lncRNA PAX8-AS1对结直肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用及其机制

目的:探讨长链非编码RNA配对盒8反义RNA 1(PAX8-AS1)在人结直肠癌(CRC)组织中的表达水平及其对CRC细胞增殖、凋亡及侵袭的作用,并阐明其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测94例CRC患者癌组织和癌细胞中PAX8-AS1 mRNA和miR-22-3p表达水平。将PAX8-AS10 siRNA小分子序列与miR-22-3p inhibitors分别转染或共转染至CRC细胞中,转染后细胞分为si-NC组(转染阴性序列)、si-PAX8-AS1组(转染PAX8-AS1 siRNA)、si-PAX8-AS1+inhibitors NC组(共转染PAX8-AS1 siRNA和inhibitors NC)和si-PAX8-AS1+inhibitors组(共转染PAX8-AS1 siRNA和miR-22-3p inhibitors),另取未经任何转染的SW480细胞作为对照组。RTqPCR法检测转染后各组细胞中PAX8-AS1 mRNA和miR-22-3p表达水平,MTT法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭率,Western blotting法检测各组细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和cleaved Caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证PAX8-AS1与miR-22-3p的靶向关系。结果:RT-qPCR法检测,与癌旁组织比较,癌组织中PAX8-AS1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01),miR-22-3p表达水平明显降低(P<0.01);与人正常结肠上皮细胞NCM460比较,SW480、SW620、HT-29和LoVo细胞中PAX8-AS1 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01),miR-22-3p表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组和si-NC组比较,si-PAX8-AS1组细胞中PAX8-AS1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01),miR-22-3p表达水平明显升高(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞中miR-22-3p表达水平明显升高(P<0.01)。MTT法检测,与对照组比较,si-PAX8-AS1组、si-PAX8-AS1+inhibitors NC组和si-PAX8-AS1+inhibitors组细胞培养48和72 h时细胞增殖活性均明显降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞培养48和72 h时细胞增殖活性均明显降低(P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,si-PAX8-AS1组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1组和si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。Transwell小室实验检测,与对照组比较,si-PAX8-AS1组细胞迁移和侵袭率明显降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1组和si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞迁移和侵袭率明显降低(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组和si-NC组比较,si-PAX8-AS1组细胞中Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。TargetScan预测PAX8-AS1与miR22-3p存在靶向结合位点。双荧光素酶报告基因实验,与共转染mimics NC的细胞比较,miR-22-3p mimics共转染后PAX8-AS1-WT细胞中荧光素酶活性明显降低(P<0.01)。结论:PAX8-AS1在人CRC组织中高表达,沉默PAX8-AS1可抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡,其机制可能与上调miR22-3p表达有关。

2017—2022年我院放疗科抗肿瘤中药处方分析

目的 分析南华大学附属第二医院放疗科抗肿瘤中药的使用情况,了解中药使用规律和特点,为临床合理使用中药抗肿瘤和中药的科学管理提供依据。方法 选取2017—2022年医院放疗科抗肿瘤中药处方1 323张,采用Excel表对处方药味数、常用毒性饮片超剂量情况、涉及肿瘤类别、中药使用频数、频率、使用量及销售金额进行统计分析。结果 处方药味数主要分布在16~20味,占比46.26%;常用毒性中药饮片为山慈菇、苍耳子、重楼、全蝎及山豆根;疾病排名前五的是肺癌、鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌和口腔癌;使用频率排前的是甘草、黄芪、白术、茯苓、白花蛇舌草等,其功效以补虚及清热解毒为主;2017—2022年中药使用量合计为2 112.34 kg,销售金额合计为69.35万元;2017—2022年使用排名前五的是黄芪、茯苓、白花蛇舌草、太子参、黄精,销售金额排名前五的是太子参、酸枣仁、云芝、红芪和黄芪【超微】。结论 医院放疗科通过辨证论治,使用中药抗肿瘤情况基本合理,但仍存在一些不足,放疗科、中医科及药剂科需共同加强中药处方科学管理。

