脂多糖对肝脏Kupffer细胞增殖和分泌功能及超微结构的影响

目的探讨脂多糖(LPS)对肝脏Kupffer细胞增殖和分泌功能及超微结构的影响。方法将小鼠原代Kupffer细胞培养扩增后,随机分为LPS组和正常对照组。2组细胞培养24 h后,LPS组加入LPS,继续培养6 h,甲基噻唑基四唑法(MTT)测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化,透射电镜观察细胞超微结构;并收集细胞上清液,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)水平。结果 LPS组吸光度值高于正常对照组,G0/G1期细胞分布低于正常对照组,S+G2/M期细胞分布高于正常对照组(P<0.01)。LPS组细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6水平高于正常对照组(P<0.01)。LPS组Kupffer细胞内可见大量空泡及自噬体形成,正常对照组个别细胞胞质内仅见少量空泡。结论 LPS能激活肝脏Kupffer细胞的增殖和分泌功能,并可引发肝脏Kupffer细胞自噬和超微结构改变。

老年胃十二指肠溃疡急性穿孔92例诊治分析

目的介绍老年人胃十二指肠溃疡急性穿孔的临床特点及治疗方法。方法对2008—2012年间该科收治的92例老年胃十二指肠溃疡急性穿孔患者进行分析,其中胃溃疡68例,十二指肠溃疡24例。结果治愈64例(69.6%),死亡8例(8.70%)。术后并发症20例(21.7%)。各类症状较治疗前有明显改善(P<0.05)。结论老年人胃十二指肠溃疡急性穿孔患者具有临床症状与体征不典型,容易误诊漏诊、合并症及并发症多等特点。只要围手术期准备充分,麻醉方式和术式选择得当,术中、术后观察严密,并给予合理的术后护理和有效治疗,老年患者也能对手术较好地耐受。

脂多糖对高糖环境下肝脏Kupffer细胞增殖和分泌及超微结构的影响

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对高糖环境下肝脏枯否细胞(Kupffer cells,KCs)增殖和分泌功能及超微结构的影响.方法将小鼠原代KCs培养扩增后随机分为4组:高糖组[(high glucose,HG),25.0 mmol/L D-葡萄糖],正常对照组[(normal control,CON),11.1 mmol/L D-葡萄糖],LPS+高糖组[(LPS+high glucose,LPS-HG),25.0 mmol/L D-葡萄糖],LPS+正常对照组[(LPS normal+control,LPS-CON),11.1 mmol/L D-葡萄糖].培养24 h后,LPS-HG和LPS-CON组分别加入等量LPS,继续培养6 h后,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Luminex xMAP技术检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6水平,透射电镜观察KCs细胞超微结构.结果MTT比色法测定结果显示,KCs经LPS干预6 h后吸光度(absorbance,OD)测值显著升高,HG和LPS-HG组的OD测值明显低于相对照的CON组和LPS-CON组(P<0.05).流式细胞仪技术检测结果显示,KCs经LPS干预6 h后G0/G1期细胞分布明显下降,S期+G2/M期细胞分布明显升高(P<0.01).HG和LPS-HG组的G0/G1期细胞分布显著高于相对照的CON和LPS-CON组,HG和LPS-HG组的S期+G2/M期细胞分布显著低于相对照的CON和LPSCON组(P<0.01);Luminex xMAP技术结果显示,KCs经LPS干预6 h后TNF-α、IL-1β、IL-6水明显升高,TNF-α和IL-1β的变化更为显著.电镜观察KCs结果显示,HG组可见自噬体形成,CON组个别细胞胞质内仅见少量空泡;LPS-HG组可见大量空泡及自噬体形成,LPS-CON组可见空泡形成而未见自噬体.结论LPS能激活并强化高糖环境中肝脏KCs的增殖和分泌功能,高糖环境和LPS均可引发肝脏KCs自噬等超微结构改变.

