对中医“恐伤肾”研究的思考

“恐伤肾”作为近年来中医情志研究的热点问题之一,多采用动物实验开展。笔者针对目前研究中存在的问题,对“恐伤肾”的常见造模方法进行了梳理和分析,提出应综合冻结姿势、二便、生殖、生长发育等指标对“恐伤肾”模型进行评价,并依据传统中医理论、实验研究结果和临床报道,认为“恐伤肾”虽然对肾精、肾气、肾阳均有损伤,但对肾精的损伤最为突出,在对“恐伤肾”动物进行药物干预研究或惊恐所致疾病进行临床治疗时,应以补肾填精为主要方法。以期为“恐伤肾”研究的深入开展和临床上“恐伤肾”所致疾病的诊疗提供参考。

菟丝子对恐伤孕鼠子代学习记忆及海马m^(6)A修饰的影响

目的:观察菟丝子对恐伤孕鼠所产子代学习记忆能力及海马N6-甲基腺苷(m^(6)A)相关修饰酶和m^(6)A总水平的影响。方法:将45只孕鼠随机分为空白组、模型组和菟丝子组。在孕1 d~孕19 d,模型组和菟丝子组采用旁观电击法造模,菟丝子组5 g·kg^(-1)·d^(-1)菟丝子水煎剂灌胃,其余2组等量纯净水灌胃处理,所产仔鼠延续母代分组。仔鼠于21 d龄进行水迷宫实验观察行为学改变;采用透射电镜观察仔鼠海马神经元发育情况;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)、免疫组化法(IHC)分别检测仔鼠海马甲基转移酶样蛋白3(METTL3)、甲基转移酶样蛋白14(METTL14)、Wilms瘤1相关蛋白(WTAP)、脂肪量和肥胖相关蛋白(FTO)、Alk B同源蛋白5(ALKBH5)mRNA及蛋白表达水平;采用高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)检测仔鼠海马m^(6)A总含量。结果:与空白组比较,模型组仔鼠平均潜伏期延长,进入目标象限次数、目标象限停留时间及穿越平台次数均显著减少(P<0.01);海马CA1、CA3神经元结构损伤严重,线粒体肿胀,内质网扩张,部分突触结构模糊,数量较少;METTL3、METTL14、FTO、ALKBH5表达水平下降,m^(6)A总水平明显下降(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,菟丝子组仔鼠平均潜伏期缩短,进入目标象限次数、目标象限停留时间及穿越平台次数均显著增加(P<0.01);海马CA1、CA3神经元损伤程度减轻,线粒体、内质网结构较好,突触结构清晰、完整,分布密集;METTL3、METTL14、FTO表达水平上升,m^(6)A总水平明显上升(P<0.05,P<0.01)。结论:菟丝子能够有效改善孕期恐伤肾所致的子代学习记忆能力下降,保护海马神经元,上调海马METTL3、METTL14、FTO表达水平及m^(6)A总水平。