基于胆汁酸-肠道菌群对话机制探讨非酒精性脂肪性肝病肝郁脾虚病机特点

胆汁酸与肠道菌群关系失衡与非酒精性脂肪性肝病密切相关。基于中医理论及临床研究,发现“肝郁脾虚”是非酒精脂性肪性肝病发病过程中的关键病机。结合现代医学及分子生物学研究,认为肠道菌群紊乱与中医“脾虚”密切相关,胆汁酸分泌异常为“肝郁”的微观体现,而且在非酒精性脂肪性肝病发展进程中,“胆汁酸与肠道菌群失衡”与中医“肝郁脾虚”的基本病机相契合。因此,从“胆汁酸与肠道菌群失衡”角度探讨非酒精性脂肪性肝病“肝郁脾虚”的现代生物学内涵,研究“肝郁脾虚”的病机实质及其代表方药,有望为非酒精性脂肪性肝病的防治提供更有效的方法和策略。

疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织TNF-α、IL-6及IL-1的影响

目的:观察疏肝健脾方药对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及白细胞介素1(IL-1)水平的影响,探讨其抗NASH的作用机制。方法:采用高脂饲料喂养复制NASH大鼠实验模型,同时各药物组分别灌服疏肝方(柴胡疏肝散)、健脾方(参苓白术散)和综合方(柴胡疏肝散和参苓白术散的合方)的不同剂量进行干预,16周后处死大鼠,用全自动生化分析仪检测血脂及肝脂的浓度;常规HE染色和油红O染色观察肝组织病理变化;用酶联免疫法(ELISA)检测肝组织匀浆中炎症细胞因子TNF-α、IL-6及IL-1的水平。结果:与正常组相比,模型组大鼠肝细胞脂肪变性明显,血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)和肝组织TC、甘油三酯(TG)及肝组织中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1的浓度显著升高(P<0.01);各药物组大鼠肝组织TNF-α、IL-6及IL-1的水平与模型组相比有均有不同程度下降,以综合方高剂量组和健脾方高剂量组下降最为明显(P<0.01、P<0.05),脂质检测以综合方高剂量组的血清TG及肝组织TC、TG下降最为明显(P<0.01)。结论:疏肝健脾方药有抗大鼠NASH的作用,其机制可能与其抑制肝组织炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1的表达及降低脂质浓度有关。

疏肝健脾方药对NAFLD大鼠肝细胞SREBP-1c、SCD-1 mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝细胞SREBP-1c、SCD-1 mRNA及蛋白表达的影响,探讨其防治NAFLD的可能机制。方法:雄性SD大鼠75只随机分为正常对照组、模型组、疏肝组(柴胡疏肝散9.6 g/kg)、健脾组(参苓白术散30 g/kg)、合方组(柴胡疏肝散和参苓白术散合方39.6 g/kg),每组15只。采用高脂饲料喂养复制大鼠NAFLD模型。8 w后每组随机选取9只检测肝功及肝组织TC、TG,观察肝组织病理形态改变;同时每组取6只采用离体循环灌注Ⅳ型胶原酶法提取肝细胞,Q-PCR及Western Blot法检测肝细胞SREBP-1c、SCD-1 mRNA及蛋白表达。结果:与模型组比较,各药物干预组肝细胞SREBP-1c、SCD-1 mRNA及蛋白表达水平均有不同程度的下调(P<0.05或P<0.01),同时肝脂及病理学改变也较模型组有不同程度改善,以疏肝组作用最为显著(P<0.05)。各药物干预组组间比较,疏肝组大鼠肝细胞SREBP-1c、SCD-1 mRNA表达水平显著低于健脾组(P<0.05),而蛋白表达比较无统计学意义。结论:疏肝健脾方药可能通过抑制肝细胞SREBP-1c/SCD-1信号通路的激活,进而下调肝脏TC、TG合成,发挥防治NAFLD的作用。SREBP-1c、SCD-1 mRNA及蛋白可能是疏肝健脾方药抗NAFLD的有效作用靶点。

疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织LXRα mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织LXRαmRNA及蛋白表达的影响。方法选用SD大鼠55只,随机分为正常组、模型组、疏肝组(灌服3.2 g.kg-1·d-1剂量的柴胡疏肝散)、健脾组(灌服10.0 g.kg-1·d-1剂量的参苓白术散)、综合组(灌服11.9 g.kg-1·d-1剂量的柴胡疏肝散和参苓白术散合方),模型组15只,其余各组10只。采用灌饲高脂肪乳剂(10 ml/kg)的方法复制大鼠NAFLD实验动物模型,给药8 w后处死动物,腹主动脉采血,用全自动生化分析仪检测血脂及肝功;常规HE染色观察肝组织病理变化;RT-PCR方法检测肝组织LXRαmRNA的表达;免疫组织化学方法检测肝组织LXRα蛋白的表达。结果与正常组相比,模型组大鼠肝细胞脂肪变性明显,血脂及肝功均有不同程度的升高(P<0.05,P<0.01),大鼠肝组织LXRαmRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01);各给药组血脂及肝功和肝组织LXRαmR-NA及蛋白的表达均较模型组显著降低(P<0.05,P<0.01),其中以健脾组下降最为明显。结论疏肝健脾方药对高脂饮食诱导的大鼠NAFLD有较好的治疗作用,其机制可能与其下调肝脏LXRα的表达有关。

NLRP6在非酒精性脂肪性肝病发病中的作用及中医药防治策略

非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）全球发病形势严峻,临床对其防治仍然缺乏有效手段。目前,NAFLD的发病机制尚未完全清楚,普遍认为与胰岛素抵抗（insulin resistance）、脂质代谢紊乱、氧化应激、脂质过氧化、炎症细胞因子等因素密切相关[1]。从中医病机看,肝脾两脏关系密切,肝脾同病在慢性肝病中极为常见。现代研究表明NAFLD的发生发展与肝脾两脏的功能失调有关,肝郁脾虚是NAFLD发病的基本病机[2]。

疏肝健脾方药对NASH大鼠Kupffer细胞NF-κB p65和IKKβ mRNA及蛋白表达的影响

目的:探讨疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠Kupffer细胞核因子κB(NF-κB)p65和IκB激酶β(IKKβ)mRNA及蛋白表达的影响。方法:采用高脂饲料喂养复制大鼠NASH模型,在施以造模因素的同时分别灌服疏肝方(柴胡疏肝散)、健脾方(参苓白术散)和综合方(柴胡疏肝散和参苓白术散的合方)的高、低剂量进行干预,16周后分离Kupffer细胞,Typan blue染色和流式细胞术(FCM)分别对Kupffer细胞进行活性和纯度鉴定;实时定量PCR法检测Kupffer细胞IKKβ和NF-κB p65 mRNA的表达水平;Western blotting法检测Kupffer细胞IKKβ、p-IKKβ和NF-κB p65蛋白水平。结果:每只大鼠获得纯化的Kupffer细胞(1.5～2.0)×107,Typan blue染色显示这些细胞活力均在95%以上,FCM检测纯度均在90%以上;与正常组比较,模型组Kupffer细胞IKKβmR-NA及蛋白的表达水平均明显升高(P<0 01);与模型组比较,高剂量综合方、健脾方和疏肝方组IKKβmRNA的表达水平下调明显(P<0.01或P<0.05);IKKβ及磷酸化蛋白的表达水平以高剂量健脾方组下降最为显著(P<0.01或P<0.05);与正常组比较,模型组Kupffer细胞NF-κB p65 mRNA及蛋白的表达水平均明显升高(P<0.01),与模型组比较,NF-κB p65 mRNA的表达水平以综合方组及高剂量健脾方组下调明显(P<0.05),NF-κBp65蛋白的表达水平以高剂量健脾方组下降最为显著(P<0.01)。结论:Kupffer细胞IKKβ、NF-κB p65 mRNA及IKKβ、p-IKKβ、NF-κB p65蛋白的高表达可能参与NASH的发病,抑制这些信号分子的表达可能是疏肝健脾方药抗NASH的重要机制之一。

基于NF-κB通路探讨疏肝健脾含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞、Kupffer细胞炎症损伤保护作用机制研究

