大豆异黄酮可减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤:基于抑制铁死亡及炎症级联反应

目的基于大豆异黄酮(SI)对区域脑血流(rCBF)、铁死亡、炎症反应和血脑屏障(BBB)通透性的级联调控作用,探讨SI抗脑缺血/再灌注损伤机制。方法将120只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)和大豆异黄酮预处理组(SI组),40只/组。采用改良线栓法合并激光多普勒血流仪(LDF)建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型。术中各组大鼠通过LDF实时监测脑皮层血流动态变化;术后通过光镜和透射电镜观察脑组织病理形态、神经元和BBB超微结构变化,评估神经缺损程度,量化脑梗死、脑水肿和BBB破坏程度,分光光度法检测缺血半暗带Fe^(2+)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)含量,ELISA法测定血清TNF-α和IL-1β活性,Western blot法和IHC法检测病灶周围GPX4、MMP-9和Occludin表达。结果插线成功后I/R组和SI组大鼠rCBF均呈现骤降趋势,而拔线后I/R组rCBF上升慢于SI组;rCBF存在插线后不稳定和拔线后未复流状况。I/R组神经细胞固缩严重,线粒体变小、膜密度增加、嵴减少,紧密连接松散、基底膜厚薄不均,SI组各结构损伤相较于I/R组呈不同程度减轻。与Sham组相比,I/R组神经缺损评分、脑梗死体积、脑含水量和伊文思蓝渗透量明显增加(P<0.01),Fe^(2+)和MDA含量增多、GSH含量及GPX4表达降低(P<0.01),MPO含量和血清TNF-α、IL-1β活性增高(P<0.01),MMP-9表达增多、Occludin表达减少(P<0.01);与I/R组相比,SI组神经缺损评分、脑梗死体积、脑含水量和伊文思蓝渗透量降低(P<0.05或P<0.01),Fe^(2+)和MDA含量减少、GSH含量及GPX4表达升高(P<0.05或P<0.01),MPO含量和血清TNF-α、IL-1β活性降低(P<0.05或P<0.01),MMP-9表达下调、Occludin表达上调(P<0.05,P<0.01)。结论SI预处理可能通过改善脑血流,抑制铁死亡、炎症反应和保护BBB,进而减轻脑缺血/再灌注损伤。

川芎嗪对脂多糖诱导的小鼠ALI血管通透性的影响及相关分子机制研究

目的观察川芎嗪对脂多糖诱导的小鼠ALI血管通透性的保护作用并探讨其可能分子机制。方法C57BL/6小鼠(n=50)随机分为5组:CON组(n=10)、ALI组(n=10)、TMP低(50 mg/kg,n=10),中(100 mg/kg,n=10),高(150 mg/kg,n=10)浓度干预组。ELISA检测IL-1β及TNF-α水平;HE染色观察肺部病理变化;湿干比检测肺水肿程度;BALF白细胞计数、总蛋白量测定及EB实验检测肺血管通透性;WB检测P-mTOR、RhoA蛋白水平;电镜下观察内皮细胞间紧密连接。结果ALI组IL-1β、TNF-α水平较于CON组升高(P均<0.05);中浓度TMP组IL-1β、TNF-α水平下降明显(P均<0.05),低浓度和高浓度TMP组无显著变化(P均>0.05)。HE结果提示TMP中浓度可以显著减缓肺损伤的病理变化。ALI组湿干比高于CON组(P<0.01),TMP治疗可降低湿干比(P<0.05)。TMP可降低BALF白细胞计数(P<0.01)、蛋白浓度(P<0.01)及Evans Blue渗漏(P<0.05)。ALI组P-mTOR(P<0.01)及RhoA(P<0.01)蛋白表达量高于CON组。TMP组P-mTOR(P<0.01)及RhoA蛋白表达量下降(P<0.05)。ALI组紧密连接受损,TMP治疗后紧密连接断裂减轻。结论TMP可通过活化mTOR/RhoA通路改善肺血管通透性从而对LPS引起的小鼠ALI起到保护作用。