胸苷激酶-1在直肠癌患者血清中的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨细胞质胸苷激酶-1(TK-1)在直肠癌患者血清中表达,分析其表达水平与临床病理特征之间的关系。方法回顾性分析了2008年12月—2012年12月在该院行手术治疗的60例直肠癌患者的临床资料,选择30例健康查体者为正常对照组,采用化学发光结合斑点杂交技术检测血清TK-1水平。结果直肠癌组、正常对照组血清TK-1水平分别为(2.96±0.99)pmol·L-1、(0.92±0.31)pmol·L-1,直肠癌组血清TK-1水平显示高于正常对照组,相比较差异有显著性(t=15.294,P<0.05)。肿瘤低分化组血清TK-1水平显著高于肿瘤高中分组(t=8.412,P<0.05),肿瘤≥6 cm组血清TK-1水平显著高于肿瘤<6 cm组(t=9.865,P<0.05),TNM分期Ⅲ～Ⅳ期组血清TK-1水平显著高于Ⅰ～Ⅱ期组(t=11.356,P<0.05),发生淋巴结转移组血清TK-1水平显著高于淋巴结未转移组(t=9.842,P<0.05)。结论 TK-1在直肠癌患者血清中呈高表达,血清TK-1的表达对直肠癌的诊断、肿瘤的侵袭和转移评估有一定临床意义。

褐藻糖胶对^(60)Co-γ射线照射引起的人外周血淋巴细胞微核率的影响

目的本研究通过60Co-γ射线体外照射人外周血淋巴细胞观察微核率,研究褐藻糖胶的辐射防护作用。方法抽取4名从未接触过有害化学物质的健康男性志愿者的静脉血,按常规微量血培养方法体外培养外周血淋巴细胞以及微核细胞。实验分为对照组、照射组及加药组(照射前1 h、照射后1 h加入20、40、80、160、320μg/ml褐藻糖胶)。观察3组淋巴细胞的微核变化。结果 2 Gy照射剂量下,照射组和对照组相比,微核率有显著性差异;照射前1 h、照射后1 h加入20、40μg/ml褐藻糖胶对淋巴细胞的微核率无显著性差异,加入80、160、320μg/ml褐藻糖胶均可显著降低淋巴细胞的微核率。结论褐藻糖胶对60Co-γ射线的辐射有防护作用,且该作用与给药剂量有关。

高糖环境对小鼠肝脏枯否细胞增殖及分泌功能的影响

目的探讨高糖环境下枯否细胞(kupffer cells,KCs)增殖及分泌功能的变化。方法将小鼠原代KCs培养扩增后,参照文献随机分为正常对照组(11.1 mmol/L D-葡萄糖)、低糖组(5.6 mmol/L D-葡萄糖)、中糖组(12.5 mmol/L D-葡萄糖)和高糖组(25.0 mmol/L D-葡萄糖),培养24、48和72 h后,血球计数板进行细胞计数,流式细胞仪检测细胞周期,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖,并收集细胞上清液,应用Luminex x MAP技术检测肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-6水平。结果培养24、48和72 h时,高糖组和低糖组KCs扩增数量、OD值明显低于对照组和中糖组(P<0.01,P<0.05)。培养24 h时高糖组和低糖组G0/G1期明显高于对照组和中糖组,S期和G2/M期明显低于对照组和中糖组(P<0.01)。培养24、48和72 h时高糖组TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显低于对照组(P<0.05)。结论高糖环境下KCs活性明显下降,增殖及分泌功能受到抑制。

