黄曲霉致真菌性角膜炎1例及实验室检测

目的报道1例黄曲霉致真菌性角膜炎病例及对该病原体展开的实验室检测流程。方法采集本院收治的1例角膜炎患者患处角膜刮片标本进行病原菌培养,并对分离到的菌株进行菌种鉴定及体外药敏试验。查阅既往文献整理汇总该病原菌致角膜炎的临床数据。结果角膜刮片标本培养后生长丝状真菌菌落,经形态学和MALDI-TOF MS鉴定为黄曲霉复合群;钙调蛋白基因测序鉴定为黄曲霉。Sensititre YeastOne显色真菌药敏试验显示该菌株对测试的7种抗真菌药物均体外敏感。尽管该病例在实验室检出黄曲霉致病菌后及时调整了抗真菌治疗方案,但实际临床治疗效果不佳,症状持续加重,最终摘除患侧眼球以遏制感染进一步扩散。既往相关文献报道曲霉菌性角膜炎症状较重,首选治疗药物为伏立康唑且需长疗程。结论曲霉菌性角膜炎的诊治过程较为棘手,实验室检查提供准确的菌种鉴定及体外药敏结果有助于曲霉菌性角膜炎的及早诊治。非培养的分子诊断技术有望作为真菌性角膜炎的补充检测手段。

APP17肽对APP转基因小鼠突触相关蛋白表达的影响

目的研究APP17肽对APP转基因小鼠(APP V717 I)海马神经元突触相关蛋白表达的影响。方法将3 mon龄的APP转基因小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组(皮下注射0.16 mg.kg-1.d-1,每周3次),并以相同年龄和背景的C57BL/6 J小鼠做正常对照组。7 mon后行Morris水迷宫测定,小鼠脑组织灌注固定后进行PSD-95、Shank1蛋白的免疫组化染色。结果模型组小鼠水迷宫实验的逃避潜伏期明显长于治疗组和正常对照组,且模型组小鼠大脑海马CA4区中的PSD-95、Shank1阳性反应神经元明显减少,染色浅;APP17肽治疗组与正常对照组相近。结论APP转基因小鼠大脑中存在突触后致密区蛋白表达异常,由此引起突触功能损害,进而导致记忆、学习能力的改变;而APP17肽能通过提高PSD-95、Shank1的表达,使突触的损伤接近恢复正常。并能改善小鼠的记忆、学习能力。

Nogo与Nogo受体在正常小鼠大脑的分布

NOgo与NOgo受体对抑制中枢神经系统的再生有着重要的作用。本研究用本室制备的抗Nogo和抗Nogo受体的多克隆抗体进行免疫组织化学染色,在低倍镜下计数阳性细胞、观察Nogo与Nogo受体在正常小鼠脑内的分布。结果显示:Nogo样和Nogo受体样免疫阳性结构在大脑皮层、海马、下丘脑、苍白球、尾壳核和黑质等处的神经元细胞核中有较强的表达,而在胞浆和突起内表达较弱。由此我们得出结论,Nogo和Nogo受体蛋白在成年小鼠脑内分布广泛。

APP17肽对APP转基因小鼠Aβ相关蛋白表达的影响

目的研究淀粉样前体蛋白(APP)17肽对APP转基因小鼠(APPV717I)海马神经元β淀粉样肽(Aβ)相关蛋白表达的影响。方法将3月龄的APP转基因小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组(隔日皮下注射0.16mg·kg-1,3次/w),并以相同年龄未经转基因处理的C57BL/6J小鼠做正常对照组。8个月后行Morris水迷宫测定,小鼠脑组织灌注固定后进行Aβ1～42、Aβ1～16、APP-N端(52～80)、早老蛋白-1(PS-1)C端、APP的β位点剪切酶(BACE)等蛋白的免疫组化染色。结果模型组小鼠水迷宫实验的逃避潜伏期明显长于APP17肽治疗组和正常对照组(P<0·05),且模型组小鼠海马中Aβ1～42、Aβ1～16、APP-N端(52～80)、PS-1C端、BACE阳性反应神经元明显增加,染色深(P<0·05);APP17肽治疗组与正常对照组相近。结论APP转基因小鼠大脑中存在Aβ相关蛋白的高表达,由此引起记忆、学习能力的改变;而APP17肽能通过抑制β-分泌酶和PS-1的表达而减少Aβ生成,使之接近正常,并能改善小鼠的记忆、学习能力。

