重组大肠杆菌产普鲁兰酶的高密度发酵工艺研究

以表达普鲁兰酶的重组大肠杆菌作为出发菌株,在摇瓶培养的基础上,建立了大肠杆菌工程菌产普鲁兰酶的高密度发酵工艺。通过测定细胞密度、细胞干重、分离菌体可溶性成分与不溶性成分及SDS-PAGE电泳,分析重组大肠杆菌的生长和普鲁兰酶的表达情况。摇瓶试验使用合成培养基和LB培养基,重组大肠杆菌在合成培养基生长较慢,诱导5h的普鲁兰酶表达量高于LB培养基,包涵体比例低于LB培养基。重组大肠杆菌的高密度发酵使用合成培养基,补料阶段采用指数流加的工艺,在设定细胞的比生长速率为0.12的前提下,限制补料中碳源的供应,以阻止乙酸的产生。当细胞密度OD600达到70.0开始诱导,最终细胞密度为每升53.3g细胞干重,细胞内可溶性普鲁兰酶为每升1.35g。

一株普鲁兰酶产生菌的分离鉴定及发酵条件的优化

普鲁兰酶是一类淀粉分支酶,在淀粉加工等行业有着广泛的应用。利用平板涂布法从淀粉加工厂附近土壤中分离到一株产普鲁兰酶的细菌H4,通过形态学、生理生化试验及16S rDNA分类鉴定,确定该细菌为一株微小杆菌(Exiguobacterium sp.H4)。对该菌株培养基成分及产酶条件进行了优化,即2%土豆淀粉,1%蛋白胨,0.5%牛肉膏,0.1%KH2PO4,0.05%MgSO4.7H2O和0.0001%FeSO4,初始pH 7.0,发酵温度37℃,摇床转数200 r/min,发酵72 h后胞外产生普鲁兰酶的活力可达6.35 U/mL,比复筛的产量3.02 U/mL提高了110.2%。

孕期脂多糖诱导的孤独症样大鼠肠道5-羟色胺相关代谢通路的变化

目的:探讨孕期脂多糖(LPS)诱导的孤独症样子代大鼠肠道5-羟色胺(5-HT)相关代谢通路的变化。方法:将20只SD大鼠随机平分为LPS组和磷酸盐缓冲液(PBS)组(n=10),分别在怀孕9.5 d时腹腔注射LPS(100µg/kg)和等体积PBS,所产子代大鼠即为LPS组(n=60)和PBS组(n=60)。采用三箱社交实验和旷场实验检测子代大鼠社会交往能力和重复刻板行为。检测粪便含水量和胃肠转运时间以评估子代大鼠肠道蠕动功能。ELISA检测子代大鼠血清二胺氧化酶(DAO)、IgA和5-HT含量,以及粪便IgA含量。转录组学及色氨酸靶向代谢组学分析子代大鼠结肠组织、16S多样性检测子代大鼠粪便中肠道微生物菌群变化。Western blot技术测定子代大鼠结肠组织色氨酸羟化酶1(TPH1)和TPH2的表达水平。结果:孕期LPS处理可诱导子代大鼠出现孤独症样行为,并导致粪便含水量增加(P<0.01),胃肠转运时间和结肠转运时间缩短(P<0.01)。同时观察到LPS组子代大鼠血清5-HT、DAO和IgA含量及粪便IgA含量均有升高趋势。转录组学富集到色氨酸代谢通路以及犬尿酸相关通路;色氨酸靶向代谢组学显示LPS子代大鼠结肠中犬尿酸途径存在异常变化;16S多样性检测结果显示LPS组棒状杆菌(Coryne⁃bacterium)比例增加;且LPS组结肠组织TPH1和TPH2蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论:妊娠期LPS暴露不仅导致子代大鼠孤独症样社交障碍,而且还会合并胃肠蠕动加快、肠上皮通透性增加等不良症状,究其原因可能是由于LPS处理激活了结肠组织中5-HT限速酶过度表达,导致肠道中5-HT含量升高所致。

勤积善述多读 巧练广思精评

高中语文作文教学应运用灵活多样的方式方法．激发学生写作兴趣，重视学生平日积累．提高学生表达能力，勤积善述多读，巧练广思精评。一、方式灵活多样,激发学生兴趣 1．使用多媒体辅助教学 德国教育家第斯多惠指出：“教育的艺术不在于传授知识和本领，而在于激励、唤醒和鼓励．激发学生学习兴趣。”

RhoA/ROCK信号通路与PM2.5相关疾病的研究进展

PM2.5沉积在肺部,会导致不可逆的肺间质纤维化,目前尚无有效救治手段。RhoA/ROCK信号通路是调控细胞增殖和组织分化的重要信号通路,与多种细胞功能密切相关。已有研究表面,RhoA/ROCK信号通路的激活或表达上调,与PM2.5相关疾病的发生发展密切相关,且ROCK抑制剂能显著缓解PM2.5相关疾病。该文就RhoA/ROCK信号通路与PM2.5相关疾病的关系进行综述,以期梳理RhoA/ROCK信号通路在PM2.5相关疾病中的作用机制,为PM2.5相关疾病的干预治疗提供理论依据,并为ROCK抑制剂的临床应用奠定基础。

Hedgehog信号通路对肝脏损伤修复作用的研究进展

Hedgehog(Hh)信号通路是胚胎发育的重要形态发生因子,在成体肝脏中活性处于抑制状态,但在多种类型的肝脏损伤中被重新激活。Hh信号通路参与肝脏损伤修复的多个环节,包括肝前体细胞的增殖分化,窦状隙内皮细胞的血管重塑,免疫细胞的炎症反应,以及肝星型细胞的激活和纤维化。该文就Hh信号通路介导的肝脏损伤修复作用进行概述,以期为推动肝脏疾病的治疗提供理论依据。

糖原贮积性疾病(GSD-1a)相关动物模型及治疗的研究进展

糖原贮积性疾病(GSD-1a)是一种由葡萄糖-6-磷酸酶-α(G6Pase-α或G6PC)缺乏引起的常染色体隐性代谢疾病,临床表现主要为肝肾功能失常,死亡率高。近年研究表明,基于新型基因编辑技术的GSD-1a大型动物模型的构建以及更为高效的基因治疗方法将成为新的研究趋势。该文着眼于近年来GSD-1a疾病的研究进展,从分子遗传基础、动物模型的建立与应用以及药物和基因治疗研究等方面论述动物模型在GSD-1a发生机制及疾病治疗中的探索和应用。