BCR-ABL融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断中的价值

目的:探讨BCR-ABL融合基因检测对慢性粒细胞白血病(CML)鉴别、诊断的价值,以及对慢性粒细胞白血病各个病程(慢性期、加速期与急变期)进行监测的临床意义。方法:应用实时荧光定量PCR方法对临床常见骨髓增殖性肿瘤(慢性粒细胞白血病、真性红细胞增多症和原发性血小板增多症)患者标本进行BCR-ABL融合基因的定量检测。结果:慢性粒细胞白血病初发患者中,BCR-ABL融合基因水平均阳性,而真性红细胞增多症和原发性血小板增多症均为阴性。在CML患者中,初发患者与加速期和急变期的患者相比,白细胞计数、血红蛋白含量和血小板计数的差异具统计学意义,P值分别为0.046、0.039和0.001,而BCR-ABL融合基因水平的差异无统计学意义;初发与缓解后患者的BCR-ABL融合基因水平相比,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:BCR-ABL融合基因检测可以对CML与临床常见骨髓增殖性肿瘤做鉴别诊断,并对其病程进行监测,是一个有价值的指标,可为临床用药提供依据。

融合基因在急性髓系白血病中的检测及临床意义

目的:通过检测初发和缓解急性髓系白血病(AML)患者的融合基因,分析融合基因对AML患者诊断、病程监测及预后评估的意义。方法:选取江苏大学附属人民医院2016年1月—2022年1月确诊为AML的患者标本105例,对AML患者标本进行白血病相关融合基因检测,留取骨髓血5 mL,应用多重RT-PCR法,部分阳性融合基因采用RQ-PCR法。结果:90例初发患者中,63.33%的患者出现融合基因,其中HOX11融合基因阳性率最高(26.67%);3例出现复合型融合基因,其中,2例患者同时出现AML1-ETO和HOX11融合基因,阳性率为2.22%;1例患者同时出现HOX11和MLL-AF10融合基因,阳性率为1.11%;M3患者均检出PML-RARa融合基因。9例缓解患者融合基因水平与初发时相对含量相比,差异具有统计学意义(P=0.0039)。当患者出现病情反复时,其融合基因水平也随病情变化。结论:本研究通过对初发及缓解AML患者的相关融合基因检测,发现融合基因的检测对AML患者诊断、病程监测及预后评估具有较好的临床意义。

四色与八色流式细胞术检测急性髓细胞白血病微小残留病灶的比较分析

目的比较分析四色和八色流式细胞术检测急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)相关性、阳性率和比例差异。方法采用骨髓细胞形态学方法、四色流式细胞术和八色流式术检测22例AML患者的40份骨髓标本中微小残留病灶。通过Pearson相关性分析比较骨髓细胞形态学方法、四色和八色流式细胞术检测MRD结果之间的相关性,通过Mann-Whitney检验分析MRD比例之间的差异。结果四色和八色流式细胞术检测40份AML患者骨髓MRD相关性较好(R^(2)=0.9922,P<0.0001),同时四色、八色流式与骨髓细胞形态学检测MRD相关性好(四色:R^(2)=0.8453,P<0.0001;八色:R^(2)=0.8065,P<0.0001)。两种流式细胞术检测40份骨髓MRD阳性率均为85%,两者阳性率一致。四色流式细胞术分析MRD比例均值为6.45%(0.04%~45%),中位数为0.4%;八色流式细胞术分析的MRD比例均值为6.20%(0.04%~44.81%),中位数为0.37%。八色流式分析MRD比例略低于四色流式,但两者MRD比例差异没有统计学意义。四色和八色流式分析MRD比例均小于骨髓细胞形态学检测比例(P分别0.020,0.016)。结论四色和八色流式细胞术检测骨髓标本MRD相关性较好,阳性率一致。八色流式分析MRD结果可靠,适合临床流式分析使用。

