P3实验室检测新冠病毒核酸流程管理及体会

新型冠状病毒(COVID-19)的核酸检测是目前确诊新冠病毒感染的重要依据。由于该病毒主要经呼吸道途径传播,对其检测要求高于普通的核酸检测,既要满足核酸扩增的条件,又要达到生物安全的标准。文章介绍了2020年1月底到2月底,COVID-19爆发流行期间,在P3生物安全实验室条件下进行COVID-19核酸检测的管理经验,经过设定目标,预设方案,在执行过程中不断纠偏等方式,最终取得高效、有序、安全的满意效果。另外,笔者对P3实验室检测过程中可能存在的安全隐患进行了分析,并对P3实验室未来发展提出了有益的建议。

鹅源禽痘病毒在鸡胚中的增殖及其理化特性鉴定

为填补国内外水禽源痘病毒培养特性和理化特性研究方面的空白,对国内检测并鉴定的鹅源禽痘病毒,用鸡胚进行分离培养和病毒理化特性研究。将鹅皮肤痘疹样本研磨后,接种SPF鸡胚进行连续传代培养。病理检查和PCR检测证实,病毒可在鸡胚中增殖,且经连续5轮传代后,鸡胚病变及病毒滴度趋于稳定。鸡胚中可以观察到绒毛尿囊膜水肿增厚及白色痘斑等禽痘特征性病变。对采集病变的绒毛尿囊膜进行电子显微镜观察,可见病毒包涵体和典型禽痘病毒粒子。利用建立的鸡胚培养体系,对该病毒理化特性进行鉴定,发现病毒对热(55℃)、酸(pH3)、碱(pH11)、胰蛋白酶、乙醚和氯仿敏感。本研究首次建立了鹅源禽痘病毒鸡胚培养体系并对其理化特性进行了鉴定,从而为系统开展该病毒生物学特性和防控技术研究提供了必要的技术基础。

重庆地区犬圆环病毒检测及序列分析

本试验旨在调查近年来新发的犬圆环病毒(canine circovirus,CCV)在重庆地区的流行情况,探索重庆流行毒株的特性。本研究利用PCR方法对2017年采集于重庆地区的100份犬血清样品进行CCV核酸检测,对所得CCV阳性样品进行全基因组扩增与测序,并利用MegAlign、Mega 6.0和RDP4等软件对分离到的重庆CCV毒株进行分析。结果显示,重庆地区100份犬血清中共有4份为CCV阳性,阳性率为4%,从4份阳性样品中共获得3株不同的CCV基因组(CQ76、CQ79和CQ82),全长基因组序列均为2062 nt,与此前报道长度为2063 nt的CCV基因组相比缺少了一个碱基,该碱基位于5′-基因间隔区内茎环结构的下游。3个毒株的两个ORF之间5′末端间隔区和3′末端间隔区长度分别为134(1929-2062 nt)和203 nt(913-1115 nt)。CQ76、CQ79和CQ82的同源性在99.8%~100%之间,其中CQ76与CQ82仅在第2019位点存在同义突变;所获得的3个重庆毒株与国内外报道的其他CCV基因组序列同源性为82.7%~97.1%,其中,ORF2的变异程度大于ORF1。基于病毒ORF2序列和全基因组分别构建NJ进化树中,CQ76、CQ79和CQ82均属于同一亚群,与属于基因Ⅱ型的中国毒株204株遗传距离较近,同源性为96.5%~96.7%。RDP4重组分析发现,CQ76、CQ79和CQ82毒株基因组均为广西毒株204株和388株的重组序列,重组区域坐落于ORF2。本研究为丰富CCV流行病学和遗传进化信息,以及进一步防控研究提供基础数据。