RCCS模拟微重力对人角化细胞代谢组学的影响

目的探讨旋转式细胞培养系统(RCCS)模拟微重力对人永生化角质形成细胞系(HaCaT)细胞代谢组学的影响。方法应用RCCS建立模拟微重力细胞培养系统,体外培养HaCaT细胞,随机分为模拟微重力组(SMG组)和正常重力组(NG组),细胞培养1、2、3 d后收集样本,进行LC/MS代谢组学分析。结合正交偏最小二乘法(O-PLS-DA)和两样本独立t检验寻找两组细胞的差异代谢物,将差异代谢物输入KEGG数据库,进行代谢通路的构建与功能分析。结果 LC/MS代谢组学分析结果显示,与NG组比较,SMG组HaCaT细胞在RCCS模拟微重力环境中培养1 d后共有74种差异代谢物,其中16种表达上调,58种表达下调;2 d后共有89种差异代谢物,其中15种表达上调,74种表达下调;3 d后共有100种差异代谢物,其中23种表达上调,77种表达下调;以表达有统计学差异(VIP>1且P<0.05)的49种代谢物作为目标代谢标记物,其中鞘氨醇、谷氨酸、二十二碳五烯酸下调,脱水山梨糖醇等物质表达上调。KEGG分析显示,其涉及的代谢通路有氨基酸代谢、脂质代谢、细胞增殖和凋亡、物质转运、分解代谢、信号转导等。结论 RCCS模拟微重力环境可对角化细胞代谢产生明显影响,主要涉及鞘脂类、谷氨酸等代谢产物及相关信号通路。

基于生物信息学分析寻找胰腺癌新的诊断和治疗靶点

胰腺癌作为一种消化系统高度恶性的肿瘤性疾病,其发生和进展的分子机制仍不确定。为寻找与胰腺癌发生和进展有关的新的有效治疗靶点和潜在的生物标志物。利用GEO数据库中的GEO2R在线工具对胰腺癌组织和正常对照组织的基因表达进行差异分析并对差异表达基因(DEGs)进行GO功能和KEGG通路富集分析。然后通过GEPIA数据库中胰腺癌的转录数据对候选基因的表达进行验证。Kaplan-Meier法分析各候选基因的预后价值。利用starBase数据库中的7个预测程序对候选基因上游潜在的miRNAs进行预测。此外,还使用miRNet和starBase预测了hsa-miR-20b-5p的上游lncRNAs并利用lncATLAS数据库对潜在的lncRNAs进行亚细胞定位。在本研究中,我们发现胰腺癌组织中LAMA3基因的转录水平明显高于健康对照组织。同时,LAMA3的过表达与胰腺癌患者较差的临床预后相关。随后,预测了21个可能靶向LAMA3的潜在上游miRNAs。在预测到的miRNA-mRNA调控轴中,has-miR-20b-5p-LAMA3轴在胰腺癌的发生和进展中具有较高的潜力。进一步研究发现,FGD5-AS1潜在的抑制has-miR-20b-5p-LAMA3调控轴的作用可能能够在胰腺癌中作为诊断和治疗的有效靶点。FGD5-AS1-has-miR-20b-5p-LAMA3调控网络在胰腺癌发生和发展中的具有关键作用,可作为胰腺癌临床诊断和治疗的潜在靶点和生物标志物。

提高对胆石性肠梗阻的认识

胆石性肠梗阻是一种少见的肠梗阻,也是胆石病的一种严重并发症.该症的发病率上升与结石病发病率不断攀升、社会老龄化以及诊断技术水平提高等因素有关.该病缺乏典型的临床表现,多数情况下病情复杂,容易延误诊疗.本文复习相关文献,重点阐述了胆石性肠梗阻的发病机制、延误因素和临床诊治策略,强调在临床上应充分认识胆石性肠梗阻的特殊性和复杂性,并在遵从基本原则的基础上进行合理化个案化诊疗,以改善胆石性肠梗阻的预后.