APP17肽对D-半乳糖老化小鼠海马神经元IRS和PI3K表达的影响

目的通过对胰岛素受体底物-1（IRS-1）、胰岛素受体底物-2（IRS-2）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）在海马表达的观察，研究APP17肽对D-半乳糖老化小鼠海马神经元信号转导途径上游步骤的影响。方法小鼠随机分为3组，每组22只：正常对照组（C组）、D-半乳糖模型组（D组）、APP17肽治疗组（D＋P组）。D、D＋P 2组每日皮下注射半乳糖100mg·kg^-1。D＋P组每周一、二、五皮下给药APP17肽0．35μg／只。4个月后，小鼠灌注固定，行脑冰冻切片，用PI3K、IRS-1、IRS-2抗体进行免疫组化染色。Western blot应用IRS—1抗体染色。结果免疫组织化学染色方法检测海马神经元胰岛素受体底物-1、胰岛素受体底物-2、PI3K的表达，结果显示3种抗体C组深染的阳性细胞排列整齐。染色深，突起深染，可见2—3级分支，细胞计数与D组差异有显著性；D组海马阳性反应细胞着色浅，少有突起，细胞数目少，分别为正常对照的67．5％、63．68％和48．6％。APP17肽治疗组（D＋P组）染色结果与C组相似，阳性细胞数目接近C组，与半乳糖老化组比较差异均有显著性，P〈0．05，但阳性细胞突起少于C组，排列亦不如C组整齐。Western blot结果亦显示D组海马表达IRS-1减少，应用17肽后IRS-1表达上调，但不如C组数值高。结论D-半乳糖老化小鼠海马神经元IRS—1、IRS-2、PI3K的表达明显下降；APP17肽能上调D-半乳糖老化小鼠海马IRS—1、IRS-2和PI3K的表达。

某三级医院连续4年血培养分离菌构成及耐药性

目的 了解血培养病原体的分布及其耐药性,为临床合理用药提供依据.方法 对某院2008年1月 — 2011年12月间门诊及住院患者血培养标本分离的非重复病原体资料进行统计分析.结果 670株血培养病原体中,革兰阴性杆菌306株（45.67％）,革兰阳性球菌329株（49.11％）,真菌35株（5.22％）;检出率居前3位的病原菌依次为凝固酶阴性葡萄球菌（23.88％）、大肠埃希菌（19.40％）和金黄色葡萄球菌（12.98％）.药敏结果显示,血流感染的多重耐药葡萄球菌对复方磺胺甲噁唑、利奈唑胺及万古霉素的敏感性（耐药率为0～20.34％）高.革兰阴性杆菌（不动杆菌属除外）对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦及阿米卡星的耐药率为0～27.27％;耐药率最高的革兰阴性菌为不动杆菌属.血培养真菌分离率较高的为近平滑假丝酵母菌（2.38％）及白假丝酵母菌（1.79％）.结论 早期送血培养做病原学检查,重视血培养分离的多重耐药菌株并加强监测,可及时为临床诊断和治疗提供可靠依据.

基于细菌16S rRNA基因扩增临床不常见病原菌的价值

目的探讨16S rRNA基因扩增与测序在临床不常见病原菌鉴定中的价值,指导临床相关感染的诊治。方法选择临床微生物实验室常规方法难以准确鉴定、无法鉴定或有特殊表型的细菌12株,采用聚合酶链反应(PCR)扩增其16S rRNA基因,测序后进行BLAST比对鉴定菌种,并分析相关感染的临床特点。结果 12株菌经PCR扩增均得到阳性条带(约1 500 bp),均鉴定到种(相似度≥99%),分别为产单核细胞李斯特菌、马耳他布鲁杆菌各2株,死亡梭杆菌、空间罗氏菌、鼻疽奴卡菌、解糖葡萄球菌、放射性根瘤菌、二路普雷沃菌、解甘露醇罗尔斯顿菌及阴道阿托波菌各1株。16S rRNA基因扩增灵敏度高,大肠埃希菌ATCC25922的最低检测限为1.5×101 CFU/mL。12例患者临床资料显示上述菌可引起临床多部位、多类型感染,选用针对性抗菌药物治疗后11例好转,1例死亡。结论 16S rRNA基因测序方法可快速、准确鉴定少见菌、厌氧菌及难培养细菌,为临床不同类型感染的病原学诊断和治疗提供实验室依据。