信息智能化技术在神经重症监护室建设和管理中的应用

神经重症监护室(NICU)是救治神经系统危急重症患者的重要监护单元,然而NICU的建设和管理尚无统一规范化指南,各地NICU建设和管理差异较大。如何在有条件的高级别医院建设高效有序的现代化NICU单元,仍是各大医院神经专科建设要研究的课题。广东省第二人民医院于2016年对NICU进行了改建,在改建过程中将目前能开展的信息化、智能化技术,充分应用到重症患者的诊断、治疗、护理等各个环节,以达到节约人力、提高效率、增强服务质量之目的。此经验可供其他在建NICU单位参考。

PCV4 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立及应用

为建立一种灵敏、可快速检测猪圆环病毒4型(PCV4)的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法,根据PCV4 Rep基因的保守区域设计引物,建立针对PCV4的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行评价。结果显示,该检测方法的Ct值与标准品在5.64×10~2~5.64×10~9 copies/μL范围内呈良好的线性关系,R^2为0.999,斜率为-3.638,检测下限为5.64×10~2 copies/μL,且无非特异性扩增。利用该方法对56份临床样品进行检测,发现PCV4核酸阳性率为3.57%,比普通PCR更灵敏可靠。结果表明,本试验建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法可用于PCV4的快速诊断。

广州社区居民颈动脉病变流行状况及相关因素分析

目的探讨广州社区居民颈动脉病变流行率及相关因素。方法对广州市35个社区35岁以上的居民进行脑血管病相关因素现况调查,调查手段包括面对面问卷,现场体检,睡眠心理测试,心电图,腹部、妇科、颈部血管B型超声检查,以及采取血液标本行有关生化指标检测,所有结果均输入专有数据库。结果共有2276例居民参加了调查,颈动脉病变流行率是53.8%,以单纯硬化和混合性病变为主,并且男性高于女性(64.03%vs 48.96%,P=0.0003),嗜酒、吸烟、少做家务及焦虑抑郁在有颈动脉病变的人群中流行率高于无颈动脉病变的人群,对颈动脉病变与物质代谢紊乱每个指标如高血压、糖尿病、高血脂、高尿酸血症、高同型半胱氨酸血症、C反应蛋白之间关系均非常密切。结论广州社区居民颈动脉病变的流行率高,加强对居民的正确生活习惯的宣传教育,以及动态监测病变对降低脑卒中发生风险非常必要。

山羊关节炎脑炎病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立及应用

为建立检测山羊关节炎脑炎病毒(caprine arthritis-encephalitis virus,CAEV)的快速诊断方法,本研究根据CAEV甘肃株Gag基因设计1对引物,并以含有CAEV甘肃株全基因组序列的质粒pUC57-CAEV为模板,建立CAEV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并验证其特异性、灵敏性和重复性。结果显示,本研究所建立的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的Ct值与标准品模板在1.19×109~1.19×10^1 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.997,斜率为-3.74,检测下限为1.19×10^1 copies/μL,且对痘苗病毒、山羊痘病毒均无扩增。重复性试验结果显示,批间与批内变异系数均小于1%,重复性好。本研究首次建立了CAEVGag基因的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法,为CAEV的快速检测和病毒感染预防提供了技术手段。

犬圆环病毒Rep基因SYBR GreenⅠreal-time PCR方法的建立及应用

为建立一种检测犬圆环病毒的快速诊断方法,本试验拟采用普通PCR方法扩增犬圆环病毒Rep基因,将目的基因克隆到T-Vector pMD19 (Simple),以测序正确的重组质粒作为模板,建立针对犬圆环病毒Rep基因的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,并对该方法进行敏感性、特异性和重复性试验。结果显示,Ct值与标准品在6.18×10^9~6.18×10^2copise/μL范围内呈良好的线性关系,其相关性为0.998,斜率为-3.671。检测下限为6.18×10^1copies/μL,且对猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、犬瘟热病毒、犬传染性肝炎病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型、狂犬病病毒等均无特异性扩增,所有稀释度标准品模板均在86.45℃出现特异性熔解峰。通过对临床样品进行检测,本方法对犬圆环病毒核酸的检出率为9.72%(7/72)。结果表明,本试验成功建立了针对犬圆环病毒Rep基因的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,可实现对犬圆环病毒快速、灵敏及准确的诊断。