湖州地区402例过敏性疾病血清过敏原谱分析

变态反应是机体产生的一种病理性超敏反应，其特征是有特异性IgE抗体的形成。过敏性疾病病因种类繁多，传统的治疗主要是对症治疗，但不能治其根本，如再次接触仍会发病。因此，检测出过敏原，并尽量避免与之接触，减少过敏性疾病的发生。本文采用欧蒙免疫印迹技术对湖州地区402例过敏性疾病患者进行s-IgE半定量检测，旨在为该地区过敏性疾病的防治提供实验依据。

IGF-ⅠR抑制剂联合西妥昔单抗对人肝癌细胞的体外抑制作用

目的探讨西妥昔单抗与胰岛素样生长因子-Ⅰ受体（IGF-ⅠR）抑制剂aIR3对人肝癌细胞株HepG2细胞的作用。方法选用浓度递增的西妥昔单抗（5-500）mg／mL和aIR3（2．5～250．0）μmol／L，单独或联合作用于HepG2细胞，观察不同时间对细胞增殖的抑制作用以及联用时的两药协同系数。结果单药西妥昔单抗与aIR3对HepG2细胞增殖的抑制作用均呈浓度依赖性与时间依赖性，二药单独作用于HepG2细胞72h最大抑制率分别为42．2％、82．3％，二药联合作用于HepG2细胞72h最大抑制率达91．8％。西妥昔单抗与aIR3不同浓度在各时间点的协同系数均小于1。结论西妥昔单抗和aIR3在体外对HepG2细胞的增殖均具有一定的抑制作用，联合应用时具有明显的协同效应。

白细胞介素-8、C反应蛋白及降钙素原与创伤性多器官功能障碍综合征发生及预后的相关性

目的：探讨白细胞介素-8（IL-8）、降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）对创伤性多器官功能障碍综合征（MODS）发生过程及预后的影响。方法：收集2012年1月~2013年1月在湖州市中心医院重症医学科住院的严重创伤最终发展为MODS的患者40例作为MODS组,将门诊健康检查体检者30例作为对照组,同时将MODS组根据转归分为死亡组与非死亡组,分别检测患者入院24 h内外周血IL-8、CRP、PCT的浓度。结果：MODS组IL-8水平明显高于对照组,死亡组IL-8水平明显高于非死亡组,且差异均有统计学意义（P〈0.05）;MODS组CRP水平明显高于对照组,死亡组CRP水平明显高于非死亡组,且差异均有统计学意义（P〈0.05）;MODS组PCT水平明显高于对照组,死亡组PCT水平明显高于非死亡组,且差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：IL-8、CRP、PCT水平在创伤性MODS患者升高,揭示其可能参与了MODS的发生。创伤后致炎因子血浆水平的测定可以作为一种有价值的免疫学监测,有助于MODS患者预后评估。

IGF-ⅠR信号通路在西妥昔单抗抗HepG2细胞增殖中的作用

目的探讨IGF-ⅠR信号通路在西妥昔单抗抗HepG2细胞增殖中的作用。方法选用浓度递增的西妥昔单抗(5～500)mg/mL、胰岛素样生长因子(IGF)(2.5～250)μmol/L及其抑制剂aIR3(2.5～250)μmol/L,单独或联合作用于HepG2细胞,观察IGF与aIR3对西妥昔单抗抗HepG2增殖的影响。结果细胞培养72 h后,单药西妥昔单抗对HepG2细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性,西妥昔单抗联合aIR3组增殖抑制率在相应浓度下均显著高于同浓度的西妥昔单抗组(均为P<0.01),IGF(10～250)μmol/L与西妥昔单抗(20～500)mg/mL联合组增殖抑制率均显著低于相应浓度的西妥昔单抗组(均为P<0.01)。结论 IGF-ⅠR通路可影响西妥昔单抗抗HepG2细胞增殖的作用,可能是肝癌细胞株对西妥昔单抗耐药的机制之一。

