中国煤矿安全投入现状及其对策研究

中国煤矿安全投入除了量的不足之外,还存在投入结构不合理、缺乏相应制度(政策)约束与支持等问题。造成这些状况的根本原因在于,一些煤矿片面追求经济效益而对安全投入重视不够;改革发展中出现的一些特殊情况的影响。提出加大安全投入强度、优化安全投入结构、完善煤矿安全投入制度的对策。

天蚕抗菌肽B基因的化学合成及克隆

用化学合成法,我们设计、合成了一个以植物偏爱的遗传密码子编码的天蚕抗菌肽B基因。通过把该基因与M13mp19噬菌体载体重组、克隆;转化大肠杆菌JM103,杂交检测和序列测定,得到二个与设计一致的克隆。

人表皮生长因子基因的化学合成和克隆及其在酵母中的表达

用固相亚磷酰胺法合成了人表皮生长因子基因,全长为173个核苷酸,它被分成8个寡核苷酸,分别在DNA合成仪上合成。经分离纯化后的寡聚核苷酸进行酶促连接,然后被克隆到噬菌体M13mp18中,克隆经分子杂交、限制酶酶切以及DNA序列分析检测,证明合成的人表皮生长因子基因和设计的完全一致。将人表皮生长因子基因的DNA片段插入酵母分泌型表达载体YFD59 HindⅢ位点中,建成表达人表皮生长因子基因的质粒YFD104,再将此质粒转化酿酒酵母,所得转化子经摇瓶发酵、发酵上清液用受体结合试验表明有人表皮生长因子表达。

人恶性疟杂合多肽抗原基因化学合成及克隆

本文报道用固相亚磷酰胺法合成人恶性疟杂合多肽抗原基因。基因全长为216bp,分为10个寡聚核苷酸片段分别合成,然后经T4 DNA连接酶按设计顺序连接成完整的杂合抗原基因,重组到噬茵体M13 mp 18 RF DNA内,转染大肠杆菌JM109。用分子杂交和酶切分析筛选出重组克隆体。经序列分析,证明所合成的人恶性疟杂合多肽抗原基因与所设计完全一致。

人工合成人恶性疟原虫58肽抗原基因在大肠杆菌中的表达

使用DNA合成仪合成的人恶性疟原虫58肽抗原基因,与大肠杆菌表达性载体质粒PWR450—Ⅰ重组,转化到大肠杆菌JM83中。用斑点杂交技术和电泳分析DNA方法筛选出阳性重组转化菌株,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳分析,证明合成基因在大肠杆菌中表达,产生与β—半乳糖苷酶融合的多肽。

人α-心钠素全基因的化学合成

用固相亚磷酰胺法(solid-phase phosphoramidite method)合成了人α-心钠素(简称α-hANP)的全基因。合成的α-hANP基因全长为96bp,包括编码α-hANP的结构基因、基因5＇端的谷氨酸(作为表达产物用内肽酶Glu-C专一裂解的位点)密码子GAA、基因3＇端的终止信号TGA及基因两端的接头部分。基因分7个寡聚核苷酸片段在DNA合成仪上合成,然后一次性酶促连接成为完整的α—hANP双链基因。化学合成的基因克隆到M13载体上,经分子杂交鉴定筛选出的α-hANP基因克隆株,用双脱氧链终止法进行序列分析,证明核苷酸顺序正确。

人红细胞生成素全基因的化学合成及克隆

利用DNA合成技术,设计并合成人红细胞生成素(EPO)的全基因,EPO基因全长600 bp.首先合成32个小片段,经纯化后分别连接成相应的3个基因大片段,再将3个基因大片段组装成1个完整的EPO基因。用双脱氧末端终止法对基因大片段及全基因进行DNA序列分析,结果表明化学合成的基因序列与最初设计的EPO基因序列完全一致。

马铃薯纺锤形块茎类病毒基因的化学合成与克隆

马铃薯纺锤形块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTV)是一种由359个核苷酸组成的植物类病毒。本文介绍用化学法合成PSTV基因的工作。将整个基因分成173、168和18bp 3个片段,对两个大片段分别进行克隆,最后得到含有PSTY基因的单链DNA。 首先,根据PSTV的核苷酸序列得到其cDNA,将整个cDNA分成A、B、C3段,分别为1-173、174-341和342-359。为了下一步将cDNA转录到RNA的研究,在每一个片段的3’

间日疟原虫特异性DNA克隆片段的序列测定和分析

将重组质粒pVA1中的间日疟原虫特异性DNA片段插入到噬菌体M13mp18中,用双脱氧末端终止法测定插入DNA片段的核苷酸序列,该片段由261个bp(碱基对)组成,其中有3个HinfI核酸内切酶位点,无串联状重复序列.计算机检索和分析表明,该DNA片段与其他已测序列的疟原虫基因无明显同源性,是一个新克隆的间日疟原虫DNA片段.

人α-肿瘤坏死因子基因的高效表达

用人工合成的α-肿瘤坏死因子(TNF-α)基因构建了五个不同的表达质粒,它们不同之处是SD序列与起始密码子ATG间距离(D)各异。计算机模拟计算出翻译起始区域(TIR)中二级结构的最小生成自由能,以(D)为6个核苷酸时最小(绝对值)。它的表达效率也最高,产物TNF-α可达菌体总蛋白的60％。密码子的选用对表达效率有很大的影响,故人工合成TNF-α基因(选用大肠杆菌偏爱的密码子)的表达效率高于sc-DNA(对部分密码子改造的半合成cDNA)。

