维生素D介导鸡BMSCs和BMMs共培养体系中破骨细胞的形成

为探究1α, 25-(OH)2D3对鸡骨髓间充质干细胞(BMSCs)和骨髓单核巨噬细胞(BMMs)体外共培养体系中破骨细胞(OC)形成的影响,笔者对1α, 25-(OH)2D3处理后的细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)、骨吸收功能鉴定、OC标志基因mRNA和蛋白表达的检测。结果表明:1α, 25-(OH)2D3能够上调BMSCs中核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的表达,下调骨保护素(OPG)的表达。1α, 25-(OH)2D3处理共培养细胞5 d,OC数目较对照组明显增多,骨吸收活性较对照组极显著增强,基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Ⅱ型碳酸酐酶(CAⅡ)、组织蛋白酶K(CtsK)及TRAP等标志性蛋白的mRNA和蛋白表达极显著高于对照组(P<0.01),其中10-8 mol·L^-1 1α, 25-(OH)2D3效果最明显。结果表明,10-8 mol·L^-1 1α, 25-(OH)2D3能够介导鸡BMSCs和BMMs共培养体系中OC的形成,该OC具有骨吸收活性,为进一步研究OC在家禽骨骼及钙磷代谢紊乱性疾病中的作用机制奠定基础。

维生素D调控破骨细胞生命历程研究进展

维生素D是一种重要的类固醇类激素,其最高活性形式1,25 (OH)_2D_3参与机体多个系统功能的调控,在骨代谢调控中亦具有重要作用。破骨细胞(OC)是一种具有骨吸收功能的终末分化多核细胞, OC的数量及活性的异常与骨代谢疾病的发生有着密切的联系。维生素D能通过成骨细胞(OB)、骨细胞及软骨细胞等间接调控OC增殖、分化、活化及凋亡等生命历程,亦能直接调控OC形成和骨吸收活性。本文就维生素D调控OC生命历程的研究进行综述。

猫泛白细胞减少症诊治

猫泛白细胞减少症又称猫瘟热,多发于2~6月龄未防疫的猫,对宠物猫危害极大。导致猫泛白细胞减少症的病原为细小病毒科细小病毒属的猫细小病毒(FPV)。感染FPV的猫多表现为精神萎顿,食欲减退或废绝,呕吐,下痢,体温升高(>39.7℃),白细胞数减少。本病一年四季均可发生,以冬春季节发病率较高,不同性别的猫发病率有明显差异。猫瘟热传染性强、发病急,一岁以内、未进行过免疫或免疫不完全的幼猫比成年猫更易患病,且病情更加严重,死亡率更高。处于病毒血症期的感染动物可通过分泌物、呕吐物、尿液及粪便排出大量病毒。临床康复的水貂和家猫可在一年内持续向外排毒,是猫瘟热的主要传染源。

鸡胚成骨细胞分离培养方法的建立

为了寻找一种可以获得大量高纯度、活力强的鸡胚成骨细胞(osteoblast,OB)的分离培养方法,利用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶2次消化法分离18日龄鸡胚颅盖骨细胞。CCK-8法、台盼蓝染色对其进行增殖和活性鉴定;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和茜素红染色(alizarin red staining)对其进行特异性染色鉴定;实时荧光定量PCR扩增检测鸡胚OB标志性基因Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、ALP、成骨细胞特异性转录因子(osteoblast specific transcription factor,OSX)mRNA的表达。结果显示,分离的细胞活性较强,具有良好的增殖能力,ALP和茜素红染色均呈强阳性,能高表达ALP、Runx2、OSX基因;表明所分离的颅盖骨细胞具有OB特性,活性强,纯度高,为进一步探讨家禽骨骼疾病的发生及防控机制奠定基础。

扬州某鸡场笼养蛋鸡产蛋期血清骨代谢指标动态变化

弄清家禽骨代谢规律是研究骨代谢疾病的关键。骨代谢指标能够反映骨转换率,但其在产蛋期蛋鸡血清中动态变化规律仍不清楚。本研究采集了江苏省扬州市某鸡场蛋鸡开产前、产蛋中期及产蛋高峰期血液,通过全自动生化分析仪及ELISA方法检测了血清钙(Ca)、磷(P)、甲状旁腺激素(PTH)、降钙素(CT)、骨钙素(BGP)、骨碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型前胶原N端前肽(PINP)、Ⅰ型胶原C末端肽(CTX-Ⅰ)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、半乳糖凝集素3(gal-3)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)以及骨保护素(OPG)浓度,观察了上述指标在蛋鸡产蛋期血清中的动态变化规律。结果显示:与开产前相比,产蛋初期与产蛋高峰期血P无明显变化,血Ca水平明显上升,产蛋高峰时血Ca浓度可达4.0 mmol/L左右;血清PTH、CT、BGP、BALP、PINP、CTX-Ⅰ、TRAP、gal-3、RANKL以及OPG浓度不断下降,且与血Ca水平呈负相关。研究表明,随着产蛋日龄增加和石粉的添加,该鸡场蛋鸡骨转换率降低,骨形成与骨吸收相对稳定。