肿瘤抗原MUC1调节骨髓来源抑制细胞的产生

目的探讨MUC1对骨髓来源抑制细胞(MDSC)产生的影响。方法将过表达MUC1细胞(B16-MUC1)和对照细胞(B16-neo),接种于C57BL/6小鼠皮下,待肿瘤形成后,取骨髓、外周血、腹腔液和脾,通过流式细胞术检测MDSC细胞数量;分离C57BL/6小鼠股骨骨髓细胞,分别与B16-MUC1和B16-neo细胞共同培养24 h和48 h,通过流式细胞术检测MDSC细胞;采用Transwell小室法分析MUC1对MDSC细胞的趋化作用;流式细胞术检测MDSC细胞中MUC1蛋白表达。结果与接种B16-neo组C57BL/6小鼠相比,B16-MUC1细胞接种组小鼠在腹腔液和外周血中CD11b+GR-1+MDSC细胞含量明显降低(P<0.05);正常C57BL/6小鼠骨髓细胞分别与B16-neo和B16-MUC1细胞分别共同培养24 h和48 h后,与B16-neo细胞共同培养组相比,B16-MUC1细胞共同培养组的CD11b+GR-1+MDSC含量明显减少,具有统计学意义(P<0.01);另外,与B16-neo培养组相比,B16-MUC1细胞共同培养组迁移至滤膜下的MDSC细胞数量增加(P<0.05);骨髓细胞与B16-MUC1细胞共同培养组的MDSC细胞中,MUC1的表达增高。结论 MUC1能够抑制骨髓来源抑制细胞(MDSC)的产生,参与MDSC的募集,并诱导MDSC自身表达MUC1蛋白。

大鼠胃炎癌转化模型建立与早期诊断方法探索

目的构建大鼠胃炎癌转化模型,探索新的胃癌早期血清学诊断指标。方法采用N-甲基-N'-硝基-N'-亚硝基胍饮水(MNNG)协同高盐饲料喂养的方法诱导大鼠胃炎癌转化模型。核磁共振成像及组织病理学观察大鼠胃部恶化过程。qRT-PCR检测不同时间点(造模第0,12,24,36,48周)大鼠血清miR-17-5p和miR-374-5p表达水平。结果 MNNG饮水协同高盐饲料喂养成功诱导大鼠胃炎癌转化,经历萎缩性胃炎(造模第24周)和不典型增生(造模第48周)的过程。血清中miR-17-5p和miR-374-5p的表达水平与大鼠胃部恶化程度正相关。与正常对照组相比,第36、48周时,miR-17-5p表达水平分别增加约8倍(t=4.12,P<0.001)和10倍(t=5.33,P<0.001);第48周时,miR-374-5p表达水平增加约6倍(t=3.62,0.001<P<0.002)。结论MNNG饮水协同高盐饲料喂养构建的大鼠胃炎癌转化模型为研究胃癌发病机理提供了良好的动物模型,血清miR-17-5p和miR-374-5p是潜在的胃癌早期无创诊断指标。

人胚胎干细胞向间充质干细胞分化的初步研究

目的建立人胚胎干细胞(hESCs)向间充质干细胞(MSCs)分化方法,并初步鉴定hESCs来源的MSCs(hESC-MSCs)。方法用拟胚体法将hESCs分化为MSCs,对其形态进行观察;用流式细胞术检测细胞表面标志;测定细胞化学染色特性。结果 hESC-MSCs形态与人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)相似;流式细胞分析显示hESC-MSCs表达CD29、CD44、CD13,但不表达CD14、CD133、CD34、CD45、HLA-DR;细胞化学染色显示,hESC-MSCs碱性磷酸酶阴性,过碘酸-雪夫反应弱阳性。结论hESCs在体外可分化为hESC-MSCs,hESC-MSCs符合MSCs特性。

慢性髓系白血病SOX17基因表达及甲基化的临床研究

目的:分析慢性髓系白血病(CML)患者SOX17基因表达、启动子甲基化及其临床的相关性。方法:使用RQ-PCR和RQ-MSP技术分别检测SOX17转录本及启动子甲基化水平。结果:34例CML患者中SOX17转录本含量明显低于30例对照(P=0.001);接收者操作特征曲线显示SOX17表达的CML曲线下面积为0.748(P=0.001);SOX17和bcr/abl转录本水平呈正相关趋势(r=0.439,P=0.068)。3例(4%)CML患者出现SOX17启动子高甲基化改变,与32例对照无统计学差异。SOX17表达与启动子甲基化程度无相关性。结论:SOX17表达下调是CML的一个常见分子事件、对CML疾病诊断具有辅助价值;SOX17表达下调不是启动子甲基化所致。