目的基于核转录因子kappa B（nuclear transcription factor-kappa B,NF-κB）信号通路探讨脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）刺激大鼠肝细胞及Kupffer细胞炎症损伤以及疏肝健脾含药血清的保护作用。方法通过体外培养以及免疫荧光鉴定SD大鼠肝细胞及Kupffer细胞,利用LPS刺激大鼠肝细胞及Kupffer细胞产生炎症反应,酶联免疫法检测肝细胞及Kupffer细胞培养上清液中白介素-1（interleukin-1,IL-1）、人血清淀粉样蛋白（serum amyloid A,SSA）的表达,Western blot法检测大鼠肝细胞及Kupffer细胞NF-κB通路相关蛋白的表达。结果每只大鼠通过纯化后获得肝细胞数量1.5×108~2.0×108个,Kupffer细胞数量0.5×107~1.0×107个,Typan blue染色测定肝细胞及Kupffer细胞活力均可达到95%以上。LPS组肝细胞及Kupffer细胞较空白血清组IL-1、SSA水平均有显著升高（P〈0.01）。而与LPS组比较,药物干预组可显著降低（P〈0.01）。肝细胞、Kupffer细胞的蛋白表明,与空白血清组比较,LPS组肝细胞及Kupffer细胞NF-κB、IκB及磷酸化IKKβ蛋白表达均有显著升高（P〈0.01）;与LPS组比较,疏肝健脾方药含药血清能显著下调肝细胞IκB及p-IKKβ蛋白的蛋白表达水平（P〈0.01）,但NF-κB蛋白表达水平无显著差异（P〉0.05）,疏肝健脾含药血清能下调Kupffer细胞NF-κB、IκB及p-IKKβ蛋白表达（P〈0.01）。结论疏肝健脾含药血清能够对LPS刺激大鼠肝细胞、Kupffer细胞炎症损伤产生保护作用,其机制可能与NF-κB信号通路相关。

疏肝健脾方对NASH大鼠肝组织IKKβmRNA和蛋白表达的影响

目的:探讨疏肝健脾方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织核因子κB(NF-κB)抑制蛋白激酶β(IKKβ)mRNA和蛋白表达的影响。方法:采用高脂饲料喂养建立NASH大鼠实验模型,在施以造模因素的同时各药物干预组大鼠分别灌服疏肝方(柴胡疏肝散)、健脾方(参苓白术散)和综合方(柴胡疏肝散和参苓白术散的合方)的高、低剂量进行干预,16周后各组大鼠腹主动脉采血,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及肝组织TC、TG的含量;ELISA检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及白细胞介素1(IL-1)的水平;HE染色观察肝组织病理变化;实时荧光定量RT-PCR检测肝组织IKKβmRNA的表达水平;Western blotting检测肝组织IKKβ蛋白磷酸化水平的变化。结果:肝组织病理染色提示大鼠NASH造模成功,与正常组比较,模型组大鼠血清TC、LDL-C、肝组织TC、TG及炎症细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6水平均显著升高(P<0.01,P<0.05),肝组织IKKβmRNA及其磷酸化蛋白的表达水平均明显升高(P<0.01)。与模型组相比,肝组织TC、TG含量及血清TNF-α的含量以综合方高、低剂量组、健脾方高剂量组及疏肝方高剂量组下降显著(P<0.01,P<0.05);IL-1和IL-6含量均以综合方高剂量组降低显著(P<0.05),IKKβmRNA的表达水平以综合方高组及健脾方高组下调明显(P<0.05),磷酸化IKKβ蛋白的表达水平以健脾方高剂量组及综合方高、低剂量组下降最为显著(P<0.01,P<0.05)。结论:血清炎症细胞因子TNF-α、IL-1和IL-6水平的显著升高、肝组织IKKβmRNA及其磷酸化蛋白的高表达可能参与NASH的发病。降低相关炎症细胞因子的含量、抑制IKKβmRNA及蛋白磷酸化可能是疏肝健脾方抗NASH的重要机制之一。