β-catenin在lα,25-(OH)2D3调控小鼠体外破骨细胞形成中的作用

旨在探究β-catenin在lα,25-(OH)2D3调控小鼠体外破骨细胞(osteoclast,OC)形成中的作用。体外诱导小鼠OC形成,添加1α,25-(OH)2D3观察其对OC形成及β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响;敲低β-catenin进一步观察1α,25-(OH)2D3对OC形成的影响。结果显示,1α,25-(OH)2D3极显著(P<0.01)抑制体外培养小鼠OC形成和骨吸收活性。敲低β-catenin,OC数量及OC形成标志物基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白和激活T-细胞核因子1(nuclear factor of activated T cells,cytoplasmic 1,Nfatc1)mRNA表达显著(P<0.05)升高。1α,25-(OH)2D3可促进OC形成过程中β-catenin基因Ctnnb1 mRNA的表达,但敲低β-catenin基因,1α,25-(OH)2D3仍可抑制OC形成。试验表明,β-catenin可抑制体外培养OC形成,但对1α,25-(OH)2D3抑制OC形成无影响。

1例犬黄曲霉毒素中毒的诊断分析

为进一步研究犬黄曲霉毒素中毒的特征以及为临床上犬的黄曲霉毒素中毒的诊断提供参考,针对江苏省连云港市某犬场的柯基犬和斗牛犬黄曲霉毒素中毒的病例,采用病史和流行病学调查、临床症状观察、血常规和血液生化检测、病理剖检以及组织切片制作、酶联免疫试剂盒检测黄曲霉毒素等方法,对中毒犬进行诊断分析。结果显示：饲料中检测出黄曲霉毒素,中毒犬白细胞均高于正常值,肝脏病变严重,胃肠黏膜出血,肝细胞和肾小管上皮细胞发生脂肪变性,柯基犬死亡率高达24%。结果表明：该场犬发生了以肝脏病变为主的黄曲霉毒素急性中毒。

镉对体外培养鸡骨髓基质细胞成骨分化的毒性作用

骨是镉毒性作用的主要靶器官之一,但其对鸡骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)增殖和成骨分化的毒性作用仍不清楚。本研究利用差速贴壁纯化法获得鸡BMSCs,加入不同浓度镉处理不同时间,采用CCK-8法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和茜素红染色鉴定成骨分化,RT-PCR检测成骨相关基因(COL1、OSX、RUNX2、ALP、OCN、OPG、OPN、RANKL)表达变化。结果显示,1~10μmol/L的镉显著促进BMSCs增殖,20μmol/L的镉显著抑制其增殖(P<0.05);5μmol/L以上的镉可显著抑制ALP活性,并以浓度依赖方式极显著抑制成骨相关基因(COL1、OSX、RUNX2、ALP、OCN、OPG、OPN)mRNA表达,上调RANKL mRNA表达(P<0.01)。表明,一定浓度镉可抑制鸡BMSCs体外增殖及其向成骨细胞(OB)的分化。

lα,25-(OH)2D3对体外培养小鼠破骨细胞形成及活性的影响

目的研究1α,25-(OH)2D3对体外培养小鼠破骨细胞(osteoclast,OC)分化及骨吸收的直接影响。方法采用核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导体外培养C57BL/6J小鼠OC前体分化成OC。RTCA检测细胞增殖、抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测OC数量、Western blot检测OC骨吸收功能相关蛋白和转录因子蛋白表达水平、免疫荧光和扫描电镜观察OC骨架和形态、骨细胞培养板分析骨吸收陷窝面积,观察10 nM 1α,25-(OH)2D3对OC形成及骨吸收功能的影响。结果 10nmol/L1α,25-(OH)2D3对细胞增殖无显著影响,但能显著抑制OC形成,抑制骨吸收功能相关蛋白和转录因子蛋白的表达,阻碍OC骨架肌动蛋白环和伪足小体的形成,减弱OC骨吸收功能。结论1α,25-(OH)2D3能抑制体外培养小鼠OC的形成及骨吸收功能,在钙磷代谢紊乱及骨骼疾病中对OC具有直接调控作用。