响应面法优化金银花绿原酸提取工艺研究

以金银花为实验材料,为获取金银花中绿原酸提取的最优工艺条件。在单因素实验的基础上,选择提取温度、液料比(V_水/M(金银花))、提取时间为影响因素,以绿原酸提取率为响应值,采用Box-Behnken实验设计对提取工艺建立数学模型进行响应面分析。结果表明,绿原酸最佳提取工艺为:提取时间34.30 min,提取温度81℃,提取液料比24.2,绿原酸提取率为4.38%,较未优化时提高12.31%。

猪繁殖与呼吸综合征新型疫苗的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状的病毒性传染病,给全球的生猪养殖者造成了巨大的经济损失,严重危害我国养猪业的健康发展。目前接种疫苗仍是预防PRRS的最重要措施之一,但由于PRRSV变异株的不断出现,PRRSV的快速进化或重组,导致其遗传多样性增加,传统的疫苗已经不能满足需求。因此,迫切需要开发更安全、可靠、高效和针对性强的PRRS疫苗。文章主要对重组亚单位疫苗、DNA疫苗、活载体疫苗、基因缺失疫苗和合成肽疫苗等新型基因工程疫苗的研究进展作一综述,以期为我国PRRS的防控提供理论参考。

鸡PD-1单克隆抗体的制备及生物学功能研究

试验旨在筛选并制备鸡PD-1单克隆抗体,对该单克隆抗体的免疫学特性、结合活性及其对鸡PD-1/PDL1信号通路激活的阻断作用进行初步研究。运用杂交瘤细胞融合技术筛选杂交瘤细胞株,采用ELISA方法、Ig抗体亚型鉴定试剂盒、Western blotting鉴定抗体的免疫学特性,利用间接免疫荧光技术及流式细胞术检测筛选单抗与鸡PBMCs的结合情况,应用该单抗与IBDV感染7d后的鸡PBMC细胞作用,利用实时荧光定量PCR技术检测IL-2、IL-6和IFN-γ等细胞因子的表达情况。结果显示,试验获得1株特异、稳定分泌鸡PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为PD-1-D05。该单克隆抗体的亚型属于IgG1,杂交瘤细胞培养上清和腹水的效价分别为1∶211和1∶2.048×105。ELISA和Western blotting检测结果表明,PD-1-D05单抗能与免疫原发生特异性反应,与pET-28a(+)、Rosetta菌株蛋白提取液上清及无关蛋白无交叉反应。间接免疫荧光及流式细胞术检测结果显示,PD-1-D05单克隆抗体能与鸡PBMC特异性结合,且IBDV感染7d后的PBMC经单抗处理后,IL-2表达量显著升高(P<0.05),IFN-γ转录水平显著下降(P<0.05),IL-6表达水平较IBDV攻毒组细胞虽有所下降,但并无统计学差异(P>0.05)。结果表明,试验成功筛选并制备了能够稳定分泌鸡PD-1单克隆抗体的细胞株,所获得的PD-1单克隆抗体具有良好的免疫学特性,该单抗能够特异性识别鸡PD-1分子并与鸡PBMC细胞特异结合,并在一定程度上恢复由于IBDV感染导致的PD-1/PD-L1信号通路激活引发的免疫调节相关细胞因子IL-2、IFN-γ的异常表达。

MALDI-TOF-MS技术在块菌、美味牛肝菌物种快速甄别中的运用

运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),对2种云南特色高值野生食用菌块菌和美味牛肝菌进行物种甄别鉴定。运用液氮甲酸法处理样品,获得浓度分别为0.243 mg·mL^-1和0.284 mg·mL^-1的块菌和美味牛肝菌的蛋白质提取液,经MALDI-TOF-MS采集指纹图谱,对块菌和美味牛肝菌的蛋白指纹图谱进行比对与聚类分析。结果表明,产地不同的同种野生食用菌具有相似的蛋白指纹图谱和物种特征质谱峰,而不同种类的食用菌间具有差异明显的特征蛋白指纹图谱。MALDI-TOF-MS可以用于云南出口高值特色野生食用菌块菌和美味牛肝菌的物种快速甄别。

MALDI-TOF-MS技术在大型食用菌甄别鉴定中的应用

目的通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,对松茸、姬松茸、金耳、银耳、竹荪、榛蘑等常见食用菌进行蛋白图谱分析,探索MALDI-TOF-MS在大型食用菌鉴定领域的应用方法。方法通过甲酸提取法、液氮甲酸法、甲酸超声破碎法、液氮甲酸超声破碎法4种前处理方法分别获得菌菇样本的蛋白提取液;经MALDI-TOF-MS采集样本指纹图谱,对不同方法及不同样本的指纹图谱进行对比分析与聚类分析。结果通过方差分析发现不同方法对指纹图谱蛋白峰总量影响不显著,P=0.753> 0.05;但液氮甲酸方法获取的菌株指纹图谱平均特异峰数量最高为3.75个/株,图谱质量最好,更适用于大部分食用菌的前处理,同时发现云南省香格里拉县、四川省稻城县两地的松茸之间无法通过指纹图谱区分,表明此两地松茸含有相近的蛋白质组成。结论 MALDI-TOF-MS技术在大型食用菌甄别鉴定中具有开发运用前景。

SUMO融合系统高效表达可溶性IBDV NB株VP2 S-P域蛋白

鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus, IBDV)导致机体出现免疫抑制。VP2 是IBDV主要保护性抗原表位的结构蛋白,Shell 域和Projection 域位于IBDV VP2 蛋白的胞外区和跨膜区,包含VP2主要的抗原位点。前期研究在Shell 域筛选到能够与IBDV 多抗结合的多肽。因此,本研究利用PCR 扩增Shell 域和Projection 域的基因,添加小泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier, SUMO)作为标签,构建SUMO系统高效表达系统,诱导表达获得VP2 Shell 域和Projection 域的可溶性融合蛋白,命名为SUMOVP2-S-P。SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,出现与预期蛋白大小相符合的可疑条带;Western blotting鉴定结果显示,SUMO-VP2-S-P重组蛋白能够与His 单抗特异性结合。初步结果表明,SUMO-VP2-S-P重组蛋白为我们需要的目的蛋白,为后期蛋白纯化建立IBDV抗体快速检测方法提供材料基础。