恶性疟原虫基因组文库的构建及未知抗原cDNA片段的筛选

恶性疟原虫FCC1／HN株基因组DNA经Sau3AⅠ部分酶切，取14－23kb片段连接入GEW-11λ噬菌体置换型载体构建基因组文库。所得重组体数目为7.3×104pfu，近达构建完整恶性疟原虫基因组文库理论值的10倍。随机挑取该库10个噬菌斑，抽提λDNA，用XhoⅠ酶切，得到14－23kb的插入片段和载体双臂，符合建库要求．以抗体筛选恶性疟原虫cDNA表达文库所获得的未知抗原cDNA片段为探针，在其中筛选到了阳性克隆，为阐明该未知cDNA对应的基因奠定了基础．

卵细胞质内单精子注射治疗不孕症34例临床总结

目的总结应用单精子卵细胞质内注射（ICSI）治疗不孕症的临床效果。方法对34对男性因素、原因不明、受精障碍不孕患者采用GnRHa长周期促排卵方案，给有第一极体的卵细胞行单精子注射。结果34例34个治疗周期中，1例因反应不良取消。取卵数378个，注射卵数317（83．9％）个，正常受精卵231个（72．9％）卵裂228（98．3％）个，良好胚胎99（43．4％）个，平均移植胚胎数36个，临床妊娠12例（移植周期妊娠率为36.4％）。结论ICSI是治疗男性因素、原因不明、受精障碍等因素引起不孕症的一种切实可行的方法。

男性不育病人Y染色体AZFc/DAZ微缺失的实时荧光PCR筛查

目的 :建立一套Y染色体微缺失的实时荧光PCR筛查方法 ,对无精子症或少精子症男性不育病人进行Y染色体AZFc/DAZ微缺失的常规筛查。 方法 :采用实时荧光PCR对进行卵细胞胞质内单精子注射 (ICSI)治疗的 87例无精子症和少精子症病人以及睾丸活检的 30例无精子症病人进行Y染色体AZFc/DAZ微缺失的检测 ,同时用多重PCR作为方法学对照。 结果 :AZFc/DAZ缺失 11例 (9.4%) ,其中 6 1例少精子症病人中发现 4例(6 .6 %) ,5 6例无精子症病人中发现 7例 (12 .5 %)。 结论 :Y染色体AZFc/DAZ微缺失的实时荧光PCR筛查方法是易行和可靠的 ,与多重PCR筛查结果完全一致。

多重PCR检测缺失型α地中海贫血

目的 针对中国人常见的缺失型α地中海贫血建立一种快速、简便、可靠的多重聚合酶链反应 (PCR)基因诊断技术。方法 设计 4对引物 ,利用单管多重PCR方法进行扩增 ,同时检测 3种缺失型和正常的α2 珠蛋白基因。结果 成功检测出正常人及 3种缺失型的杂合子、双重杂合子 ;正常α2 基因的扩增片段为 180 0bp ,东南亚型缺失基因的扩增片段为 70 8bp ,右侧缺失基因的扩增片段为 2 0 2 2bp ,左侧缺失基因的扩增片段为 16 2 8bp , α3 .7/ SEA双重杂合子的扩增片段为 2 0 2 2bp和 70 8bp , α4.2 / SEA双重杂合子的扩增片段为 16 2 8bp和 70 8bp。结论 790例标本的基因检测结果分析表明 ,该法快速、准确 ,可用于常规临床标本的检测。

荧光MGB探针实时PCR检测经典型苯丙酮尿症的基因突变

【目的】探讨荧光MGB探针实时PCR技术检测经典型苯丙酮尿症的基因突变。【方法】运用荧光MGB探针实时PCR检测经典型苯丙酮尿症33例,一级亲属43例,正常对照30例。检出R243Q突变的PCR标本进行测序验证。【结果】发现11例PKU具有R243Q突变,突变频率为33%,其中突变纯合子4例,突变杂合子7例,一级亲属检出R243Q杂合子突变9例,正常人未发现R243Q突变。所有突变均经测序证实。【结论】PAH基因第7外显子的R243Q点突变在中国PKU患者中有较高的突变率;荧光MGB探针实时PCR是PKU的基因诊断良好技术平台。

