cDNA文库及其在原虫研究中的应用

cDNA文库构建和筛选是基因克隆的重要方法之一,它是目前发现新基因和研究基因功能的基本工具。从cDNA文库中可以筛选到目的基因,并直接用于该基因的表达。由于cDNA文库在基因分离和克隆中具有重要作用,因此其应用也日益广泛。简要介绍自cDNA文库创建以来,发展起来的各类文库及其构建cDNA文库的方法。作者重点阐述了弓形虫、利什曼原虫、阴道毛滴虫、疟原虫等原虫cDNA文库的构建及其应用。

堆型艾美耳球虫生物学特性研究进展

鸡球虫病是一种严重危害养禽业的寄生虫病,其中堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)对鸡致病力较强,在各地养鸡场流行率较高,严重感染时可引起死亡,对鸡的生长发育和饲料转化率有较明显的影响。本文对E.acervulina的流行状况、形态特征、致病性、免疫原性等相关研究进行了综述,为兽医临床有效防治E.acervulina提供理论依据。

腹腔镜直肠癌前切除术472例临床经验总结

目的探讨腹腔镜直肠癌前切除术的手术技巧、经验及疗效。方法回顾性分析2006年4月-2012年10月我院腹腔镜直肠癌前切除术472例的临床资料及手术视频,手术遵循全系膜切除（total mesorectal excision,TME）原则及无瘤技术常规,从中间入路进行解剖游离,采用双吻合器技术进行消化道重建。结果 1 425例成功完成腹腔镜手术,手术时间62-238 min,平均119 min,术中出血15-320 ml,平均62.5 ml。2淋巴结清扫数7-41枚,平均19枚,均行肠系膜下动静脉根部结扎离断。直肠癌手术标本评估3级379例（89.2%）,2级46例（10.8%）。3 47例中转开腹,其中22例是由于手术成员变化而造成的配合生疏及暴露不清,3例盆腔粘连,13例出血无法控制,9例病期较晚与术前评估不符。4无手术死亡病例,术后并发症37例（8.7%）,包括吻合口出血5例,吻合口漏9例,切口感染14例,切口疝9例。5 332例完成腹腔镜手术者随访24-102个月,平均58个月。1年、3年、5年生存率分别为99.7%、90.3%和79.1%。结论腹腔镜直肠癌前切除术应注意关键步骤的把握,骶前及直肠周围的游离技巧是保证系膜完整切除的关键,保证标本切除和取出的完整性。术前应严格控制适应证,减少中转开腹率。强调团队配合,减少助手、持镜医师、护士甚至麻醉师的频繁更替。

腹腔镜结直肠癌手术持镜医师的操作技巧和体会

国外腹腔镜医师及助手需要经过长达2年的严格培训后,方可在有经验的腹腔镜医师指导下进行人体操作。我国腹腔镜在短期培训方面做了一些工作[1],

毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建

为构建毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库，用Trizol试剂提取毒害艾美球虫孢子化卵囊总RNA，采用SMART技术，在逆转录酶的作用下将总RNA反转录成第一链cDNA，经LD-PCR扩增合成双链cDNA（ds cDNA）。经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切，过CHROMA SPIN-400^TM柱去除小于400bp的片段，与λTriplEx2^TM噬菌体载体连接，用GigapackⅢGold^TM载体蛋白包装，构建了cDNA噬菌体表达文库。经测定，原始文库容量为4．72×10^6pfu／mL，扩增后的文库容量为2．62×10^10pfu／mL，重组率为97．5％，插入片段为500～1100bp。证实，该文库质量良好，为毒害艾美球虫新基因的筛选、克隆及功能研究奠定了基础。

新辅助放化疗联合腹腔镜治疗低位直肠癌(保肛)临床疗效

目的:探讨新辅助放化疗(nCRT)联合腹腔镜手术在低位直肠癌保肛手术中的临床疗效。方法:比较nCRT联合腹腔镜直肠癌手术141例(新辅助组)和同期进行的直肠癌单纯腹腔镜手术141例(腹腔镜组)治疗效果。结果:两组在手术时间、肛门排气时间、住院时间、淋巴清扫数目、切口感染率、吻合口瘘率等方面差异无统计学意义;两组保肛率、术中出血量、远端切缘阳性率、远端切缘长度、局部复发率差异有统计学意义。结论:nCRT联合腹腔镜手术治疗低位直肠癌可以提高保肛率,降低局部复发率。

巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建

为构建巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)孢子化卵囊cDNA表达文库,从E.maxima孢子化卵囊中提取总RNA,以总RNA为模板、λTriplex2TM为载体,利用SMARTTM cDNA文库构建试剂盒构建全长cDNA表达文库。经测定构建的E.maxima cDNA表达文库的原始文库容量为1×106 pfu/ml,扩增后的文库滴度为5×1010 pfu/ml,重组率为95%,插入片断主要集中在0.5～1kb之间。根据已知序列设计引物,能从文库中扩增出编码E.maxima免疫球蛋白重链结合蛋白的基因序列片段。结果表明所构建的E.maxima cDNA表达文库质量良好,为克隆、筛选E.maxima的功能性基因奠定了基础。

涉外经营企业推进签订《廉洁从业责任书》的实践

介绍了涉外经营企业在推进签订《廉洁从业责任书》工作中遇到的问题及解决措施,总结了涉外经营企业通过加强内部管理、适应国际法律法规、防范廉洁风险的工作经验。

美国乔治亚州教师评价体系及其启示

2012年,美国乔治亚州正式实施了新的教师评价体系。该体系以促进教师专业发展、帮助学生成长进步、提高州教育质量为目的,内含评价标准、教学实践调查、学生成长三个方面的评价内容,并且具有严格的评价等级和具体的实施程序。借鉴美国乔治亚州教师评价体系的有益经验,我国教师评价要进一步增强指标的可操作性和精细度、合理运用学生成绩进步指标,同时,要以促进教师发展为目的,有效利用评价结果。

低位直肠癌新辅助治疗达到almost-cCR(near-cCR)的缩小手术和根治术疗效的对照研究

目的:总结低位直肠癌行新辅助治疗原发肿瘤达到almost-cCR(almost-clinical complete response)后,比较缩小手术和根治术两种术式的优缺点。方法:回顾性分析2013年1月至2018年10月间,辽宁省肿瘤医院大肠科收治的局部晚期低位直肠癌经新辅助治疗原发肿瘤达到almost-cCR(near-cCR)的共35例患者的临床和病理资料。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。结果:35例病人中,缩小手术组共纳入9例患者,根治术组共纳入26例患者。缩小手术组未出现术后并发症,根治术组3例患者出现术后并发症,发生率11.5%。缩小手术组1年和2年无复发生存率均为100%。根治术组1年和2年无复发生存率分别为96.1%和88.4%。缩小手术组中位DFS和OS均为32.1个月。根治术组中位DFS和OS分别为43.2个月和39.6个月。结论:对于低位直肠癌新辅助治疗达到almost-cCR(near-cCR)的病人,缩小手术组可以取得不亚于根治术组的临床疗效。并且减少手术创伤,改善近期疗效和远期预后。

军队医院科主任综合考评机制科学构建的思考

科主任是科室领导者，是医院学科人才建设的核心，是医院建设发展的中坚力量，在医院管理中起着承上启下的作用。科主任自身素质的强弱，直接影响着科室的管理与发展；医院科主任队伍的整体素质高低，影响着医院的核心竞争力和生存发展，所以说科室主任的素质至关重要。

下调miR-346表达增强奥沙利铂对结肠癌SW620细胞杀伤作用

目的观察miR-346表达对奥沙利铂(Oxaliplatin,OHP)诱导的结肠癌细胞杀伤作用的影响,并探讨其机制。方法给予miR-346 mimic及miR-346 inhibitor转染SW620细胞,采用MTT法观察miR-346 mimic组、miR-346 inhibitor组、MOCK组(空白对照)、OHP组及OHP+miR-346 inhibitor组细胞增殖率;给予0、0.5、5、50、500μmol/L的OHP,或以上浓度OHP+miR-346mimics共同培养SW620细胞72 h,比较细胞存活率。DAPI染色法观察OHP处理的转染miR-346 inhibitor的SW620细胞核固缩及破碎比例;Western blot法检测不同干预下SW620细胞中凋亡相关蛋白表达。结果miR-346 mimic对SW620细胞增殖具有促进作用。miR-346 inhibitor对SW620细胞增殖具有抑制作用。OHP+miR-346 inhibitor对SW620细胞增殖具有抑制作用,与MOCK组及OHP组比较,在72 h和96 h时差异有统计学意义(P<0.05)。OHP(50μmol/L或500μmol/L)+miR-346 inhibitor组SW620细胞存活率低于OHP组(P<0.05)。SW620细胞给予不同干预措施培养48 h后,OHP(50μmol/L)+miR-346 inhibitor共同处理SW620细胞凋亡率高于MOCK组、miR-346 inhibitor组或OHP组(P<0.05)。OHP+miR-346 inhibitor组的SW620细胞核固缩及破碎比例高于OHP组或MOCK组(P<0.05)。与MOCK组比较,miR-346 mimics组caspase-9及Bcl-2蛋白水平升高,Apaf-1及Bax蛋白水平下降(P<0.05);OHP+miR-346 inhibitor组caspase-9及Bcl-2蛋白水平下降,Apaf-1及Bax蛋白水平升高(P<0.05);与miR-346 inhibitor或OHP组比较,OHP+miR-346 inhibitor组caspase-9及Bcl-2蛋白水平下降(P<0.05)。结论下调miR-346表达通过调控凋亡相关蛋白增强奥沙利铂对结肠癌细胞的杀伤作用。