抗菌肽LL-37对结肠癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及其机制

目的:探讨抗菌肽LL-37对结肠癌小鼠肿瘤生长和细胞凋亡的影响,阐明其抗肿瘤作用的可能分子机制。方法:构建LL-37过表达结肠癌HT-29细胞,采用qRT-PCR和Western blotting法检测HT-29细胞中LL-37 mRNA和蛋白表达水平。30只BALB/c小鼠随机分为对照组(给予未经感染的HT-29细胞)、空载组(给予感染空载质粒的HT-29细胞)、LL-37过表达组(给予感染LL-37过表达载体的HT-29细胞)、AMPK抑制剂组[给予感染空载体的HT-29细胞后,立刻尾静脉注射2 mg·kg-1(Dorsomorphin,Dor)]和联合组(给予感染LL-37过表达载体的HT-29细胞后,立刻尾静脉注射2 mg·kg-1 Dor),每组6只。采用结肠癌HT-29细胞复制结肠癌小鼠模型,观察各组小鼠肿瘤体积并绘制生长曲线,感染24 d后剥离肿瘤测量质量并计算抑瘤率,TUNEL染色检测各组小鼠肿瘤细胞凋亡情况,Western blotting法检测各组小鼠肿瘤组织中自噬相关蛋白Beclin1、Atg5、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ及AMPK/mTOR通路相关蛋白AMPK、p-AMPK、mTOR及p-mTOR表达水平。结果:与对照组和空载组比较,LL-37过表达组小鼠结肠癌HT-29细胞中LL-37 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),肿瘤质量和体积明显降低(P<0.05),抑瘤率升高(P<0.05),肿瘤细胞凋亡数减少,肿瘤组织中自噬相关蛋白Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值均明显升高(P<0.05),p-mTOR/mTOR比值明显降低(P<0.05);与空载组比较,AMPK抑制剂组小鼠肿瘤质量和体积明显升高(P<0.05)、抑瘤率降低(P<0.05),肿瘤细胞凋亡数减少,自噬相关蛋白Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值明显降低(P<0.05),p-mTOR/mTOR比值明显升高(P<0.05);与LL-37过表达组比较,联合组小鼠肿瘤组织中Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值明显降低(P<0.05或P<0.01),p-mTOR/mTOR比值明显升高(P<0.01)。结论:抗菌肽LL-37能激活AMPK/mTOR信号通路促进细胞自噬,进而抑制结肠癌HT-29荷瘤小鼠的肿瘤生长。

红景天苷抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导人结直肠癌细胞凋亡和自噬

目的:通过观察红景天苷对人结直肠癌(CRC)HT29细胞体外生长的作用初步探讨其诱导凋亡、自噬的可能机制。方法:不同浓度红景天苷(0.5、1.0、2.0 mmol/L)处理HT29细胞后,MTT法检测细胞增殖情况;赫斯特染色检测HT29细胞凋亡;免疫荧光染色观察HT29细胞LC3荧光强度变化;吖啶橙染色观察HT29细胞自噬;Western blot检测HT29细胞中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达。结果:红景天苷显著抑制HT29细胞增殖,且呈剂量依赖性;与对照组相比,红景天苷组(1.0、2.0 mmol/L)细胞凋亡明显增加(P<0.05);红景天苷组LC3荧光染色强度增强;随着红景天苷浓度增加,被吖啶橙着色显红色的酸性囊泡细胞器增加;红景天苷各剂量均可显著抑制HT29细胞内p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达,其中以2 mmol/L红景天苷抑制效果最为显著。结论:红景天苷可抑制人CRC HT29细胞增殖、诱导其自噬、凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

