马立克氏病病毒河南分离株Meq基因的克隆与序列分析

【目的】了解马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）河南分离株Meq基因的分子特性,为中原地区MDV流行情况提供较详细的信息,为更好地防控MD奠定基础。【方法】应用PCR方法分别扩增了17株MDV河南省野毒分离株的Meq基因片段,克隆测序后,将各毒株Meq基因序列与vv＋MDV 648A株、vvMDV RBIB株、vMDV GA株、mMDV疫苗株CVI988株和814株的Meq基因序列进行比对分析。【结果】17株分离株中除HNGS201和HNLC503的Meq基因扩增产物较预期稍大外,其余15个的片段长度为1 020bp,与预期长度相符;MDV河南分离株之间及其与参考毒株Meq基因的核苷酸同源性为99.0%～100%,部分毒株Meq基因的氨基酸序列有10个位点的氨基酸存在规律性突变;MDV河南分离株和参考株共组成3个进化分支,其中强毒株GA、RB1B和648A位于一个分支,分离株HNGS201、HNLH304、HNLC503与mMDV毒株CVI988和814位于同一分支,其余14株分离株位于另一个较大的分支。【结论】河南省可能流行着不同毒力的MDV,一些mMDV毒株的Meq蛋白存在59个或60个氨基酸的插入。

基于阵列芯片现场高灵敏同步快速检测粮油中氨基甲酸酯类农药残留混合污染

农产品质量安全是国家乡村振兴战略的重点和难点。氨基甲酸酯类农药残留严重威胁粮油产品质量安全与人民生命健康。目前,常用的氨基甲酸酯类农残检测方法主要是仪器检测法,无法满足现场对粮油农残混合污染进行现场高灵敏同步快速检测的需求。本研究在前期自主选育的克百威和甲萘威单克隆抗体基础上,研究并制备出农残混合污染同步快速检测阵列芯片,建立了一种现场高灵敏同步快速检测技术,实现了在30 min内同步定量克百威和甲萘威。经过优化,克百威和甲萘威的检测限分别为0.11、0.09 ng/g,线性范围为0.33~3000 ng/g、0.18~1500 ng/g。在花生样品检测中,克百威和甲萘威的加标回收率分别为88.4%~98.3%和90.1%~118.8%;批内差(RSD)分别为9.0%和3.5%;批间差(RSD)分别为12.3%和16.3%。该阵列芯片检测结果与液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)检测结果高度一致。该阵列芯片满足了对农产品中克百威和甲萘威进行现场高灵敏同步快速检测的需求,并可广泛应用于农产品质量安全、食品安全以及环境监测等领域。

猪圆环病毒2型培养工艺研究

本文在猪圆环病毒2型转瓶培养工艺基础上,利用NBS生物反应器和无血清培养基进行PK15-B1细胞培养,增殖猪圆环病毒2型病毒液,探索简化PCV2病毒液生产工艺、降低生产成本的方法,为今后用生物反应器微载体系统生产PCV2病毒液提供了科学依据。

速克冻干粉与马立克疫苗混合应用的效果观察

用含有不同浓度抗生素的马立克疫苗,接种鸡成纤维细胞,观察不同浓度的抗生素对马立克疫苗蚀斑形成单位的影响。结果表明庆大霉素对马立克蚀斑形成有抑制作用,而头孢噻呋冻干粉对马立克的蚀斑形成没有影响;通过一年多的临床应用也证明了速克冻干粉与马立克疫苗同时使用可以增强雏鸡对细菌疾病的抵抗力,降低鸡白痢、大肠杆菌病和支原体病的发病率,提高雏鸡早期成活率。