上调结肠癌间充质干细胞中miR-93-5p表达抑制结肠癌细胞增殖及促进凋亡的机制探讨

目的:观察miR-93-5p上调的结肠癌间充质干细胞(colon cancer mesenchymal stem cell,CCMSC)对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:以贴壁细胞培养法抽提癌组织CCMSC,从正常结肠组织抽提结肠间充质干细胞(colon mesenchymal stem cell,CMSC),观察miR-93-5p及PD-L1的表达差异;以拟似剂上调CCMSC中miR-93-5p表达,CCK8法及流式细胞术检测CCMSC诱导的SW480细胞增殖及凋亡变化。结果:miR-93-5p在结肠癌细胞株中表达低于正常结肠上皮细胞(P<0.001),PD-L1 mRNA和PD-L1蛋白在结肠癌细胞株中表达高于正常结肠上皮细胞(P<0.001,P<0.001);miR-93-5p在CCMSC组中表达明显低于CMSC(P<0.001);与SW480细胞比较,给予CCMSC干预后SW480细胞存活率上升(P<0.001),凋亡率下降(P<0.05),与SW480细胞或CCMSC/SW480细胞比较,给予转染miR-93-5pmimics CCMSC干预的SW480细胞存活率下降(P<0.01,P<0.001),凋亡率上升(P<0.05,P<0.01)。结论:上调CCMSC中miR-93-5p通过靶向调控PD-L1抑制结肠癌细胞增殖,促进凋亡。

天意石油装备有限公司基层员工薪酬体系优化研究

近年来,我国国民经济保持持续快速增长的势头。在科技不断进步、知识经济快速崛起,社会不断发展,全球化加剧、市场竞争愈发白热化的形势下,人力资源在提升企业的市场竞争力中发挥着关键作用。作为人力资源管理的核心构成,如果能将薪酬与企业发展结合起来,势必能在吸引人才、激励、提升生产效率方面发挥关键作用。基层员工是国内传统制造企业进行生产的核心因素,但企业通常认为体力劳动并无技术含量,未能对此引起应有重视,仅为其提供了较少的薪酬回报。对企业做出极大贡献的基层员工地位低下,且仅能获得较小的回报,这种不公平给公司员工的积极性以及公司的发展带来了严重阻碍。本文参阅了大量文献,与理论探讨结合起来,归纳了薪酬的基本模式及其影响因素,通过对天意石油装备有限公司的调研,结合企业发展背景,就该公司薪酬体系中面临的问题及基层员工对于薪酬体系的评估进行研究。文章介绍了该公司以及行业基本情况、基层员工薪酬体系现状;指出了该公司基层员工薪酬体系中面临的问题并对其原因进行了分析,提出了含薪酬体系内容优化、优化原则以及结构优化在内的基层员工薪酬体系优化方案,以及含体制保障和管理保障在内的基层员工薪酬体系优化实现的保障方案。通过以上措施来改善天意石油装备有限公司基层员工的薪酬体系,切实提升基层员工的工作热情,进而为企业的工作效率提供有力保障。

指向言语智慧的教学内容发掘

在平常的阅读教学中,大多数教师只是把阅读教学的重点放在了对文本内容的理解感悟上,而忽视了对学生言语智慧的发掘,这样的教学,不仅是对语文课程资源的一种浪费,而且也不利于学生语文能力的发展。因此,作为一名语文教师,应将发展学生的言语智慧作为自己的教学追求,确定好恰当的教学内容,以使学生的语文综合能力真正得到提升。

新型冠状病毒肺炎对在校大学生心理影响及应对策略研究

目的了解重大疫情期间对在校大学生心理影响及应对策略,为疫情期间高校心理健康教育提供理论依据。方法应用一般资料问卷、传染病对在校大学生的心理影响及应对策略调查问卷对全国5107名在校大学生进行问卷调查。结果心理影响及应对策略总分为(120.19±22.24)分,条目均分为(2.45±0.45)分,且性别、年龄、年级、专业、生源地是影响在校大学生心理及应对策略的因素(P<0.01)。结论新型冠状病毒肺炎对在校大学生心理影响较大,且应对策略不足,需要加强在校大学生新型冠状病毒肺炎等传染病期间的心理健康教育。