慢病毒介导PDIA3过表达对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜屏障的影响及其机制

目的探讨蛋白质二硫键异构酶A3(PDIA3)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的保护作用及其可能机制。方法将60只C57BL/6小鼠随机分成正常对照组(Control组)、模型组(Model组)、空载慢病毒组(Lv-NC组)和PDIA3过表达慢病毒组(Lv-PDIA3组),每组15只。采用连续7 d自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液建立UC小鼠模型,造模成功后开始注射慢病毒干预。慢病毒干预7 d后结束实验,对各组小鼠进行疾病活动指数(DAI)评分,HE染色观察结肠组织病理学变化,ELISA法检测血清中炎症因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及肠黏膜屏障通透性标志物D-乳酸(D-Lac)、二胺氧化酶(DAO)含量,qRT-PCR检测结肠组织中PDIA3 mRNA水平,Western blot检测结肠组织中PDIA3、ZO-1、Occludin、Claudin-1、IκBα、p-NF-κB p65(Ser536)、NF-κB p65蛋白表达水平。结果与Control组比较,Model组小鼠结肠组织受损严重,DAI评分、血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、D-Lac、DAO含量以及结肠组织中IκBα和p-NF-κB p65(Ser536)蛋白表达水平均升高,而ZO-1、Occludin和Claudin-1等蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01);与Model组比较,Lv-PDIA3组小鼠结肠组织受损程度减轻,DAI评分、血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、D-Lac、DAO含量以及结肠组织中IκBα和p-NF-κB p65(Ser536)蛋白表达水平降低,同时ZO-1、Occludin和Claudin-1蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.01),而Lv-NC组差异无统计学意义。结论过表达PDIA3能明显改善UC小鼠肠黏膜屏障功能,其机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活有关。

抗菌肽LL-37通过激活AMPK介导的自噬对结肠癌HT-29细胞凋亡的研究

目的探讨抗菌肽LL-37对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响及其分子机制。方法以结肠癌HT-29细胞作为研究对象,加入不同浓度(50、100、200μg/ml)的抗菌肽LL-37或联合AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)抑制剂多索吗啡(10μmol/L)处理48h后,采用流式细胞术检测HT-29细胞凋亡率,Westernblot实验检测HT-29细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)、自噬相关蛋白(Beclin1、Atg5、LC3I和LC3II)和AMPK蛋白的表达。结果高浓度抗菌肽LL-37能促进结肠癌HT-29细胞凋亡(P<0.05),并上调自噬相关蛋白Bec-lin1、Atg5表达水平以及提高LC3II/LC3I值(P<0.05),并且伴随着AMPK异常激活(P<0.01);AMPK抑制剂联合干预能逆转抗菌肽LL-37对HT-29细胞的作用效果。结论抗菌肽LL-37通过激活AMPK介导的自噬促进结肠癌HT-29细胞的凋亡。

miR-515-5p通过靶向TRIM31调控PI3K/AKT信号通路对结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的MiR-515-5p是一种抑癌基因,其在结直肠癌(CRC)中的作用及机制有待于研究。文章探讨miR-515-5p过表达对CRCHT-29细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法采用qRT-PCR法检测81例CRC癌组织和癌旁组织以及结肠上皮细胞NCM460和CRC细胞系(SW620、HCT116、HT-29和SW480)中miR-515-5p的表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-515-5p和三结构域蛋白31(TRIM31)的靶向关系。将miR-515-5p mimic及其阴性对照(mimic NC)和TRIM31过表达质粒载体(pcDNA3.1-TRIM31)及其空白载体(Vector)转染至HT-29细胞中,分为blank组(未转染质粒)、mimic NC+Vector组(共转染mimic NC和Vector质粒)、miR-515-5p mimic组(转染miR-515-5p mimic)、pcDNA3.1-TRIM31组(转染过表达质粒pcDNA3.1-TRIM31)和mimic+pcDNA3.1-TRIM31组(共转染miR-515-5p mimic和过表达质粒pcDNA3.1-TRIM31);qRT-PCR检测细胞中miR-515-5p与TRIM31 mRNA表达水平;CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测细胞中TRIM31、PI3K(p110α)、p-AKT(Ser473)和AKT等蛋白表达水平。结果CRC癌组织及细胞系中miR-515-5p的表达水平显著低于CRC癌旁组织和结肠上皮细胞(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实,TRIM31是miR-515-5p靶基因。过表达miR-515-5p可明显上调HT-29细胞中miR-515-5p表达水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力,并下调TRIM31 mRNA及TRIM31、PI3K和p-AKT蛋白表达水平(P<0.01)。而过表达TRIM31可显著上调HT-29细胞中TRIM31 mRNA和蛋白表达,促进细胞增殖、迁移和侵袭,并上调PI3K和p-AKT蛋白表达水平(P<0.01)。平板克隆形成实验结果显示,与blank组细胞克隆数[(126.67±8.08)个/孔]或mimic NC+Vector组细胞克隆数[(123.33±6.51)个/孔]比较,mimic组HT-29细胞克隆数[(50.00±11.53)个/孔]明显降低(P<0.01),而pcDNA3.1-TRIM31组HT-29细胞克隆数[(197.33±20.21)个/孔]明显增加(P<0.01);与mimic组比较,mimic+pcDNA3.1-TRIM31组HT-29细胞克隆数[(152.33±7.64)个/孔]又明显增加(P<0.01)。此外,过表达TRIM31可显著逆转miR-515-5p mimic对HT-29细胞增殖和侵袭的抑制作用(P<0.01)。结论miR-515-5p在人CRC癌组织和细胞系中低表达,过表达miR-515-5p可抑制HT-29细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与靶向TRIM31调控PI3K/AKT信号通路有关。

