新型冠状病毒非结构蛋白NSP13通过调控IκBα蛋白降解抑制NF-κB信号通路

目的研究新型冠状病毒非结构蛋白13(NSP13)调控NF-κB信号通路的作用机制。方法利用GV367-NSP13-FLAG慢病毒感染的方法制备高表达NSP13的A549细胞(A549-NSP13)和A549对照组,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和ELISA检测NF-κB下游细胞因子白细胞介素6(IL-6)和趋化因子5(CCL-5)表达水平;Western印迹法检测NF-κB信号通路P65、磷酸化P65和NF-κB抑制因子α(IκBα)蛋白表达。放线菌酮10 mg·L^(-1)处理细胞0,15,30,45,90和120 min,Western印迹法检测IκBα蛋白半衰期。结果与A549对照组相比,A549-NSP13细胞检测到FLAG标签蛋白条带,且NSP13 mRNA表达显著上调(P<0.01),表明A549-NSP13细胞系构建成功。与A549对照组相比,A549-NSP13细胞IL-6 mRNA和蛋白表达水平(P<0.01)及CCL-5 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)均显著降低;磷酸化P65蛋白表达下降(P<0.01),而IκBα蛋白表达上调(P<0.01);且IκBα蛋白半衰期增加(P<0.01)。结论NSP13蛋白可通过抑制IκBα降解进而抑制NF-κB信号通路的活化并降低其下游IL-6和CCL-5等炎症相关分子产生和分泌。

辅酶Q10对模拟急进高原环境大鼠的抗疲劳作用及机制

目的探索辅酶Q10(CoQ10)对模拟急进高原环境下大鼠的抗疲劳作用及机制。方法Wistar大鼠随机分为常压常氧(NN)组、低压低氧(HH)组和HH+CoQ10(30 mg·kg^(-1))组,每组12只。各组大鼠连续ig给药6d,给药4d后,将HH和HH+CoQ10组大鼠移至低压氧舱中,以5m·s^(-1)速度上升至模拟海拔6000m,停留并继续给药2 d。末次给药1 h后,每组取6只大鼠进行游泳力竭实验,另6只取动脉血后处死并取心、肺、肾和脑组织,用气血分析仪检测动脉血pH、动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、动脉血氧分压(PaO_(2))和动脉血氧饱和度(SaO_(2)),及碱剩余(BE)、动脉血碳酸氢根(HCO_(3)^(-))、血清钙离子(Ca^(2+))和动脉血乳酸(Lac)含量;试剂盒测定血清丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性;HE染色观察心、肺、肾和脑组织病理变化;TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡率。结果与NN组相比,HH组大鼠游泳力竭时间显著缩短(P<0.01);动脉血pH,PaO_(2),SaO_(2)和HCO3-显著降低(P<0.01),PaCO_(2),BE,Ca^(2+)和Lac含量显著升高(P<0.01);血清MDA含量显著增加(P<0.01),T-SOD活性显著下降(P<0.01);肺、脑和肾小管上皮细胞水肿且心肌损伤;肾小管上皮细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。与HH组大鼠比较,HH+CoQ10组大鼠游泳力竭时间显著延长(P<0.05);上述动脉血气指标显著改善(P<0.05);血清MDA含量显著减少(P<0.05),T-SOD活力显著升高(P<0.05);肺水肿、脑水肿、肾小管上皮细胞水肿缓解;肾小管上皮细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。结论CoQ10可能通过降低急进高原环境下氧化应激水平改善重要器官的病理损伤,进而提高大鼠抗疲劳能力。

1,6-二磷酸果糖对模拟急进高原环境下大鼠的预防性保护作用研究

探索预防性灌胃给予1,6-二磷酸果糖对模拟高原低压低氧环境下大鼠的保护作用。方法 将36只Wistar大鼠随机、平均分为3组,低压低氧给药组(FDP组),低压低氧组(HG组),常压常氧组(NG组)。利用大型多因素复合环境模拟舱模拟海拔高度6000 m环境,大鼠进舱2 d后收样并检测各项病理生理指标。FDP组大鼠灌胃给药剂量为500 mg/kg,总给药时长为6d,其中舱外给药4d,大鼠进舱后继续给药2 d。HG组与NG组根据大鼠体重给予相同用药量体积的生理盐水灌胃6d。给药结束,在模拟海拔3000m环境,每组中6只大鼠进行游泳力竭实验,另外6只大鼠麻醉后腹主动脉取血进行血气分析、血液常规检查及氧化应激指标检测;之后处死大鼠立即取心、肾、肺等器官,固定,进行组织HE染色和病理分析。结果 在缺氧条件下大鼠游泳时长显著缩短,而FDP组游泳时长与HG组相比显著延长(P<0.05)。低压低氧条件下大鼠血清中T-SOD水平降低,MDA水平升高,说明大鼠出现氧化应激损伤;FDP组与HG相比T-SOD数值增高(P<0.05),MDA数值降低(P<0.05),说明FDP缓解了氧化应激损伤。低压低氧条件下大鼠出现明显心肌、肺、肾组织损伤,FDP组与HG组相比损伤减轻。结论 预防性服用FDP能延长低压低氧条件下大鼠游泳时间,减轻氧化应激反应以及减轻大鼠重要脏器损伤,改善高原反应。