细菌性阴道病的治疗与阴道微生态检测

目的 了解细菌性阴道病（bacterial vaginosis,BV）诊治前后阴道微生态状况,为治疗和预防BV提供依据。方法 采用随机分组,克林霉素凝胶和甲硝唑凝胶平行对照方法,对本院2013年6-8月符合入组的74例BV患者进行治疗前后阴道微生态评价,根据Nugent评分、优势菌、H2O2、唾液酸苷酶等指标判断药物有效性,并追踪停药1周及1个月后两组病例的治愈率、有效率、复发率及阴道微生态状况变化。结果 完成研究的66例患者阴道分泌物治疗前及两次随访的平均pH分别为4.96、4.53、4.49,平均Nugent评分为8.15、2.36、2.83。按Nugent评分两次随访有效率为100%和80.30%,但分别有29例（43.94%）和27例（40.91%）阴道微生态未恢复正常,包括pH〉4.5（43.94%、40.91%）、Nugent评分为4~6分或≥7分（36.36%、39.39%）、阴道菌群密集度为Ⅰ度或Ⅳ度（16.67%、25.76%）、优势菌为革兰阴性短杆菌或革兰阴性弧菌（36.36%、39.39%）、H2O2阳性（40.90%、31.82%）,其中9例（13.64%）继发需氧菌性阴道炎,4例（6.06%）继发外阴阴道假丝酵母菌感染。甲硝唑组和克林霉素组治疗1疗程后,两次随访的改善率、有效率、复发率均无统计学差异（P〉0.05）。结论 甲硝唑凝胶与克林霉素凝胶均可作为治疗单纯性BV的选择药物,监测阴道微生态指标对BV诊疗有重要价值。

网络课程辅助教学在实验诊断学教学中的应用

实验诊断学是医学教育中一门重要课程,对医学生从基础学习转向临床课程学习具有重要的过渡意义。但是,多数医学生对该课程不够重视,在学习这门课程时缺乏兴趣,成绩不够理想。成人教育学院学生由于学习方式的原因存在更多问题,该课程的学习困难也大于全日制学生。

致多部位感染肺炎克雷伯菌的毒力分析

目的分析导致多部位感染的肺炎克雷伯菌的荚膜血清型和毒力基因分布,为临床抗感染治疗和院感防控提供帮助。方法收集宣武医院2017年1月至2018年12月临床血培养分离的肺炎克雷伯菌同时合并其他部位分离相同菌株患者菌株,回顾性分析其临床资料;黏液丝试验检测毒力表型,PCR扩增荚膜血清型和毒力相关基因,质谱技术分析菌株同源性。结果共收集肺炎克雷伯菌106株(来自34位患者),菌株主要分布于ICU72%普外科10%和神经内科6%;标本来源于血液34%、痰28%、尿液16%、导管6%、伤口3%、脓3%、引流液3%、胆汁2%、分泌物2%、子宫颈2%、保护性导管刷1%和腹腔积液1%;患者年龄28~91岁,平均年龄(66±5)岁,男性占70.7%,女性占29.3%。具有高黏液表型中黏液丝试验阳性者占22%(24/106),黏液丝试验阴性占78%(83/106)。毒力血清型包括K1(15%)、K2(42%)、K5(4%)、K54(11%)、K57(9%)和未分型(19%),携带rmpA(83%)、aero(79%)、mrkA(94%)、fimH(80%)和WabG(98%)等毒力因子,同时携带多种毒力基因者占47%。质谱同源性分为A型(59%)和B型(41%),A型包括A1型(40%)、A2型(19%),65%的患者为同一型别。结论该院致多部位感染的肺炎克雷伯菌分离到高毒力菌株,由同一克隆的肺炎克雷伯菌引起多部位感染菌株间的同源性较小。