BS69在结直肠癌组织中的表达以及病理相关性研究

目的:探讨BS69在结直肠癌组织及细胞系中蛋白和mRNA的表达水平,分析BS69与患者病理特征的相关性。方法:选择2016年8月至2017年10月间手术切除的60例结直肠癌组织和25例癌旁正常组织,采用免疫组化和RTq PCR法检测组织中BS69蛋白和mRNA的表达情况。采用蛋白印迹(Western blot)法检测BS69在三种结直肠癌细胞系和正常结直肠上皮细胞中的蛋白表达。结果:BS69免疫组化染色主要定位于细胞核,少量位于细胞浆。其在结直肠癌和正常结直肠组织中的阳性率分别为65%和87%,差异具有统计学意义(P<0. 05); BS69在结直肠癌组织中的表达水平与Dukes分期、肿瘤组织分级、淋巴结转移及远处转移有相关性(P<0. 05); Western blot检测BS69在3种结直肠癌细胞系与正常结直肠上皮细胞中蛋白表达,各细胞系中结果有明显差异;结直肠癌组织中BS69 mRNA的表达明显低于正常组织,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论:BS69是重要的转录抑制因子,可能参与了结直肠癌的发生、发展过程,有望成为特异性较高的肿瘤标志物。

针灸治疗出口梗阻型便秘的临床效果研究

目的:探究针灸治疗出口梗阻型便秘的临床效果。方法:将我院收治的60例出口梗阻型便秘患者纳入本次实验,入选病例均来自2016年1月-2017年9月,按照随机双盲法将其分为治疗组(30例)与对照组(30例),对照组采用常规疗法,观察组在对照组的基础上采取针灸治疗。观察两组患者的治疗效果、不良反应发生率以及患者的生活质量。结果:与对照组相比,治疗组患者的治疗总有效率明显更高,不良反应发生率更低,治疗组患者生活质量各项评分更高,两组间各个指标进行比较差异有统计学意义(P <0.05)。结论:针灸治疗出口梗阻型便秘的临床效果较好,显著提升了治疗的效果,缓解患者痛苦的同时,降低了患者不良反应的发生率,改善了患者的生活质量,值得在临床进行推广。

参芪止血汤治疗痔疮出血临床疗效观察

目的:探讨参芪止血汤在痔疮出血治疗中的临床疗效。方法:选取我院2017年1月—2018年1月收治的中医证型为气虚型的痔疮出血患者72例作为观察对象,以计算机随机分组的原则将其分成对照组36例和观察组36例,对照组在常规治疗的基础上予以普济痔疮栓治疗,观察组在对照组的基础上予以参芪止血汤治疗,对比两组患者的临床治疗效果。结果:观察组治疗后总有效率为94. 44%,明显高于对照组的为80. 56%(P <0. 05);观察组患者平均用药天数、平均住院天数及肛管静息压力均显著优于对照组(P <0. 05);观察组治疗后不良反应发生率为11. 11%,明显低于对照组的27. 78%(P <0. 05)。结论:参芪止血汤不仅有效改善痔疮出血患者的临床疗效,还能有效控制出血量,缓解疼痛,继而达到提升生活质量的目的,值得临床推广应用。

