一株植物乳杆菌高密度培养的研究

通过单因素实验、Plackett-Burman法、最陡爬坡试验对分离自内蒙古传统发酵乳制品中高产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌NDC75017培养基成分及培养条件进行优化研究。确定影响菌体生长的显著因素为葡萄糖、硫酸锰、柠檬酸氢二铵。利用Box-Behnken设计确定了植物乳杆菌NDC 75017的增殖培养基配方。结果表明,菌体在最优条件下进行培养,活菌数可达6.48×1010mL-1。细胞干重可达3.93 g/L。

富含γ-氨基丁酸酸奶的制备及质构特性研究

本试验对单菌发酵、混菌发酵和添加不同底物浓度的L-谷氨酸钠对酸奶感官特性和质构特性的影响作用进行了研究,为开发富含γ-氨基丁酸的新型功能发酵乳制品提供依据。试验结果表明,当底物L-谷氨酸钠的添加浓度为75mmol/L,辅酶浓度为20μmol/L,植物乳杆菌NDC75017、德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜热链球菌3株菌混合(L.P∶L.b∶S.t=0.5∶0.5∶1.5)按2%的比例添加量,在43℃条件下发酵酸奶时,酸奶的感官特性和质构特性最好。此时酸奶的粘度为1 466.5±1.0p·s、保水力为71.7±3.2%、硬度为77.3±1.7g、凝聚性为48.1±1.2g、粘性指数为146.8±0.9p·s;用高效液相色谱法检测酸奶中GABA的含量高达46mg/100g。综合酸奶口感、质构特性及GABA含量等指标,最终选择添加底物L-谷氨酸钠的浓度为75mmol/L,植物乳杆菌NDC75017、德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜热链球菌3株菌作为酸奶发酵的混合发酵剂。

植物乳杆菌NDC 75017的降胆固醇作用

植物乳杆菌NDC 75017分离自中国内蒙古传统发酵乳制品。本实验对其体外环境耐受性及其降胆固醇作用进行研究。采用活菌计数法检测植物乳杆菌NDC 75017在pH 2.0～3.0的酸性环境、胆盐质量浓度0.3g/100mL、NaCl质量浓度0～7g/100mL以及模拟人工消化液环境下的耐受情况;同时以邻苯二甲醛法测定其体外降胆固醇能力。结果表明:植物乳杆菌NDC 75017可耐受pH3.0及0.3g/100mL胆盐环境;在7g/100mL的高盐质量浓度条件活菌数仍可达108CFU/mL;可以通过胃进入肠道而保持活性,在肠道处理8h后存活率为58.73%。体外降胆固醇实验测得细菌发酵上清液、菌体洗涤液和细胞破碎液中的胆固醇脱除率分别为16.43%、26.35%和32.87%。植物乳杆菌NDC 75017环境耐受能力良好,具有体外降胆固醇作用,该菌株可以作为降胆固醇的潜在益生菌。

γ-氨基丁酸发酵乳的研制

通过内蒙古发酵乳制品中分离出的高产γ-氨基丁酸(GABA)的菌株与传统发酵酸奶的菌株(德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌)相结合,研制出GABA发酵乳。采用16S rDNA序列分析,对分离到的菌株进行了属种鉴定;通过菌株复配、优化发酵温度和接种量,使最终的产品性状优良,且保证GABA的产量相对较高;并用高效液相色谱技术检测产品中GABA的含量。结果表明:分离出的高产GABA的菌属于植物乳杆菌;当植物乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌比例为0.5∶0.5∶1.5,接种量为2%,发酵温度为43℃时,产品的性状最优,且GABA的产量也相对较高;运用高效液相色谱法测得发酵乳中GABA的含量为1.515 1 g/L。该菌株作为发酵剂,将对今后开发新型功能性乳制品提供基础。

PFGE与16S rDNA对阪崎克罗诺杆菌分型的研究

研究脉冲场凝胶电泳(PFGE)与16S rDNA序列分析在阪崎克罗诺杆菌分型中的应用。对分离自不同来源的10株阪崎克罗诺杆菌进行16S rDNA序列扩增及测序,并构建系统发育树进行聚类分析。再利用限制性内切酶Xba I对这10株菌酶切后,进行PFGE电泳分型。16S rDNA序列分析显示,所有分离菌株与ATCC标准菌株在同一系统发育分支下,其序列相似性达到98.37%,并且不能进一步分型。而PFGE分型结果显示,10株分离菌株和2株标准菌株共分成11种PFGE基因型,说明PFGE的分型能力明显优于16S rDNA序列分析,部分菌株的基因型与分离来源具有一定的相关性,所以PFGE分型方法可用于阪崎克罗诺杆菌分子分型及溯源的研究。

嗜酸乳杆菌NCFM胞外多糖对小鼠免疫相关基因的调控

目的:研究嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)NCFM胞外多糖对小鼠免疫相关基因的调控作用。方法:通过构建小鼠模型,对小鼠脏器系数进行分析,提取肠组织RNA,采用Real-time RT-PCR方法对免疫相关基因chemokine(C-C motif)ligand 2(CCL2)和interleukin 18(IL18)的表达情况进行分析。结果:脏器系数随着天数的增加而增加,实验组的脏器系数较对照组相比,显著增加。在2个免疫相关基因中,随着时间的延长,IL18和CCL2呈现出先迅速增加后减少的趋势,同时均在第4天表达量达到最大值,且与对照组相比差异极显著(P<0.01)。结论:胞外多糖可以提高小鼠免疫脏器的质量,并且能够引起免疫相关基因出现特定表达变化,对小鼠机体的免疫调控具有一定的作用。