中期因子在不同分子分型的乳腺癌中的表达及其临床意义

探讨在5种不同分子分型的乳腺癌中中期因子在组织中的表达,并分析其临床意义。采用免疫组化法检测203例乳腺癌组织的中期因子表达量;采用CD105抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。结果显示,中期因子与肿瘤的淋巴结转移、临床分期相关性密切。中期因子表达量高的样本具有较高的以CD105表征的微血管密度。与其他4种分子分型相比,中期因子和CD105在基底细胞样型的表达量最高,但是该差异不具有统计学意义。中期因子可以作为乳腺癌预后的标记物应用于临床诊断和治疗,与其他分子亚型的乳腺癌相比,基底细胞样型的乳腺癌可能并不具有独特的血管生成模式。

锁核酸扩增阻滞荧光聚合酶链反应技术检测结直肠癌患者血浆肿瘤K-ras基因突变

目的建立锁核酸扩增阻滞突变体系荧光聚合酶链反应（LNA-ARMS-PCR）技术检测血浆K-ras突变方法，探讨该方法替代组织检测K-ras突变的可行性。方法应用锁核酸标记技术建立LNA-ARMS-PCR检测K-ras突变技术，收集155例结直肠癌患者肿瘤组织及其对应血浆标本，同时检测其中的K-ras突变，分析其符合率。结果建立的检测技术灵敏度高，质粒混合实验证实其灵敏度高达0.1%。肿瘤原发灶内的异质性分析结果显示本方法可以避免因肿瘤异质性导致的假阳性。血浆与肿瘤组织K-ras突变检测的阳性符合率为35.3%，阴性符合率均为100.0%；Ⅳ期患者血浆与组织突变阳性符合率高达83.3%（15/18）。血浆与组织突变检测符合率与TNM分期及循环游离DNA（cfDNA）水平密切相关。结论LNA-ARMS-PCR方法检测血浆K-ras突变，可以取代肿瘤组织用于检测K-ras突变，但仅限于晚期转移性患者临床价值高。

中期因子mRNA在非小细胞肺癌患者外周血中的表达及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血中中期因子（MK）mRNA的表达及其临床意义。方法采用定量聚合酶链反应（PCR）法检测87例NSCLC患者、35例肺良性疾病患者及30例健康志愿者外周血中MKmRNA的表达。结果NSCLC患者外周血中MKmRNA的相对表达（6．749±1．117）与良性疾病患者（7．988±0．633）和健康志愿者（8．156±0．525）比较，差异有统计学意义（P〈0．05），而后两者比较差异无统计学意义（P〉0．05）。NSCLC患者外周血中MKmRNA表达水平与其临床TNM分期，细胞分化程度及淋巴结转移密切相关（P〈0．05），而与年龄、性别、吸烟与否和病理类型无明显相关（P〉0．05）。结论外周血MKmRNA有望成为NSCLC微转移检测的有效标志物。

黄药子醇提物Caco-2细胞摄取液对HL-7702和HepG2细胞毒性研究

目的研究黄药子醇提物Caco-2细胞摄取液对HL-7702和HepG2细胞的毒性。方法 75%乙醇回流提取得黄药子提取物,高、中、低剂量作用于Caco-2细胞,以黄药子醇提物Caco-2细胞摄取液作用于HL-7702和HepG2细胞,进行细胞活性实验,测定生化指标ALT、AST、GSH-PX和MDA值。结果与对照组比,高剂量组和中剂量组黄药子醇提物Caco-2细胞摄取液作用后,HL-7702和HepG2细胞的存活率显著降低(P<0.01);高剂量组黄药子醇提物Caco-2细胞摄取液作用72 h后,HL-7702细胞上清液中ALT、AST显著升高(P<0.01);高剂量组黄药子醇提物Caco-2细胞摄取液作用48 h和72 h后,HepG2细胞上清液中ALT、AST显著升高(P<0.01)。高剂量组和中剂量组黄药子醇提物Caco-2细胞摄取液作用48 h和72 h后,HL-7702和HepG2细胞上清液中MDA显著升高,GSH-PX显著降低(P<0.01)。结论黄药子醇提物Caco-2细胞摄取液对HL-7702和HepG2细胞有毒性。