川芎嗪通过Rac1/LIMK1通路减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的:探讨川芎嗪(TMP)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的预防作用及对Ras相关C3肉毒素底物1(Rac1)/LIM激酶1(LIMK1)信号通路的影响。方法:将C57BL/6小鼠随机分为6组:对照组、模型组(LPS组)、地塞米松(Dex)组及TMP(40、80和120 mg/kg)组。模型组小鼠第1次采用LPS腹腔注射,16 h后第2次采用气管滴注LPS诱导小鼠ALI模型;TMP组小鼠在LPS第1次腹腔注射前30 min及第2次气管滴注LPS后30 min时腹腔注射TMP;Dex组小鼠与TMP组同一时间腹腔注射3 mg/kgDex。LPS气管滴注24 h后检测小鼠外周血氧饱和度(SpO_(2));取小鼠肺组织,计算肺组织湿干重比值(W/D);ELISA法测定肺组织中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α);HE染色观察肺组织病理学变化;Westernblot检测肺组织中Rac1和LIMK1蛋白水平;支气管肺泡灌洗液中检测白细胞含量及蛋白浓度。结果:与对照组比较,模型组小鼠SpO_(2)降低(P<0.05),W/D升高(P<0.01),肺组织中IL-1β和TNF-α水平均升高(P<0.01);肺泡壁增厚,大量红细胞渗出,可见片状出血;支气管肺泡灌洗液中白细胞总数及蛋白浓度增高(P<0.01);Rac1和p-LIMK1蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组相比,Dex组和TMP组W/D降低(P<0.01),肺组织IL-1β和TNF-α水平降低(P<0.01),肺泡间质水肿及出血减轻,红细胞渗出减少;支气管肺泡灌洗液中白细胞总数及蛋白浓度降低(P<0.01)。与模型组相比,Dex组及低、中剂量TMP组Rac1蛋白水平降低(P<0.01),p-LIMK1在Dex组及TMP组也显著降低(P<0.05,P<0.01),LIMK1在各组的表达无显著差异。结论:TMP可通过抑制Rac1/LIMK1信号通路降低毛细血管通透性,从而减轻LPS诱导的小鼠ALI。

差异表达的非编码RNA在脓毒症诱导的急性呼吸窘迫综合征中的作用

急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是一种ICU中常见的病死率较高的临床综合征,ARDS发生时,富含蛋白质的液体在肺泡中积聚,阻止肺部充满足够的空气,从而导致到达血液中的氧气减少,发生低氧血症^([1-2])。急性肺损伤(acute lung injury,ALI)由严重的感染、外伤、休克、吸入有害气体及中毒等直接或间接因素引起的全身炎症反应综合征在肺部的表现,以肺泡及肺实质发生急性炎症为主要病理特征,其特点是发生低氧血症、非心源性肺水肿、肺顺应性降低和广泛的毛细血管渗漏^([3])。

川芎嗪通过调控mTOR的表达减轻细菌脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞内皮屏障破坏

目的观察川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)对细菌脂多糖(LPS)诱导的脐静脉内皮细胞屏障损伤(HUVEC)的保护作用,并探索可能的作用机制。方法将鉴定好的人脐带静脉内皮细胞根据加药处理因素不同,将实验分为空白对照组、LPS组,LPS+TMP组。对三组进行免疫荧光细胞骨架染色及细胞通透性实验、跨内皮电阻实验。应用Westernblot及qPCR方法进行mTOR表达量的定量分析。结果免疫荧光细胞骨架染色表明与空白组相比,LPS组应力纤维明显增多、增粗。而应用TMP治疗后应力纤维变少、变细。跨内皮电阻实验表明,加药刺激前三组电阻值差无统计学意义(P>0.05)。加入药物刺激后,LPS组较空白组,电阻值明显降低,而TMP组较LPS组明显增加(P<0.05)。细胞通透性实验表明加药刺激后,LPS组较空白组,通透系数明显增加,而TMP组较LPS组明显降低(P<0.05)。Westernblot及qPCR方法表明LPS组较空白组mTOR表达量增加,而TMP治疗之后mTOR表达量较LPS组下降。结论TMP可通过调控mTOR的表达量对LPS诱导的HUVEC内皮细胞屏障破坏起到保护作用。