黄连素配合高脂饮食控制对NAFLD大鼠肝组织PPARα mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察黄连素对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator activated receptor alpha,PPARα)mRNA和蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法:66只雄性SD大鼠随机分为高脂饮食组56只和正常对照组10只。12 w时,从高脂饮食组中随机抽取6只进行肝脏病理切片,证实造模成功后,将造模组大鼠随机分为5组:黄连素高剂量组、黄连素低剂量组、东宝甘泰组、模型组、自然恢复组。除模型组继续给予高脂饲料外,其余各组均以基础饲料喂养。同时各治疗组给予相应药物灌胃,其余各组灌胃相应剂量蒸馏水。8 w后,所有大鼠腹主动脉取血及肝组织,全自动生化分析仪检测肝脂、血脂及肝功能;光镜观察肝组织病理形态变化;RT-PCR方法检测肝组织PPARαmRNA表达;免疫组织化学方法检测肝组织PPARα蛋白表达。结果:与模型组比较,药物治疗各组及自然恢复组肝脏脂变程度明显减轻;血脂、肝脂及肝功能指数显著降低(P<0.01),肝组织PPARαmRNA和蛋白表达均有不同程度的上调(P<0.05),尤以黄连素高剂量组最明显。结论:黄连素配合高脂饮食控制可显著促进肝组织PPARαmRNA及蛋白的表达,这可能是其防治NAFLD的重要机制之一。

疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织核因子-κB mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织核因子(NF)-κB mRNA及蛋白表达的影响。方法采用高脂饲料喂养复制NASH大鼠实验模型,施以造模因素的同时,各用药组大鼠分别灌服疏肝方、健脾方和疏肝健脾合方的高、低剂量进行干预。16 w后,各组大鼠以3%戊巴比妥钠腹腔麻醉,腹主动脉采血,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,肝组织TC、TG含量;HE染色和油红O染色观察肝组织病理变化;实时定量PCR法检测肝组织NF-κB mRNA表达水平;Western印迹法检测肝组织NF-κB蛋白表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠肝细胞脂肪变性明显,血脂及肝脂均有不同程度的升高(P<0.05,P<0.01),大鼠肝组织NF-κB mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组相比,各用药组血脂和肝组织NF-κB mRNA及蛋白的表达均较模型组显著降低(P<0.05,P<0.01),尤以综合方高剂量及健脾高剂量作用最为显著。结论疏肝健脾方药对高脂饮食诱导的大鼠NASH有较好的防治作用,其机制可能与其下调肝脏NF-κB mRNA及蛋白的表达有关。

疏肝健脾方药对NASH大鼠心脏舒张功能及炎症因子的影响

目的:探讨疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatosis hepatitis,NASH)合并心脏舒张功能不全大鼠干预的作用机制.方法:采用高脂饲料喂养复制NASH大鼠实验模型,各药物组分别灌服疏肝方、健脾方和综合方(疏肝方和健脾方的合方)进行干预,16wk后用Visual Sonics Vevo770TM高分辨率小动物超声诊断仪检测大鼠心脏每搏输出量(SV)、左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)用以评价大鼠心脏收缩功能,检测E/A比值用以评价大鼠心脏舒张功能.然后处死大鼠,腹主动脉采血,用全自动生化分析仪检测血脂及肝脂的含量;常规HE染色观察肝组织病理变化;ELISA法检测血清TNF-α和IL-6的水平.结果:肝组织病理染色提示大鼠NASH造模成功;与正常对照组相比,模型组大鼠心脏舒张功能明显降低(1.59±0.24vs1.03±0.13,P<0.01),血清TNF-α和IL-6含量显著升高(13.57±4.64vs28.26±8.60;59.28±71.53vs132.81±74.22,P<0.01、0.05),血清TC、LDL及肝组织TC、TG含量也明显升高(1.42±0.29vs3.82±0.91;0.30±0.11vs0.81±0.27;0.90±0.14vs11.86±1.29;0.75±0.38vs6.17±1.83,均P<0.01),SV、LVEF、LVFS均比正常组有不同程度的下降;各药物组大鼠心脏舒张功能较模型组有显著改善,以健脾高剂量组、综合方高剂量组的E/A比值升高最为明显(1.26±0.23vs1.03±0.13;1.35±0.15vs1.03±0.13,均P<0.01);各药物组大鼠血清TNF-α及IL-6含量与模型组相比明显下降,以综合方高剂量组的血清下降最为明显(15.07±6.00vs28.26±8.60;67.72±44.24vs132.81±74.22,P<0.01,0.05);脂质代谢检测以合方高剂量组的血清TG及肝组织TC、TG下降最为明显(0.45±0.14vs0.83±0.26;9.17±1.02vs11.86±1.29;2.54±0.74vs6.17±1.83,均P<0.01).结论:NASH大鼠伴有心脏舒张功能不全,疏肝健脾方药抗NASH及改善NASH大鼠心脏舒张功能可能与其降低血清中炎症因子TNF-α和IL-6的水平有关.