定量分析结直肠癌患者血浆循环游离DNA的临床价值

目的定量分析结直肠癌患者血浆游离DNA（cfDNA）水平在结直肠癌诊断及预后判断中的临床价值。方法收集本院接受手术的结直肠癌患者手术当天血浆标本178份和正常人血浆56份。利用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测血浆cfDNA水平。利用ROC曲线评价cfDNA水平在结直肠癌各分期亚组的诊断价值。对Ⅳ期患者进行随访，分析cfDNA与患者生存期之间的相关性。结果结直肠癌组cfDNA浓度显著高于健康体检组，差异有统计学意义[（63.07±65.38） ng/ml比（22.85±8.88） ng/ml，P＝0.000）]。Ⅲ～Ⅳ期结直肠癌组与健康体检组比较差异有统计学意义[血浆cfDNA浓度分别为（39.59±31.56）、（107.32±102.85） ng/ml比（22.85±8.88） ng/ml，均P＝0.000）]。血浆cfDNA水平在高、中、低分化肿瘤中分别为（29.42±18.29）、（54.69±75.05）、（9.67±103.18） ng/ml，差异有统计学意义（P＝0.000）。血浆cfDNA水平TNM分期密切相关。生存分析结果显示血浆cfDNA浓度与肿瘤患者总生存期（OS）明显相关。结论血浆cfDNA水平对结直肠癌早期诊断价值有限，初次治疗时血浆cfDNA浓度是有效的预后指标。

应用液相色谱-飞行时间质谱技术对肺癌患者血清代谢组学的研究

目的应用代谢组学技术分析肺癌患者和正常人群血清的代谢物质。方法运用高效液相-四级杆-飞行时间质谱（LC—Q—TOF／MS）联用技术对30例肺癌患者与30名正常人血清进行研究。采用正交最小二乘分析法（OPLS）进行建模，运用两样本t检验寻求两组间差异性代谢物。结果多变量统计结果显示肺癌患者和正常对照人群的代谢谱有明显差异，根据t检验结果寻找到血清中相关的差异代谢物36种。结论建立了利用LC—Q—TOF／MS技术进行肺癌血清代谢组学研究的方法。

人高致病性H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备高灵敏度和高特异性的人高致病性H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白抗体并对其效价进行初步评估。方法构建含有H5N1亚型禽流感病毒NS1序列的pET一28a（＋）重组载体的大肠埃希菌BL21（DE3），诱导表达NS1蛋白，并经Ni-NTA色谱柱亲和层析纯化获得NS1重组蛋白，并进行SDS-PAGE和WesternBlot鉴定。以纯化的蛋白为抗原免疫新西兰大白兔，获得兔抗NS1血清，亲和纯化获得多克隆抗体。应用ELISA和WesternBlot检测纯化抗体的效价和特异性。结果NS1融合蛋白得到高表达，且纯度〉90％，用该融合蛋白免疫新西兰大白兔后得到的抗NS1多克隆抗体，效价达1：80000，并特异性识别H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白。结论获得了NS1多克隆抗体，具有较好的效价和特异性。

微小RNA-433在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌组织中微小RNA（miR）-433的表达变化及其临床意义。方法 采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测80例胃癌患者手术切除癌组织及配对癌旁组织标本中miR-433的表达水平。结果 miR-433在胃癌组织中的相对表达水平（ΔCt为9.73±2.96）显著低于其配对癌旁组织中的表达（ΔCt为12.25±2.07）,差异有统计学意义（P〈0.05）。胃癌组织中miR-433的表达水平与分化程度、临床TNM分期、肿瘤大小及淋巴结转移密切相关（P〈0.05）,而与年龄和性别无相关（P〈0.05）。结论 胃癌组织中miR-433的低表达可能与胃癌的发生、发展、侵袭及转移相关。

乳腺癌易感性与O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因多态性的关系

目的探讨O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因rs1625649多态性与乳腺癌易感性的关系。方法乳腺癌患者55例，健康对照者119例，采用高分辨熔解曲线法（HRM）进行突变筛查，并进行测序验证。结果乳腺癌患者MGMT基因第2启动子区域检测到1个多态性位点，经测序验证，该位点为rs1625649。MGMTrs1625649位点A携带患者的危险度较对照组升高[P〈0．05，比值比（OR）=1．31，95％可信区间（CI）：1．09—1．59]。基因型分析结果表明MGMTrs1625649位点的AA基因型是乳腺癌高危基因型[P〈0．05，OR=1．46，95％CI：1．06～2．01]。结论MGMTrs1625649的基因多态性可能与乳腺癌的发生发展有关。