人心钠素的蛋白质工程研究——Ⅰ.一种人心钠素衍生物RH-1的基因合成及克隆表达

在心钠素结构改造的蛋白质工程研究中,本工作首次提出以“分子嵌合法”构建心钠素衍生物的设计思想,并设计了系列心钠素衍生物RH-1、RH-2和RH-3。为阻止羧肽酶对心钠素的降解,羧肽酶抑制剂SQ20881被串联于α-bANP的N端,二个脯氨酸被串联于C端,从而形成杂合的心钠素衍生物分子RH-1,衍生物RH-2仅在α-hANP的N端嵌合SQ20881,衍生物RH-3则只在α-hANP的C端嵌合二个脯氨酸。用DNA合成仪合成RH-1基因的全部10个片段,经纯化拼接成全基因,并经核苷酸序列分析得以确认。克隆RH-1基因于表达性载体pLSD-13,构成pRHL-1重组体,并经限制性内切酶分析和Southern杂交证明了RH-1基因的正确插入。用大肠杆菌N6405菌株表达该基因,SDS/PAGE分析证实了衍生物RH-1基因的表达。凝胶扫描表明,表达蛋白量约占细胞可溶性蛋白的11％。

马立克氏病病毒A抗原基因在原核系统中的表达

鸡马立克氏病是由病毒(Marek's Disease Virus,MDV)引起的鸡的一种传染性肿瘤病。目前主要靠细胞苗进行预防,这种方法不仅麻烦而且也不经济。随着对MDV的深入认识和近几年来生物技术的兴起。

恶性疟杂合45肽抗原基因的化学合成及克隆

本文报道用固相亚磷酰胺法成功地合成了人恶性疟杂合抗原基因(Human Plasmodiumfalciparum antigen gene,HPFAG)。其全长为162bp,包含有三个裂殖子重复多肽(83kDa、55kDa、35kDa)和两个环子孢子表面重复多肽,以及两端的接头,共分成8个大小不同的片段合成。分离纯化后的片段连接成完整的双链基因,与P-Blue script重组,转化E.coli JM109,经原位杂交和酶切分析,筛选出重组体,又经DNA序列分析测定,证明与所设计基因完全相同。

煤炭施工企业如何建立经营风险预警体系

为有效消除企业的各项经营风险,针对煤炭施工企业在生产经营过程中面临的经营环境各种风险因素,提出采用多变量模式与单变量模式相结合的方法,分别从宏观和微观两方面对企业的经营状况进行全方位的监控,建立和完善公司和项目部两级组织的经营风险预警体系的具体对策,以保证企业健康、持续发展。

FA601A型转杯纺纱机产生三大疵点的原因与防治措施

ＦＡ６０１Ａ型转杯纺纱机产生三大疵点的原因与防治措施ＦＡ６０１Ａ型转杯纺纱机系国产自排风式转杯纺纱机，我厂共安装９台，计１８００头，现已正常生产６年之久，在长期的生产实践活动中，我们感到，由于受机型和各主要部件的限制，该机易产生三大疵点：竹节纱、芝麻...

人α-心房肽基因的化学合成及其在酵母系统中的克隆和表达

按酵母密码系统化学合成人α-心房肽。为得到人α-心房肽基因的正确表达,少数碱基已按酵母简并密码予以替换,但在DNA序列互补的另一链的相应位点上的密码则未作相应的替换,故在局部上出现了不配对的格局。该基因已被克隆入带有α-factor外分泌型启动子的穿梭质粒pCLWA_2,含有编码人α-心房肽不同DNA序列的重组体已用Bg1 Ⅱ的限制性分析加以区别。比较两种基因所表达的人α-心房肽水平表明:含有酵母简并密码的基因所表达的人α-心房肽水平(0.5～0.7mg/L)低于按天然DNA序列合成的基因所表达的人α-心房肽水平(0.8～1mg/L)。

马立克氏病毒A抗原基因所在片段的鉴定及亚克隆

根据已知A抗原基因设计并人工合成了两段寡聚核苷酸片段并进行末端标记作为探针,与pAcyc184 MDV BamHI-B 质粒经过 EcoRI、pvu Ⅱ酶切电泳后作 Southern 转印杂交,其中2.2kb 片段杂交阳性.将此片段与 pBluescript(PBS)载体连接转化 E.coli JM109菌株,经原位杂交、酶切分析鉴定,得到3株 pBSA2.2k 阳性克隆.进一步酶切证明,A 抗原基因存在于此片段中.

eglinC基因的化学合成与克隆

采用固相亚磷酰胺法合成了ｅｇｌｉｎＣ全基因，该基因全长２２１ｂｐ，包括其结构基因，５＇－端起始密码子ＡＴＧ和３＇－端终止密码子ＴＡＧ，并在基因的５＇－和３＇－分别装上ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ位点．共分１２个片段，采取分段合成，酶促连接成完整的ｅｇｌｉｎＣ基因．合成的基因克隆于Ｍ１３载体，经杂交、检测，筛选出含ｅｇｌｉｎＣ基因的克隆．用双脱氧链终止法测其序列，结果与设计的一致．

降钙素基因的化学合成与克隆

本文报道用化学法全合成降钙素的基因。基因全长113碱基对。采用大肠杆菌偏爱密码子。整个基因分为6个片段合成。用T^4DNA连接酶一次连接成功,序列分析证明合成的基因序列与设计的一致。

Sequential check and computer analysis of a cloned DNA fragment specific for Plasmodium vivax

A cloned DNA fragment specific for Plasmodium vivax was cleaved from theplasmid pVA1 and ligated into phage M13mp18.The nucleotides of the insert were se-quenced by the dideoxy-chain termination procedure.The fragment was composed of 261base pairs and 3 Hinf Ⅰ sites but no tandem repeat sequences.Computer retrieval andanalysis show that the nucleotide sequence of the cloned DNA fragment is unique,forthere has not been any significant homologue with that of other Plasmodium genes pub-lished as yet.