寄生虫检测。结果显示,肠道寄生虫总感染率为69.6%(208/299),共检测到4种寄生虫,分别为球虫卵囊、圆线虫卵、鞭虫卵和阿米巴原虫包囊,感染率分别为51.20%(150/299)、8.70%(26/299)、6.69%(20/299)和48.20%(144/299)。总混合感染率为27.80%(83/299),主要以2种寄生虫混合感染为主。6月、9月和11月,当地肠道寄生虫感染率分别为54.20%(64/118)、74.50%(82/110)和87.30%(62/71)。成年母羊感染率最高79.10%(53/67),其次是育肥羊77.40%(79/102)、哺乳羔羊64.20%(34/53)和断奶羔羊54.50%(42/77)。结果表明,河南开封地区某羊场肠道寄生虫感染主要以球虫和阿米巴原虫为优势虫种,加强饲养管理以及有针对性地进行防虫对寄生虫的防控和净化具有重要意义。