黄连素药性与脂肪肝证治关系初探

黄连素作为黄连、黄柏的主要单体活性成分,其与黄连、黄柏一样具有清热燥湿的功效,在脂肪肝的防治研究中疗效确切。黄连素清热燥湿属性与脂肪肝湿热证关系密切,是黄连素发挥抗脂肪肝作用的中医理论基础。该文以脂肪肝证治特点为突破口,探析黄连素清热燥湿属性与脂肪肝湿热证及其氧化应激产物之间的内在关系,为其防治脂肪肝提供中医理论依据和研究思路。

将转化医学引入NAFLD的中医药防治研究

该文介绍了转化医学(Translational Medicine)的概念,产生的时代背景及在中国的应用和发展,并结合转化医学的理念,分别从非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)的临床研究、基础研究、名老中医思想传承、转化医学平台和团队建设等方面,论述了转化医学理念在中医药防治非酒精性脂肪性肝病中的应用,以期与同道交流,为中医临床研究提供借鉴和参考。

Keap1-Nrf2-ARE信号通路与2型糖尿病氧化应激相关性研究进展

研究表明糖尿病(DM)病因和发病机制与遗传、环境、病毒感染、肥胖、种族、营养物质代谢和内分泌失调等因素有关〔1,2〕。Keap1-Nrf2-ARE信号通路是近年来抗氧化研究领域的热点,以Keap1-Nrf2-ARE信号通路介导多种抗氧化基因和Ⅱ相解毒酶的转录,被认为是抗氧化机制中最重要的通路。激活Keap1-Nrf2-ARE信号通路,减少活性氧(ROS)的产生,

参苓白术散的实验研究进展

本文通过综述参苓白术散对非酒精性脂肪性肝病、免疫功能的调节、中医脾虚证的干预、肠胃动力及肠道菌群的影响,表明参苓白术散能调节相关mRNA及功能性蛋白的表达,从而防治NAFLD的发生与发展;调节相关免疫细胞功能,改善机体免疫机能;增加或减少相应肠道细菌的数量,恢复肠道菌群平衡,保护肠道粘膜组织;双向改善胃肠动力,治疗胃动力不足或腹泻,为相关中医药的研究提供指导和参考。

伤寒温病统一思想在防治疫病中的应用

周晓燕主任将伤寒理论和温病理论的结合统一,通过四诊合参鉴别疫病的病因、病性、病位。中医治未病思想贯穿疫病防治的全过程,即未病先防、既病防变、瘥后防复。疫病的病理特点是痰、湿、瘀、毒、虚,应用《伤寒论》痰饮理论辨证处方用药治疗的方法包括解表固里法、五行并治法、扶阳畅气法。

濒危植物丽豆播种育苗试验

采用不同催芽处理方式,对濒危植物丽豆进行了播种育苗对比试验,观测了1年生、2年生苗的生长量、生物量与生长节律,得出：采用70%～90%的H2SO4液及GGR液处理种子时间短,效果最佳;全年苗高和地径生长量集中在4月至7月;1年生苗木生物量较小,2年生苗木生物量急剧加大。