模拟微重力环境下人SK-BR-3乳腺癌细胞生物学行为变化特点

目的:探讨旋转细胞培养系统(RCCS)模拟失重环境对人SK-BR-3乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:体外培养人SK-BR-3乳腺癌细胞,将实验细胞随机分为模拟微重力组(SMG)和正常重力对照组(NG)。应用RCCS模拟微重力环境。培养第3 d收取SMG组与NG组细胞进行检测:CCK-8法检测吸光度值,比较两组细胞增殖能力;流式细胞仪技术检测细胞周期和细胞凋亡变化;透射电镜观察细胞超微结构变化。结果:CCK-8检测结果显示,SMG组乳腺癌细胞的吸光值显著低于NG组(0.522±0.060 vs 1.327±0.090,P<0.001)。流式细胞仪检测发现, SMG和NG组乳腺癌细胞的凋亡细胞率分别为(33.233±5.537)%和(5.500±1.572)%,差异有统计学意义(P=0.001);SMG组人SK-BR-3乳腺癌细胞G0/G1期、S期和G2/M期比例分别为(52.734±3.264)%、(36.864±2.918)%和(10.402±0.881)%,与NG组细胞G0/G1期、S期和G2/M期的对应比例(32.534±1.741)%、(53.924±3.215)%和(13.542±2.451)%相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。透射电镜结果显示,与NG组比较,SMG组人SK-BR-3乳腺癌细胞经RCCS模拟失重环境培养3 d后,线粒体水肿,次级溶酶体增多,细胞超微结构发生明显改变。结论:RCCS模拟失重环境下人SK-BR-3乳腺癌细胞凋亡增加,增殖受抑制,细胞周期和超微结构发生明显改变。

糖尿病患者细菌性肝脓肿的误诊原因

目的探讨糖尿病患者合并细菌性肝脓肿（PHADM）易误诊的原因，提高诊断正确率。方法回顾性分析2005年1月至2015年5月我院收治的86例PHADM患者的诊断过程，包括首诊主诉症状、并发症及合并症、实验室检查、首诊诊断、误诊结果、发现肝脓肿病灶的检查手段以及最终明确诊断的方式等。结果（1）86例PHADM患者中，首诊时主诉提及右上腹不适／疼痛的只有42例（48．8％），其余44例（51．2％）患者首诊主诉症状均为右上腹以外的其他症状，且呈现多样化。（2）PHADM患者常合并多系统并发症及合并症。（3）PHADM患者的实验室检查结果不具特异性。（4）PHADM患者首诊正确率只有57．0％，易被误诊为上呼吸道感染及胃炎等。（5）86例患者中，64例（74．4％）是通过超声发现肝脓肿病灶。结论PHADM易误诊的主要原因是首诊主诉症状多样化，且多为右上腹以外的其他症状。增强对PHADM的认识，对糖尿病患者发热时常规行肝脏超声检查是提高正确诊断率的重要措施。

模拟失重环境下左氧氟沙星对大鼠肺炎感染的治疗作用研究

目的:探讨模拟失重环境下左氧氟沙星对大肠杆菌感染大鼠肺炎的体内治疗效果。方法:36只大鼠随机分为6组,正常重力对照组、正常重力注菌组、正常重力注菌药物治疗组、模拟失重对照组、模拟失重注菌组、模拟失重注菌药物治疗组,采用Morey’s尾吊模型制备模拟失重大鼠模型,注菌组经支气管注射大肠肝菌ATCC25922菌悬液,建立大鼠肺炎模型;接种细菌后24 h,药物治疗组和其他组分别灌胃给予左氧氟沙星和生理盐水,药物治疗48 h后测定大鼠外周血白细胞总数、中性粒细胞数、血清细胞炎症因子IL-6的含量和肺组织匀浆菌落计数,观察大鼠肺组织病理形态学。结果:在正常重力和模拟失重环境下与注菌组比较,药物治疗组治疗48 h后的白细胞数量、中性粒细胞数量、IL-6的含量和肺组织匀浆菌落计数差异均有显著性降低(P<0.05),药物可减轻注菌引起的肺组织病理损伤程度,模拟失重药物治疗组的肺组织匀浆菌落计数显著高于正常重力药物治疗组(P<0.05),肺组织病理损伤程度较重。结论:模拟失重环境下左氧氧沙星治疗感染性肺炎的疗效降低。