AlOOH催化臭氧氧化降解愈创木酚的研究

以木素模型物愈创木酚(GL)模拟废水为目标物,采用拟薄水铝石(AlOOH)为催化臭氧氧化的催化剂,研究了催化剂及其投加量、臭氧进气量、初始溶液pH值等因素对200 mg/L愈创木酚溶液的降解效果和COD_(Cr)去除率的影响;通过液相图谱分析和添加羟基自由基捕获剂——叔丁醇(TBA)初步探讨了催化臭氧氧化的降解机理。结果表明,与单独臭氧氧化相比,催化臭氧氧化效果更佳;在臭氧质量浓度13.32mg/L、臭氧进气量0.51 L/min、初始溶液pH值5.4、催化剂投加量5 g/L的条件下,反应40 min后,愈创木酚(200 mg/L)降解率能达到100%,COD_(Cr)去除率能达到89.3%;叔丁醇(TBA)的添加可以证明催化臭氧氧化反应是臭氧与羟基自由基共同作用的结果。

心脏骤停患者院前心肺复苏护理策略的分析

目的探讨院前心脏骤停患者心肺复苏的成功因素及护理策略。方法回顾性分析2012年7月至2014年7月我院急诊科急救的院前心脏骤停患者106例,分析心肺复苏成功的相关因素。结果心肺复苏成功率为16.98%,心肺复苏的成功率与心肺复苏开始时间、电击复律、年龄、是否气管插管差异具有统计学意义(P<0.05),而与患者性别及肾上腺素使用量差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CPR开始时间是影响心肺复苏的重要因素之一,CPR开始越早,成功率越高。及早的识别恶性心律失常,实施电击复律,可以提高成功率,同时及时有效的气管插管是复苏成功的关键,年龄也是影响复苏成功的因素之一。

局部晚期结直肠癌手术方式的探讨

目的探讨局部晚期结直肠癌患者的手术方式。方法回顾性分析本院2006年1月至2016年12月收治的255例局部晚期结直肠癌患者的临床资料。将39例行联合脏器R0切除术的患者纳入联合脏器切除组,136例行姑息R1或R2切除术的患者纳入姑息性切除组,80例无法手术切除行单纯造瘘术或肠侧侧吻合术的患者纳入单纯造瘘组。比较不同手术方式组患者的手术时间、术中出血量、术中输血量、住院天数及术后并发症发生情况,并对三组患者进行生存分析。结果三组患者手术时间、术中出血量及术中输血量比较均有显著差异(P_均=0.001),住院天数和术后并发症三组间比较均无显著差异(P=0.120,P=0.654)。生存分析结果显示,联合脏器切除组、姑息性切除组及单纯造瘘组患者术后1年生存率分别为91.72%、81.46%及58.33%,术后3年生存率分别为67.97%、36.67%及33.50%。三组患者生存率比较差异具有显著性(P=0.0003)。结论联合脏器切除将是提高局部晚期结直肠癌患者术后生存率的重要手术方式。

L 1CAM在甲状腺乳头状癌组织及细胞中的表达及与临床病理特征的关系

目的:检测甲状腺乳头状癌组织及细胞株中L1CAM表达,探讨其与临床病理特征的相关性及意义。方法:选取手术切除甲状腺乳头状癌组织、对应的癌旁组织及正常甲状腺组织标本各32例,甲状腺癌细胞株及正常甲状腺细胞株。采用Western blot及qRT-PCR检测组织及细胞株中L1CAM的表达,观察其与肿瘤部位、直径、数目、分化程度、淋巴结转移及AJCC分期等临床病理参数的关系。结果:L1CAM蛋白及mRNA在甲状腺乳头状癌组织中表达高于癌旁甲状腺组织,在正常甲状腺组织无表达(P <0. 05);甲状腺乳头状癌组织中L1CAM蛋白水平与肿瘤直径、肿瘤数目、淋巴结转移、AJCC分期具有相关性(P均<0. 05),肿瘤直径大于1 cm、肿瘤多发、淋巴结转移及AJCC分期Ⅲ-Ⅳ的甲状腺癌组织中L1CAM表达量高; L1CAM蛋白及mRNA在BHT101、B-CPAP甲状腺癌细胞株中均有表达,在正常甲状腺上皮细胞NTHY-ORI 3-1无表达,在BHT101中高于其他细胞株(P <0. 05)。结论:L1CAM在甲状腺乳头状癌组织及细胞中表达上调,与甲状腺乳头状癌发展及转移恶性临床病理特征相关。