miR-122a对肝癌细胞HepG2化疗药物敏感性的影响及其机制研究

目的:探究过表达miR-122a是否可提高肝癌细胞HepG2对化疗药物的敏感性,并阐明其提高化疗药物敏感性的部分机制。方法:构建过表达miR-122a的HepG2细胞系(miR-122a肿瘤细胞组),并与HepG2细胞(肿瘤细胞组)置于含不同浓度顺铂的培养液中,CKK-8法观察miR-122a上调对HepG2细胞存活率的影响,Annexin V-PE/7-AAD双染法观察miR-122a上调对HepG2细胞凋亡率的影响;Western blot检测miR-122a肿瘤细胞组和肿瘤细胞组中bcl-2和p53蛋白的表达水平。结果:低铂浓度顺铂条件下,miR-122a肿瘤细胞组细胞的存活率低于肿瘤细胞组细胞的存活率,miR-122a肿瘤细胞组24 h细胞的凋亡率高于肿瘤细胞组(P<0.05);Western blot法检测bcl-2和p53蛋白结果显示,在低浓度顺铂溶液中,miR-122a肿瘤细胞组bcl-2表达量低于肿瘤细胞组(P<0.05),miR-122a肿瘤细胞组p53表达量高于肿瘤细胞组(P<0.05)。结论:过表达miR-122a能上调p53蛋白表达、下调bcl-2蛋白表达,增加HepG2细胞对顺铂敏感性,为肝癌患者提供基因治疗和降低肿瘤细胞耐药提供了理论和实验基础。

川芎嗪通过Rac1/LIMK1通路改善脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞骨架重构的研究

该文旨在从Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)/LIM激酶1(LIM kinase 1,LIMK1)通路探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)骨架重构的保护作用。采用Ⅷ因子免疫荧光鉴定原代内皮细胞;分别用0、50、100、200、300 ng/mL的LPS处理对数生长期的原代HUVECs;采用低、中、高3个剂量的TMP对HUVECs预处理12 h;利用F-actin免疫荧光染色观察细胞骨架变化;通过跨膜电阻值(transepithelial electrical resistance,TEER)和FITC-葡聚糖Transwell实验检测人脐静脉内皮细胞通透性;Western blot检测Rac1、LIMK1的表达以及相应磷酸化水平;免疫荧光观察磷酸化LIMK1蛋白的细胞定位和表达水平变化;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测Rac1和LIMK1的mRNA水平。结果显示,Ⅷ因子免疫荧光鉴定原代提取的内皮细胞符合要求;HUVECs经LPS诱导后,镜下形态由卵圆形向长梭形改变,纤维状肌动蛋白(filament actin,F-actin)增多增粗,TEER降低及单层内皮细胞通透性增加;Rac1、LIMK1的表达及磷酸化水平呈LPS梯度依赖性升高(P<0.05);低浓度的TMP降低LPS诱导的F-actin增多增粗作用,并降低Rac1、LIMK1的表达及其磷酸化水平(P<0.05);高浓度的TMP可以抑制Rac1激活(P<0.05),但对LPS诱导的HUVECs细胞骨架重构和通透性增加没有保护作用(P>0.05)。该研究结果表明,TMP通过Rac1/LIMK1通路保护LPS诱导的HUVECs骨架重构,抑制由LPS诱导的HUVECs通透性增大,对临床运用TMP改善由内皮细胞高通透性引起的急性肺损伤提供理论依据。