MALDI-TOF MS直接鉴定阳性厌氧血培养瓶中细菌的研究

目的探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定阳性厌氧血培养瓶中细菌的可行性和准确性,评价不同前处理方法用于质谱快速鉴定的临床应用价值。方法收集2017年8月至2018年8月临床非重复阳性厌氧血培养瓶,经革兰染色镜检确认均有菌生长。利用分离胶促凝管法和0.5%十二烷基硫酸钠(SDS)法处理阳性厌氧血培养瓶并用MALDI-TOF MS直接鉴定,与转种后菌落鉴定结果相比较,分析鉴定准确率和一致性。结果共收集阳性厌氧血培养瓶240瓶,包括单菌阳性234瓶,混合菌6瓶,平均报阳时间为(16.87±13.12)h;218瓶(90.83%)可用MALDI-TOF MS直接鉴定,4瓶(1.67%)混合菌生长仅鉴定其中一种菌或无可靠鉴定结果。SDS法和分离胶法对革兰阴性菌的鉴定准确率(94.81%、94.16%)显著高于革兰阳性菌(87.50%、81.25%),差异有统计学意义(χ2=3.96、9.53,P<0.05);SDS法和分离胶法直接鉴定与菌落鉴定结果的一致率分别为92.31%、89.74%。SDS法前处理鉴定的准确率和鉴定分值≥2.0的比例(94.17%、69.23%)均高于分离胶法(90.83%、65.81%);SDS法厌氧菌的鉴定分值≥2.0的比例(83.33%)明显高于分离胶法(58.33%)。结论MALDI-TOF MS可应用于临床常见厌氧血培养阳性菌的鉴定,SDS法前处理对厌氧菌的快速鉴定有较高的准确率。

外科感染患者标本分离病原菌及耐药性

目的了解外科感染患者分离病原菌及耐药情况。方法采用回顾性调查的方法,对2013年1月—2014年1月某院外科患者送检标本分离的1 208株病原菌及其耐药性进行统计分析。结果 1 208株病原菌中,革兰阴性(G-)菌780株(64.57%),革兰阳性(G+)菌301株(24.92%),真菌127株(10.51%)。主要标本来源为痰液(44.78%)、尿液(21.11%)、血液(11.51%)、脓液分泌物(10.26%)等。药敏结果示,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶检出率分别为62.60%和33.61%,二者对亚胺培南耐药率为0.76%和15.57%。铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率达38.93%和75.80%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌检出率分别为71.68%和87.93%。结论该院外科感染分离的病原菌以G-菌为主,主要感染部位为呼吸道和泌尿道;多重耐药严重,尤其是碳青霉烯类耐药株,值得重视。

李氏5号方对半乳糖老化小鼠海马神经元褪黑素受体和Nogo受体表达的影响

为了观察李氏5号方对半乳糖老化小鼠海马神经元褪黑素受体(MTR)和Nogo受体(NogoR)表达的影响。我们将昆明小鼠随机分为五组:正常对照组(C组)、D半乳糖模型组(D组)、李氏5号方大剂量药物治疗组(L组)、中剂量药物治疗组(M组)和小剂量药物治疗组(S组);D、L、M、S四组每日皮下注射半乳糖65mg/kg体重,持续三个月。应用免疫组织化学染色方法检测小鼠海马神经元MTR和NogoR的表达水平。NogoR免疫组化染色结果:D组海马阳性反应细胞着色浅,少有突起,细胞数目少,仅为正常小鼠的20%,三个剂量李氏5号方治疗组染色结果与C组相似。结果提示:半乳糖老化小鼠海马神经元MTR免疫反应阳性神经元数的上调可能是老化小鼠的一种代偿性反应;NogoR表达下调提示老化小鼠可能存在脑白质的损害,出于机体自我保护的需要,NogoR表达下调以避免神经元修复机制对大脑的进一步损害;不同剂量的李氏5号方水提取液对两种受体的调节作用极为明显,说明这两种受体的表达可受到外源性药物的干预。

聚合酶链反应诊断细菌和真菌性中枢神经系统感染的临床价值

目的探讨聚合酶链反应(PCR)在细菌和真菌性中枢神经系统感染快速诊断中的临床价值。方法收集137例中枢神经系统感染患者留存的脑脊液进行DNA提取,采用细菌和真菌通用引物扩增病原体DNA并进行序列测定,对比同期脑脊液培养方法与PCR方法的检测结果。结果 137份脑脊液标本中PCR检测到细菌50株,真菌6株,脑脊液培养检测到细菌38株,真菌5株;PCR检测法灵敏度为40.9%,特异度为100%,阳性预测值为100%,阴性预测值为38.2%,诊断效率为56.7%;传统培养法则分别为31.4%、100%、100%、34.7%、44.4%。PCR的灵敏度、阴性预测值和诊断效率均明显优于传统培养方法,特异度和阳性预测值与培养法相当,两方法鉴定菌种的符合率为97.7%。结论通用引物PCR扩增法具有快速、特异、灵敏、准确等特点,对细菌和真菌性中枢神经系统感染的病原学快速诊断具有重要的应用价值。