模拟微重力对小鼠肝kupffer细胞增殖及相关基因表达的影响

目的探讨旋转式细胞组织培养系统（RCCS）模拟微重力对小鼠肝Kupffer细胞增殖及相关基因表达的影响。方法应用RCCS建立模拟微重力细胞培养系统。将小鼠肝原代Kupffer细胞随机分为模拟微重力组（SMG）和正常重力组（NG）。分别于培养第3、5、7天收获细胞。采用血球计数板进行细胞计数，流式细胞仪检测细胞周期，实时荧光定量PCR测定PCNA、Ki．67、ERK、CDK2以及CyclinB基因表达水平。结果培养第3天时，SMG组细胞计数明显低于NG组（2．6±0．1比3．1±0．2，P〈0．05），培养第5、7天SMG组明显高于NG组（6．9±0．4比5．9±0．2，P〈0．05；8．4±0．3比6．5±0．3，P〈0．05）。流式细胞仪检测结果显示，培养第3天SMG组G0／G1期比例明显高于NG组（78．1±0．2比59．7±1．2，P〈0．05），S期、G2／M期比例明显低于NG组（12．0±0．4比27．6±0．9，P〈0．05；9．9±0．3比12．7±0．4，P〈0．05）；培养第5天，SMG组G0／G1期比例低于NG组（69．5±1．5比74．8±0．7，P〈0．05），S期、G2／M期比例高于NG组（21．2±1．5比17．3±0．4，P〈0．05；9．3±0．4比7．9±0．4，P〈0．05）；培养第7天，SMG组G0／G1期比例依然低于NG组（73．9±1．9比81．7±1．3，P〈0．05），S期、G2／M期比例亦高于NG组（18．9±1．9比12．1±0．8，P〈0．05；7．3±0．2比6．2±0．6，P〈0．05）。实时荧光定量PCR结果显示，与NG组相比，SMG组PCNA、Ki-67、ERK、CDK2以及CyclinB基因表达在培养3天时均下调，第5和7天呈现明显上调趋势。结论在RCCS模拟失重应激损伤期，小鼠肝Kupffer细胞增殖功能受到抑制，以后Kupffer细胞增殖能力在相关基因的参与调节下得以恢复并被激活强化。

模拟微重力对大鼠甲状腺滤泡上皮细胞生长特性的影响

建立模拟微重力的细胞培养系统，将大鼠甲状腺滤泡上皮细胞（FRTL-5）分为模拟微重力组（SMG）和正常重力对照组（NG），经6、12、24、36 h培养后收集2组细胞，利用MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪技术检测细胞周期，激光共聚焦显微镜和荧光素FITC标记技术观察细胞微丝结构形态变化。MTT检测结果显示，与NG组相比，SMG组FRTL-5细胞经6、12、24、36 h培养后，各时相细胞增殖均明显抑制（P〈0.05），其中24 h最为明显。流式细胞仪检测结果显示，与NG组相比，FRTL-5细胞微重力培养6、12、24、36 h后G1期细胞比例显著增高（P〈0.05）；除6 h外，S期细胞比例明显降低；而各时相的G2/M期细胞比例表现为模拟失重早期（6～12 h）降低，其中12 h出现低谷值，24 h一过性显著增高。激光共聚焦显微镜观察发现模拟微重力培养36 h后，细胞微丝骨架局部解聚，张力纤维减少，结构和排列紊乱，细胞伪足少见，细胞形状呈不规则。

环状RNA相关功能研究进展

环状RNA或称环形RNA(circular RNA,circRNA)是存在于生物体内的一类特殊非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)分子,该分子最早由Sanger等[1]于1976年发现。最初被认是错误剪接、遗传意外、甚或实验人为因素等所致的一种副产品,并未引起学术界关注[2-3]。后续研究发现,circRNA相对稳定,广泛存在于真核细胞生物中。