肛裂切除黏膜下移手术治疗肛裂效果观察

目的观察肛裂切除黏膜下移手术治疗肛裂的效果.方法选取医院2016年1月-2018年1月收治的肛裂患者100例,采用电脑随机的方式均分为观察组和对照组各50例.对照组给予常规肛裂切除术治疗,观察组给予肛裂切除黏膜下移手术治疗.比较2组患者的临床疗效、住院时间、术后出血量、疼痛程度及不良反应发生情况.结果观察组总有效率为96.00%高于对照组的84.00%,差异有统计学意义(χ^2=7.454,P<0.05).观察组患者的住院时间短于对照组,术后出血量少于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).观察组在术后第1天、第2天及第7天疼痛程度评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).观察组不良反应发生率为6.00%低于对照组的10.00%,差异有统计学意义(χ^2=6.654,P<0.05).结论肛裂切除黏膜下移手术治疗肛裂疗效较好,能缩短治疗时间,缓解患者疼痛程度,降低不良反应发生率,安全性高,值得推广.

弹力线套扎术治疗内痔的临床效果

目的:探究弹力线套扎术对于内痔的治疗效果。方法:从2019年4月至2020年4月期间来南华大学附属第二医院就诊的内痔患者中选取92例参与本研究,执行随机性分组,对照组46例接受常规胶圈自动套扎治疗,观察组46例接受弹力线套扎治疗。针对疗效、患者临床指标及并发症等方面进行比较。结果:观察组患者治疗总有效率高于对照组,观察组患者疼痛持续、创面恢复时间及住院天数均短于对照组,观察组患者并发症发生率低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:弹力线套扎术治疗内痔的效果理想,患者疼痛持续时间短,术后恢复快。

血浆胞外囊泡源性circ0001874通过负向调控miR-515-5p介导胃癌MGC-803细胞免疫逃逸

为探讨血浆胞外囊泡(extracellular vesicle,EV)源性circ0001874对胃癌MGC-803细胞免疫逃逸的影响,收集89例胃癌患者癌组织及其癌旁组织,同时分离血液中的EV,并将circ0001874 siRNA干扰质粒、circ0001874过表达质粒及其相关阴性对照质粒转染至EV中,采用qRT-PCR检测circ0001874和miR-515-5p的表达水平。将miR-515-5p inhibitor及其阴性对照NC inhibitor转染至MGC-803细胞,再分别与EV共培养48 h,采用qRT-PCR检测各组细胞中circ0001874和miR-515-5p的表达水平,MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组细胞侵袭情况,Western blotting检测各组肿瘤细胞参与免疫逃逸的蛋白[凋亡相关因子配体(factor related apoptosis ligand,FasL)、吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)、PD-L2和PD-L1]表达水平。结果显示,与癌旁组织比较,胃癌组织中circ0001874表达水平升高(P<0.05),而miR-515-5p表达水平降低(P<0.05);circ0001874过表达或敲低后,EV中miR-515-5p表达水平降低或升高(P<0.05);与si-circ0001874 EV共培养后,MGC-803细胞中miR-515-5p表达水平升高,细胞增殖活性,细胞侵袭数量及免疫逃逸蛋白FasL、PD-L1、PD-L2和IDO1表达水平降低(P<0.05);抑制miR-515-5p可以逆转si-circ0001874 EV对MGC-803细胞增殖、侵袭及免疫逃逸的影响。该研究提示,血浆EV源性circ0001874通过靶向负调控miR-515-5p促进胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭及免疫逃逸。

芍倍注射肛垫修复术与PPH术治疗75岁及以上痔病的临床效果比较

目的比较芍倍注射肛垫修复术与PPH术治疗75岁及以上痔病的临床疗效差异。方法按照研究目的查询病历及随访记录,从本院2008年1月至2019年8月收治并诊断为Ⅱ~Ⅲ度内痔或以Ⅱ~Ⅲ度内痔为主的混合痔,且采用芍倍注射肛垫修复术或采用PPH手术治疗的75岁及以上患者中,各随机抽取50例,分别作为观察组与对照组,对其临床资料进行回顾性分析,对比两组手术效果及术后并发症发生情况。结果两组治疗总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组术后第3天及术后第7天肛门疼痛程度轻于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。观察组术后出血、排尿困难、直肠狭窄发生率低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论采用芍倍注射液行肛垫修复治疗75岁及以上痔病与PPH疗效相当,后者更有助于减轻患者术后疼痛,降低术后出血、排尿困难、直肠狭窄发生率,操作简便,有一定的应用优势。