卵母细胞胞质内单精子注射的形态学观察

目的 了解卵母细胞胞质内单精子注射 (intracytoplasmicsperminjection ,ICSI)过程中配子及卵裂球期胚胎各种异常形态与ICSI结果的相关性。方法 对 1998年 11月至 1999年 8月在我中心接受ICSI治疗的 43个周期进行观察、分析。促性腺激素释放激素激动剂降调节长方案进行超促排卵 ,ICSI常规操作 ,比较配子及卵裂球期胚胎正常与各种异常形态同ICSI结果的相关性。结果 精子形态严重畸形、卵母细胞胞浆内大块颗粒样暗区等异常形态影响ICSI结果 ;卵周隙大小不影响ICSI结果 ;注射过程中胞浆膜呈无弹性类的卵母细胞注射后存活率较低 (P <0 .0 1) ;移植胚胎平均分数 3分以上和 3分以下者的临床妊娠率为 5 2 .2 %和 10 .0 % (P <0 .0 1)。结论 部分形态学改变影响ICSI临床治疗效果 。

男性不育患者Y染色体微缺失筛查方法的建立和初步应用

目的 建立一套 Y染色体微缺失的多重 PCR筛查方法 ,对无精症或少精症男性不育患者进行 Y染色体微缺失的常规筛查。方法 建立 5套稳定和可靠的多重 PCR筛查方法 ,对进行单精子卵细胞浆注射治疗的 87例无精症和少精症患者及进行睾丸活检的 30例无精症患者做 Y染色体微缺失的检测。结果 共有 19例发现微缺失 (16 .2 % ) ,其中 6 1例少精症患者中发现 11例 (18.0 % ) ,5 6例无精症患者中发现 8例 (14 .3% )。结论 Y染色体微缺失的多重 PCR筛查方法是易行和可靠的 ,对无精症和少精症患者有必要进行 Y染色体微缺失的常规筛查。

一种新的鸟氨酸氨基甲酰转移酶基因突变E122G的鉴定

目的 测定 1个迟发型鸟氨酸氨基甲酰转移酶 (ornithine transcarbamylase,OTC)缺乏症的中国汉族家系的基因突变及患者 OTC基因外显子序列。方法 用聚合酶链反应 -单链构象多态性结合PCR产物直接测序 ,鉴定其突变类型。结果 在该家系患者 OTC基因中确认了 1个新的错义突变E12 2 G,位于第 4外显子的保守残基 (GAA→ GGA)。结论 OTC基因中 E12 2 G突变引起迟发型 OTC缺乏症 ,是

经阴道输卵管插管行配子输卵管移植的临床初步研究

目的了解经阴道配子输卵管移植治疗非输卵管性不孕症（子宫内膜异位症、男性少弱精症、不明原因不孕等）的效果。方法对２１例（２３个周期）不孕症患者分别采用（１）绝经期促性腺激素（ｈＭＧ）／ｈＣＧ（７个周期）；（２）卵泡刺激素（ＦＳＨ）／ｈＭＧ／ｈＣＧ（２个周期）；（３）短方案促性腺激素释放激素激动剂（ＧｎＲＨａ）／ｈＭＧ／ｈＣＧ（２个周期）；（４）长方案ＧｎＲＨａ／ＦＳＨ／ｈＭＧ／ｈＣＧ（１２个周期）进行超促排卵。阴道超声下取卵，经阴道向输卵管内插管注入卵母细胞和精子，用ｈＣＧ或黄体酮维持黄体功能。结果平均每周期植入卵子数为（３３±２１）个（１～８个）；５例妊娠，周期妊娠率为２１７％，其中宫内妊娠４例，输卵管妊娠１例。２例胚胎停止发育，２例继续妊娠已达３０～３４周。结论经阴道配子输卵管移植是一种操作较简单而有效的助孕技术，与经腹腔镜配子输卵管移植相比，价格低廉，无需麻醉，可用于治疗输卵管正常的多种不孕症。

无精症患者Y染色体微缺失的多重PCR筛查

目的 建立一套Y染色体微缺失的多重PCR筛查方法。方法 建立5套稳定和可靠的多重PCR筛查方法,对进行ICSI治疗的26例无精子症患者和进行睾丸活检的30例无精子症患者进行Y染色体微缺失的检测。结果 在56例无精子症患者中发现5例AZFc/DAZ缺失,2例同时具有AZFc/DAZ和AZFb/RBM1的缺失,1例仅具有sY153一个片段的缺失。结论 本研究Y染色体微缺失的多重PCR筛查方法是易行和可靠的,对无精子症患者有必要进行Y染色体微缺失的常规筛查。