中期因子在乳腺癌患者血清中的表达及其临床意义

目的 检测乳腺癌患者血清中期因子（MK）水平,并探讨其临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验（EUSA）检测120例乳腺癌患者手术前后,50例乳腺良性肿瘤患者及100例正常人血清MK水平,比较它们之间的不同及乳腺癌患者术前血清MK水平与临床病理指标之间的关系.结果 血清MK水平在乳腺癌组的阳性率为65.52％,明显高于乳腺良性肿瘤组（6.00％）和正常对照组（4.00％,P＜0.01）；乳腺癌术前组血清MK水平[1 372（896,3 246） ng/L]明显高于乳腺癌术后组[784（563,890） ng/L]、乳腺良性肿瘤组[465 （420,574） ng/L]或正常对照组的血清MK水平[450（400,554） ng/L],差异有统计学意义（P＜0.01）；术后肿瘤复发组血清MK水平[2358（1 123,4 787） ng/L]亦明显高于乳腺癌术前组血清MK水平,差异有统计学意义（P＜0.01）,而乳腺良性肿瘤组与正常对照组的血清MK水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）；乳腺癌术前组血清MK水平与肿瘤的大小、临床TNM分期、组织学分级和是否伴有腋淋巴结转移有关（P＜0.01）,而与年龄、月经状况、雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）无明显相关（P＞0.05）.结论 乳腺癌患者血清MK水平与手术与否、临床TNM分期、肿块大小、腋淋巴结转移状况及复发有关,可用于乳腺癌患者的辅助诊断、疗效观察和复发监测.

碱性成纤维生长因子、表皮生长因子和血小板衍生因子对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的观察碱性成纤维生长因子（bFGF）、表皮生长因子（EGF）和血小板衍生因子（PDGF－BB）对小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外增殖和成骨分化的影响。方法采用贴壁培养纯化小鼠BMSCs，培养液（DMEM／F12，10％胎牛血清，青、链霉素）中添加（实验组）或者不添加（对照组）细胞因子bFGF、EGF和PDGF－BB（浓度均为10μg/L）进行培养，取传至第3代的细胞进行成骨分化，成骨诱导液：1×10-8mol／L地塞米松、50μmol／L抗坏血酸、10mmol／Lβ-甘油磷酸钠。流式细胞仪检测细胞表面标记抗原CIM5和CD90的表达；SYBgreen荧光定量聚合酶链反应（PCR）扩增检测成骨细胞特异性基因骨钙素和I型胶原的表达；碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测成骨细胞的分化。结果初始接种后，对照组的小鼠BMSCs贴壁较快，而传代后实验组的小鼠BMSCs增殖较快。对照组和实验组的小鼠BMSCs经传代纯化后CIM5、CD90的阳性表达率分别为（27．344-0．69）％、（41．93±0．34）％和（0．48±0．12）％、（82．78±0．25）％，实验组的小鼠BMSCs在传代过程中较少观察到细胞的老化现象，细胞的纯化程度较高，而且其向成骨分化的效率明显高于对照组细胞。结论联合使用细胞因子bFGF、EGF和PDGF－BB可促进小鼠间BMSCs的体外增殖和干性的维持，并且有利于其向成骨细胞的分化。

从噬菌体肽库中筛选并鉴定中期因子特异性结合肽

目的筛选并鉴定可与中期因子（MK）特异性结合的短肽。方法以人重组MK蛋白为靶分子，分别从噬菌体随机7肽和环7肽展示库中筛选出与MK蛋白高特异性结合的阳性噬菌体克隆。酶联免疫吸附试验（ELISA）鉴定所挑选噬菌体和MK蛋白的亲和力。噻唑蓝（MTT）比色法体外评价该合成短肽对HepG2细胞生长的抑制作用。结果经过3轮淘洗，筛选出的20个阳性克隆与MK蛋白均具有一定结合力，测序并推导出优选的3条线性肽和3条环肽的氨基酸序列，合成肽能不同程度抑制HepG2细胞的增殖，其中MK-P3（CTSTAMDNC）抑制HepG2增殖作用最强（P〈0．01），其对HepG2肝癌细胞的抑制率可达40．7％。结论成功筛选出了4条可和MK蛋白结合并对肿瘤细胞有一定抑制作用的短肽。