环介导等温扩增技术快速检测肉中沙门氏菌

应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了一种快速、高效、灵敏的肉中沙门氏菌的检测方法。针对沙门氏菌的属特异性基因inv A设计2对引物,对人工污染肉样以及实际肉样分别进行检测。结果表明:所建立的LAMP反应能够特异性的检测沙门氏菌,对沙门氏菌纯菌的检测灵敏度为普通PCR的100倍,可达到9.8×100CFU/m L。LAMP检测人工污染沙门氏菌肉样的检测限为9.8×101CFU/m L。因此,本实验利用LAMP建立的沙门氏菌检测方法具有快速、灵敏、特异、操作简便的特点,具有广泛发展前景。

气相色谱-质谱法检测牛初乳中β-雌二醇的研究

建立了气相色谱-质谱法检测牛初乳中β-雌二醇质量浓度的方法.牛初乳经过β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶水解后,经过乙腈超声提取、沉淀蛋白,正己烷去除脂肪,HLB固相萃取柱富集净化后,氮气流下吹干,N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）衍生,N-甲基-N-三甲基硅基三氟乙酰胺（TMCS）辅助催化,气相色谱-质谱（GC-MS）对衍生物进行检测分析.β-雌二醇质量浓度在5～200 μg/L之间线性关系良好,相关系数（R2）大于0.999;加标回收率在85.13％～104.78％之间,相对标准偏差在4.74％～5.97％之间.该方法操作简便、灵敏,精密度好,适用于牛初乳中β-雌二醇的测定.

阪崎克罗诺杆菌耐热性和耐酸碱性的研究

研究阪崎克罗诺杆菌分离菌株对温度及酸碱的耐受性,从而对婴儿配方粉生产过程中的阪崎克罗诺杆菌的污染进行控制。对4株来源不同的阪崎克罗诺杆菌进行不同温度和酸碱条件的处理,并将处理后的菌液涂布于TSA培养基观察菌株的存活情况;以阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544为阳性对照。结果显示,不同来源的菌株对温度及酸碱的耐受性存在一定的差异,这为降低该菌的感染风险提供了依据。

蜡样芽胞杆菌在双歧杆菌四联活菌片治疗小鼠腹泻中的作用研究

目的研究双歧杆菌四联活菌片中的蜡样芽胞杆菌对小鼠腹泻治疗作用的影响。方法将SPF小鼠采用抗生素联合伤寒沙门菌和志贺菌诱导建立腹泻模型,取112只造模成功后的小鼠随机分为7组,其中三组分别喂养3种不同剂量的四联活菌片,三组分别喂养3种不同剂量的不含蜡样芽胞杆菌的三联活菌片,余下一组为对照组灌胃生理盐水。比较各组小鼠腹泻的治愈时间,测定粪便菌群、结肠组织耗氧能力及氧化还原电势、肠内sIgA含量及脾脏指数变化。结果相同剂量条件下,含蜡样芽胞杆菌的四联活菌片治愈腹泻时间比三联活菌片缩短48~72h。治疗48h后,四联活菌片组肠内sIgA水平明显增加,与三联活菌片组相比差异有统计学意义(t=5.5783,P=0.0002);治疗结束后,四联活菌片组的脾脏指数也显著高于三联活菌片组(t=18.8648,P=0.0001)。结论含蜡样芽胞杆菌的四联活菌片对小鼠腹泻的治疗及肠道菌群的恢复作用比三联活菌片效果更佳,能显著促进腹泻小鼠肠黏膜局部免疫力的提高。

思连康对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数的影响

目的研究双歧杆菌四联活菌片(商品名:思连康)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率及吞噬指数的影响。方法将SPF小鼠30只随机分成三组,每组10只,Ⅰ组灌胃生理盐水,Ⅱ组灌胃婴儿双歧杆菌菌悬液,Ⅲ组灌胃双歧杆菌四联活菌片菌悬液,每天给药0.5 mL,菌液浓度为1.0×10~8 CFU/mL,连续给药10 d后小鼠腹腔注入2%鸡红细胞悬液1 mL(红细胞数量为2×10~8个/mL),30 min后处死,取小鼠腹腔洗液,观察并记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数及被吞噬的鸡红细胞数,计算吞噬率及吞噬指数。结果与Ⅰ组相比,Ⅱ组和Ⅲ组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数均显著升高(Ps<0.05),其中Ⅲ组高于Ⅱ组(P<0.05)。结论双歧杆菌四联活菌片及其婴儿双歧杆菌通过提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数提高机体的免疫力。

双歧杆菌四联活菌片体外生物拮抗作用的研究

目的实验通过双歧杆菌四联活菌片(思连康)对肠道致病菌体外生物拮抗作用的研究,揭示此药治疗腹泻等疾病的作用机制,为临床应用提供科学依据。方法对组成药物的4株益生菌发酵培养,定时取样,检测活菌数与pH值。先分别单独培养大肠埃希菌、沙门氏菌、志贺氏菌、思连康活菌片,调整菌液浓度,然后将思连康与每一个致病菌的菌液共同接种于GAM肉汤,并将每种菌液单独接种作为对照组,厌氧培养,定时检测致病菌与双歧杆菌的活菌数并分析。结果思连康4株菌株发酵终点活菌数均在109 CFU/mL以上,发酵过程中3株原籍菌的pH值逐渐下降,蜡样芽孢杆菌pH值先下降后升高。思连康与致病菌共培养6h,思连康显著影响大肠埃希菌生长(P<0.05),而对沙门氏菌和志贺氏菌的生长无影响(P>0.05);共培养12h,思连康对3株致病菌均产生明显抑菌作用(P<0.05);共培养24h,未检测到致病菌的存在(P<0.01)。结论双歧杆菌四联活菌片对致病菌抑制作用强。