抗菌霉素对番茄叶霉病菌作用机理的研究

以番茄叶霉病菌(CladosporiumfulvumCooke)为靶标菌,进行了抗菌霉素作用机理的研究。结果表明:抗菌霉素对番茄叶霉病菌的最小抑菌浓度为1mg/ml,最小杀菌浓度为2mg/ml;经抗菌霉素处理的番茄叶霉病菌菌丝顶端均产生了一个很大的球状泡,整条菌丝严重畸形;菌丝细胞膜受到严重破坏,细胞内一些核酸大分子物质发生外渗,导致260nm处出现明显吸收峰,这说明抗菌霉素的作用位点在细胞膜上。

响应面法优化毒三素链霉菌中利普司他汀的提取工艺

采用响应面法对毒三素链霉菌提取工艺进行优化。首先确立乙醇为最佳的溶剂。以利普司他汀提取收率为指标,以乙醇为浸提溶剂,对料液比、乙醇体积分数、浸提时间、浸提温度和浸提次数进行单因素实验。在此基础上,选取料液比、乙醇体积分数、浸提时间为自变量,采用Box-Behnken设计的方法,研究各自变量及其交互作用对利普司他汀提取收率的影响。结果表明:毒三素链霉菌中利普司他汀的最佳提取工艺条件为液料比6.32∶1 m L/g、乙醇体积分数95%、浸提时间3.61 h。在此条件下,利普司他汀提取收率的预测值为83.35%,实验验证值为84.50%,相对误差为1.36%。

环孢菌素A分批发酵连续补糖的研究

目的利用50L全自动发酵罐对环孢菌素A分批发酵连续补糖进行了研究。方法 HPLC法检测环孢菌素A效价以及离心测定菌体生物量。结果初始培养基中果糖比例由12%降至6%,发酵中后期连续流加果糖,维持发酵液中残糖浓度20g/L的水平,环孢菌素A效价236h从4.08g/L提高至6.0g/L,明显好于部分葡萄糖代替果糖及全葡萄糖代替果糖发酵的水平,同时菌体生物量增加了15%。结论降低初始培养基中果糖比例和连续流加补糖,有效提高了环孢菌素A的发酵单位,对于指导生产具有重要的参考意义。

奥利司他低温溶析结晶条件的优化

为了寻找一种高效的奥利司他结晶工艺,对溶剂种类、晶种、反溶剂加入量、待结晶溶液浓度、搅拌转速和降温速度等因素进行了研究。通过静态结晶实验,确立了甲醇/水为最佳的结晶体系及其比例,加入晶种能明显提高奥利司他的析晶温度,提高产品含量和纯度。在此基础上,经正交试验设计L9(34),通过50 L结晶罐动态考察了各因素对奥利司他结晶产品含量和收率的影响,并进一步优化了加水方式。结果表明:按照2℃/h速率降温,初始奥利司他质量浓度为30 g/L,反溶剂水的加量为25%(体积分数),分2次加入,析晶前加入产品质量0.1%的晶种,搅拌转速250 r/min条件下,所得奥利司他晶体含量和收率最高。经高效液相色谱(HPLC)检测,奥利司他含量可达98.6%,收率可达85.3%。

利普司他汀的提纯工艺研究

目的研究从毒三素链霉菌的发酵液菌粉中提纯利普司他汀(lipstatin)的新工艺。方法对比不同溶剂对发酵液菌粉的浸提效果,并经脱色、萃取及结晶等步骤纯化。结果乙腈从发酵液菌粉中浸提得到的粗提物中利普司他汀含量最高,达50.7%,比甲醇、乙醇、丙酮的浸提效果高4倍;经纯化得到的利普司他汀含量高达85%。结论此工艺步骤简单,成本低,为制备高纯度奥利司他(orlistat)提供了方便。

雪白白僵菌产环孢菌素A分批补料发酵动力学

对在30 L发酵罐中雪白白僵菌发酵环孢菌素A的分批补料发酵过程进行了动力学研究。通过对环孢菌素A分批发酵数据进行分析,基于Logistic模型和Luedeking-Piret方程,建立了环孢菌素A发酵动力学模型,包括细胞生长、底物消耗和产物合成回归方程。应用Origin7.5软件对模型进行非线性拟合计算,建立的动力学模型与实验值拟合良好,能较准确反映环孢菌素A分批补料发酵动力学过程。

环孢菌素A结晶工艺的优化

为了确定环孢菌素A结晶工艺,对溶剂种类、反溶剂加入量、结晶温度和降温方式等因素的影响进行研究。首先通过静态结晶研究,确定了丙酮/水结晶体系和溶剂比例。在此基础上,设计了正交试验L9(34)考察动态结晶中各因素对环孢菌素A结晶收率和纯度的影响,并进一步优化了结晶降温方式。结果表明:确定环孢菌素A结晶的最佳条件为采用梯度程序降温,养晶温度为-5℃,丙酮和水的体积比为2∶1,反溶剂水流加时间为0.5 h,开始流加点为降温至0℃,结晶时间约为3 h。经HPLC分析环孢菌素A的纯度平均值为99.15%,收率平均值为87.7%。

克拉维酸钾有关物质F的合成

为了保证克拉维酸钾(1)的质量,本研究合成了欧洲药典收载的有关物质F,即4-[[[4-(2-羟乙基)-1H-吡咯-3-羰基]-氧]甲基]-1H-吡咯-3-羧酸。4-氯乙酰乙酸甲酯(2)与原甲酸三乙酯反应得4-氯-2-(二乙氧基甲基)-3-氧代丁酸甲酯(3),3与甘氨酸反应得烯胺。烯胺在乙酸酐中回流,经环合、脱羧得4-(氯甲基)-1H-吡咯-3-羧酸甲酯(5)。5和1的降解产物4-(2-羟乙基)-1H-吡咯-3-羧酸(8)反应得[4-(甲氧基羰基)-1H-吡咯-3-基]甲基4-(2-羟乙基)-1H-吡咯-3-羧酸甲酯(6),6经水解得有关物质F。产物结构经MS、1H NMR和13C NMR确证。