菜豆荚斑驳病毒（Bean pod mottle virus，BPMV）在美国东部和南部的大豆产区广泛分布。该病毒能够造成3％～52％的产量损失并使大豆品质降低，目前我国未见其分布。针对进口大豆种子的植物病毒检测，本文建立了半巢式RTPCR技术检测BPM...菜豆荚斑驳病毒（Bean pod mottle virus，BPMV）在美国东部和南部的大豆产区广泛分布。该病毒能够造成3％～52％的产量损失并使大豆品质降低，目前我国未见其分布。针对进口大豆种子的植物病毒检测，本文建立了半巢式RTPCR技术检测BPMV的方法。该方法采用Trizol快速提取大豆种子病毒总RNA，并根据BPMV的外壳蛋白编码基因设计特异性引物，经第一轮RT—PCR和第二轮半巢式PCR扩增．分别得到275bp和196bp大小的特异性基因片段。半巢式RT—PCR扩增产物的测序表明，该产物序列与BPMV的外壳蛋白编码基因存在91％～95％的高度同源性。检测灵敏度比较研究显示，DAS—ELISA与RT—PCR的检测灵敏度相近，半巢式RT—PCR的检测灵敏度比这2种方法高出10^3倍以上。展开更多
文摘菜豆荚斑驳病毒（Bean pod mottle virus，BPMV）在美国东部和南部的大豆产区广泛分布。该病毒能够造成3％～52％的产量损失并使大豆品质降低，目前我国未见其分布。针对进口大豆种子的植物病毒检测，本文建立了半巢式RTPCR技术检测BPMV的方法。该方法采用Trizol快速提取大豆种子病毒总RNA，并根据BPMV的外壳蛋白编码基因设计特异性引物，经第一轮RT—PCR和第二轮半巢式PCR扩增．分别得到275bp和196bp大小的特异性基因片段。半巢式RT—PCR扩增产物的测序表明，该产物序列与BPMV的外壳蛋白编码基因存在91％～95％的高度同源性。检测灵敏度比较研究显示，DAS—ELISA与RT—PCR的检测灵敏度相近，半巢式RT—PCR的检测灵敏度比这2种方法高出10^3倍以上。
文摘为给小麦线条花叶病毒(Wheat streak mosaic virus,WSMV)的灵敏、稳定、快速检测提供依据,根据该病毒不同分离株外壳蛋白(Coat protein,CP)基因的保守序列,设计了特异性引物与Taq Man MGB荧光探针,建立了WSMV的实时荧光RT-PCR检测方法。结果表明,本研究设计的Taq Man MGB荧光探针对WSMV的检测具有很好的特异性,解决了因病毒不同分离物之间基因组变异较大、难以找到长片段保守序列来设计探针的困难。该方法无需任何PCR后处理,基因污染风险小。它与双抗体夹心酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高1 000倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合于WSMV的快速检测。