模拟微重力环境下人HaCaT细胞热损伤效应研究

目的探讨模拟微重力环境下人HaCaT细胞的热损伤效应。方法取人HaCaT细胞,采用随机数字表法分为模拟微重力热损伤(SMGTI)组、正常重力热损伤(NGTI)组和正常重力假伤(NGFI)组。NGFI组和NGTI组细胞于培养瓶中常规培养,SMGTI组细胞应用旋转细胞培养系统模拟微重力培养。将SMGTI组和NGTI组细胞置于45℃热水中10 min制作热损伤模型,NGFI组细胞置于37℃温水中10 min致假伤。伤后12 h,倒置相差电子显微镜下观察3组细胞形态。伤后2、6、12 h,取3组单细胞悬液,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量反转录PCR检测热休克蛋白70(HSP70)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)mRNA表达量,实验重复3次。伤后2、6、12 h,取3组细胞培养上清液,酶联免疫吸附测定法检测肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)浓度,实验重复3次。各组各时间点样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD检验、Kruskal-Wallis H检验和Mann-Whitney U检验。结果(1)伤后12 h,NGFI组细胞形态规则,细胞间排列规则,未见细胞碎片。NGTI组细胞形态较规则,细胞碎片较少,细胞间排列较NGFI组紧密。SMGTI组不规则形态细胞较多,大小不一,可见死亡细胞碎片。(2)NGTI组伤后2 h G1期细胞百分比较NGFI组和SMGTI组明显升高(P<0.05),伤后6、12 h较NGFI组和SMGTI组明显降低(P<0.05)。NGTI组伤后2 h的G2/M期细胞百分比较SMGTI组明显降低(P<0.05),NGTI组伤后6、12 h G2/M期细胞百分比较NGFI组和SMGTI组明显升高(P<0.05)。NGTI组伤后2、6、12 h S期细胞百分比较SMGTI组明显升高(P<0.05),NGTI组伤后2、6 h S期细胞百分比较NGFI组明显降低(P<0.05)。(3)伤后2、6 h,NGTI组细胞HSP70 mRNA表达量为2.50±0.30、3.99±0.35,较NGFI组明显升高(1.14±0.15、0.82±0.27,P<0.05),较SMGTI组明显升高(1.17±0.53、1.65±0.59,P<0.05)。伤后2、6、12 h,SMGTI组细胞MMP-9 mRNA表达量较NGTI组明显升高(Z=-2.319、-2.882、-2.908,P<0.05)。伤后各时间点,NGTI组细胞caspase-3 mRNA表达量与NGFI组、SMGTI组相近(P>0.05)。(4)伤后2、6、12 h,NGTI组细胞培养上清液中HB-EGF浓度较NGFI组明显降低(P<0.01)。伤后2、6 h,SMGTI组细胞培养上清液中HB-EGF浓度较NGTI组明显升高(P<0.01)。结论模拟微重力条件下热损伤人HaCaT细胞的增殖、分泌功能以及创伤修复相关蛋白表达呈现复杂、多元的变化,这为进一步研究失重条件下损伤修复提供了理论基础。

门静脉海绵样变致门静脉高压性胆病1例

门静脉高压性胆病(PHB)是一种由肝外门静脉阻塞引起的胆道继发性改变,临床罕见;患者大多无明显自觉表现,少数病史较长者可出现腹痛、发热、黄疸等症状。目前对其治疗方案尚无统一意见,有症状的患者往往需要接受综合治疗。该文报告了1例门静脉海绵样变(PVCT)发展为PHB的病例。患者辗转多家医院就诊,因PVCT不宜手术,多次内镜下胆管支架植入及更换,症状反复,最终行腹腔镜下胆囊切除、小切口辅助胆总管切开取石、胆肠Roux-en-Y吻合术,术后黄疸、腹胀、发热等症状得到有效缓解。