阿托伐他汀联合复方甘草酸苷胶囊对老年非酒精性脂肪肝患者血脂水平变化的影响

目的探讨阿托伐他汀联合复方甘草酸苷胶囊对老年非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者血脂水平变化的影响。方法选取2014年8月~2015年8月在我院接受治疗的老年NAFLD患者62例,随机数字表法分为对照组和观察组各31例。对照组给予复方甘草酸苷胶囊,观察组在对照组基础上联合阿托伐他汀治疗。观察两组治疗效果、血脂[甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]水平及不良反应。结果治疗6w后,观察组总有效率为96.77%,显著高于对照组的70.97%,不良反应发生率显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组TG、TC及LDL-C水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿托伐他汀联合复方甘草酸苷胶囊治疗老年NAFLD,可改善患者血脂水平,效果显著,安全性高。

小檗碱对高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝病大鼠肝细胞脂质沉积的干预作用

目的探讨小檗碱对高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）大鼠脂质代谢紊乱及肝细胞脂质沉积的影响。方法SPF级雄性SD大鼠45只，适应性喂养1周后，随机分为正常组、模型组、小檗碱组，每组各15只。除正常组给予维持期饲料外，其余两组均采用高脂饮食喂养复制大鼠NAFLD模型，在施以造模因素的同时，小檗碱组灌胃盐酸小檗碱进行干预，8周后行HE、油红O染色进行模型鉴定，分离肝细胞，Typan blue染色和FCM对肝细胞分别进行活性和纯度鉴定；全自动生化分析仪检测血清及肝组织脂质情况；实时定量PCR法检测肝细胞肝X受体（Iiver X receptor，LXR）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase，FAS）表达水平；Westernblot法检测肝细胞LXRα、FAS蛋白表达水平。结果高脂饮食诱导成功建立NAFLD实验动物模型，每只大鼠获得纯化后的肝细胞（6．0～7．5）×10^8个，肝，经Typan blue染色的细胞活力均在95％以上，FCM检测纯度均在90％以上；与正常组比较，模型组肝细胞LXRα、FAS133RNA及蛋白的表达水平均显著升高（P〈0.01）；与模型组比较，小檗碱组LXRα、FASmRNA及蛋白表达水平明显下调（P〈0．01）。结论LXRα/FAS通路是NAFLD脂质平衡代谢紊乱重要的信号通路，小檗碱通过调控肝细胞LXRα/FAS通路使NAFLD大鼠肝细胞脂质沉积恢复，可能是小檗碱抗NAFLD的重要机制之一。

疏肝健脾方药含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞炎症损伤及TLR4/p38MAPK信号通路影响的研究

目的： 研究疏肝健脾方药含药血清对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激下大鼠肝细胞炎症反应及TLR4（Toll样受体-4）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38MAPK）信号通路的影响。 方法： 体外培养并鉴定SD大鼠肝细胞，制备疏肝健脾方药含药血清，对肝细胞进行疏肝健脾方药、p38MAPK抑制剂等药物干预，酶联免疫法（ELISA）检测细胞上清液中白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量的表达，Western blot检测 TLR4，p38MAPK，p-p38MAPK蛋白的表达。 结果： 可提取大鼠疏肝健脾方药含药或空白血清约2～3 mL，大鼠获得纯化后肝细胞1.5×10^8～2.0×10^8个，Typan blue染色测定细胞活力均在95%以上，免疫荧光法鉴定确定提取的为肝细胞。肝细胞培养上清的检测： LPS组较空白血清组IL-6，TNF-α水平均有显著升高（P〈0.01）。与LPS组比较，药物干预组IL-6，TNF-α表达水平呈显著降低（P〈0.01）。肝细胞的蛋白检测：与空白血清组比较，LPS组的p38MAPK，p-p38MAPK，TLR4蛋白表达均有显著升高（P〈0.01）；与LPS组比较，SB239063能显著下调p38MAPK的蛋白表达水平（P〈0.01），疏肝健脾组亦有下调，但无显著差异；疏肝健脾组，SB239063组的p-p38MAPK的蛋白表达水平均下调显著（P〈0.01）；TLR4蛋白表达水平以疏肝健脾组下调具有显著性差异（P〈0.01），SB239063组下调无显著统计学差异。 结论： 疏肝健脾方药可能通过TLR4/p38MAPK信号通路调控大鼠肝细胞炎症损伤，含药血清可能是其重要的作用途径之一。