社区获得性单核细胞增生李斯特菌败血症的临床和实验室特点分析

单核细胞增生李斯特是一种胞内寄生菌,适应力强,在冰箱内可缓慢生长,是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一,食用冰箱内单核细胞增生李斯特污染的食品是引起社区获得性感染的常见途径之一[1-5]。本文就本院收治的1例李斯特菌败血症患者进行了报道。1资料与方法1.1病历资料患者,男性,102岁,因7d内排暗红色血便3次,发热1d出现昏迷,急性发病入院。

1例尿路感染患者尿液检出Candida nivariensis

传统的真菌鉴定方法主要根据真菌的形态学、生理生化特点、抗原构造等特征，但由于真菌种类众多、个体多态性明显，传统的鉴定方法常会得出假阳性或假阴性结果。尤其新发病原菌，很难从表型特征来鉴定。本实验通过形态学、生化反应、内转录间隔区（ITS）基因序列测定结合系统发育分析方法从1例尿路感染患者尿液中鉴定分离出Candidanivazriensis，为国内首次报道该菌引起尿路感染病例。

网络课程在医学工程系实验诊断学教学中的应用

工程系学生和临床系学生比较，偏重于理科及医疗机械原理知识的理解学习，对这门需要较多记忆的课程兴趣不高，不够重视，成绩比临床系学生更为不理想。我们在教学中努力提高教师自身素质，积极改善教学方法，提高学生学习兴趣，为此我们进行了一系列的教学方法研究[1-3]，努力寻找好的教学方法，以提高教学效果。计算机网络技术在教育教学中的应用被日益关注，充分利用网络信息资源和信息技术，能较好地促进现代医学教育的改革及发展，从而全面提高医学教育水平[4]。

蜡样芽孢杆菌引起化脓性脑膜炎的病原学检测及文献复习

蜡样芽孢杆菌为革兰阳性芽孢杆菌（芽孢不突出菌体），需氧或兼性厌氧，轻微运动性，广泛存在于土壤、灰尘、水和医院环境［1］（如空气过滤和通风设备［2］、样本收集管、床单［3］及重复使用的毛巾［4］、静脉导管［5］、光导纤维支气管镜检设备［6］等），可因污染土壤和食品作为一种食源性疾病进行报道（食物中毒）［7］。临床上各种标本（血液、伤口和痰等）分离到该菌时，常被认为是污染菌未鉴定到种或被误鉴为枯草芽孢杆菌，导致临床和微生物室对其研究和报道相对较少［1，6］。为了提高对该菌引起感染的认识及诊疗水平，本文结合本院蜡样芽孢杆菌引起的化脓性脑膜炎病例的临床资料及病原学鉴定进行分析并复习相关文献，总结如下。

碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的耐药机制与同源性分析

目的分析碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的临床分布、耐药表型、耐药基因和同源性,为临床抗菌药物的合理使用及减少医院感染的暴发流行提供实验室依据。方法收集宣武医院2015年1月至2016年6月临床分离的碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌菌株,采用Whonet5.6分析耐药情况及分布,产酶表型检测采用改良Hodge试验和碳青霉烯酶失活法(CIM)试验,PCR方法扩增耐药相关基因(KPC、OXA48、NDM、IMP、VIM、TEM、DHA),运用质谱技术分析试验菌的同源性。结果共收集耐碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌50株,占同期该院分离肺炎克雷伯菌的比例为28.1%(50/178),对常用抗菌药物均表现出高耐药性;50例中Hodge试验和耐碳青霉烯失活试验阳性者均占84.0%(42/50),二者同时阳性者占82.0%(41/50),符合率为97.6%。PCR扩增KPC基因型的阳性率为82.0%(41/50),其他耐药基因型阳性检出率分别为TEM 52.0%(26/50)、IMP 20.0%(10/50)、DHA14.0%(7/50)、VIM 12.0%(6/50)、NDM 6.0%(3/50)和OXA48 2.0%(1/50),同时存在3种耐药基因型的菌株占36.0%(18/50),同时存在2种耐药基因型的菌株占26.0%(13/50),未检测到任何耐药基因菌株占10.0%(5/50)。质谱同源性分析分为两大群,包括A1(42.0%)、A2(25.5%)和B(33.3%)型。结论该院碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的临床分离率高,携带NDM、DHA、IMP、VIM、TEM、OXA-48等多种耐药基因型,以KPC-2基因型最多见;同源性以A型为主要流行株。