长链非编码RNA CASC15低表达在伴NPM1基因突变的急性髓系白血病中的临床意义

目的:确定急性髓系白血病(AML)患者骨髓样本中长链非编码RNA CASC15的表达水平及甲基化水平,并进一步探讨其在AML中的临床意义。方法:纳入82例初治AML患者和18例健康对照者,同时分析了来自GEO和TCGA等7个公共数据集中的CASC15表达和甲基化数据。应用ROC曲线分析确定CASC15表达对AML患者的鉴别意义;使用X-tile方法将患者分为CASC15高表达组和CASC15低表达组,并采用Kaplan-Meier法及单因素和多因素Cox回归分析确定CASC15的预后价值。结果:与健康对照者相比,CASC15在AML患者骨髓细胞中表达显著降低(P<0.001)。ROC曲线分析结果表明,CASC15表达可能是鉴别AML的潜在生物标志物。CASC15在造血过程的早期阶段表达水平较高,在多能祖细胞分化阶段达到峰值,然后迅速下降至低值波动。在FAB亚型中,CASC15在M0中的表达水平显著高于M1-M7。CASC15低表达患者更有可能发生NPM1突变(P=0.048),而高表达患者更易发生IDH1(P=0.021)和RUNX1(P=0.014)突变。在伴NPM1突变的AML患者中,CASC15低表达患者的总体生存时间更短,多因素分析也证实CASC15表达是伴NPM1突变的AML患者总体生存时间的独立影响因素。此外,CASC15在AML患者骨髓样本中的甲基化水平较健康对照者显著降低,高甲基化患者总体生存时间和无病生存时间更短。结论:CASC15在AML中表达降低,并且CASC15低表达提示伴NPM1基因突变的AML预后不良。CASC15在AML中甲基化水平显著降低,高甲基化可能预示患者预后不良。

急性髓系白血病骨髓单个核细胞EphrinB2基因表达及其临床意义

目的:探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者骨髓EphrinB2基因的表达情况并分析其临床意义。方法:应用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)技术检测91例AML患者(观察组)及32例非恶性血液病患者(对照组)骨髓单个核细胞标本的EphrinB2表达水平。结果:AML患者中EphrinB2表达水平比对照组明显下调(P<0.01)。EphrinB2表达水平与AML患者的性别、外周血白细胞计数、血小板计数、血红蛋白含量、FAB分型及核型分组之间均无相关性(P>0.05),但低表达患者的年龄明显低于高表达患者(P=0.011)。接收者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析表明,ROC曲线下面积0.812(95%CI:0.726~0.898;P<0.01)及0.776(95%CI:0.670~0.883;P<0.01)可分别用于区分AML患者与对照组及细胞遗传学正常的AML患者与对照组。EphrinB2低表达组患者与高表达组患者的化疗后完全缓解率及总生存时间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:EphrinB2表达下调是AML患者中的一个常见分子事件,但对患者预后并无明显影响。

慢性髓系白血病miR-378甲基化研究

目的:探讨miR-378基因启动子在慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中的甲基化状态,并分析其临床意义。方法:运用实时定量甲基化特异性PCR(real-time quantitative methylation-specific PCR,RQ-MSP)分别检测25例健康供髓者及53例CML患者骨髓单个核细胞中miR-378基因启动子未甲基化水平。结果:17/53例(32.1%)CML患者miR-378基因低甲基化,与对照组仅1/25例(4.0%)相比,两组差异有显著统计学意义(P<0.01)。CML慢性期、加速期、急变期患者miR-378未甲基化频率分别为14/40例(35.0%)、2/5例(40.0%)、1/8例(12.5%),但CML患者不同分期以及核型分组之间的miR-378基因未甲基化水平并无明显差异。未甲基化阳性与阴性组患者的年龄、白细胞计数、血小板计数、血红蛋白含量以及BCR/AABL1融合基因转录水平无显著差异(P>0.05)。结论:miR-378基因低甲基化是CML中常见的分子事件,并且主要见于CML慢性期和加速期患者。

气相色谱-质谱联用法快速检测黄酒和醋中17种邻苯二甲酸酯

目的建立黄酒和醋中塑化剂的液液萃取-气相色谱-质谱联用法(GC-MS)快速检测技术。方法通过对不同提取液的比较,选择以乙酸乙酯-正己烷为提取液,采用HP-5MS色谱柱进行程序升温和分离测定,以内标法定量测定本地市售的13种黄酒和34种醋中17种邻苯二甲酸酯的含量。结果在本实验条件下,17种塑化剂的分离效果较好,当质量浓度的线性范围为0.10 mg/L^1.00 mg/L时,相关系数(r)为0.990~0.999,标准曲线的线性关系良好。17种PAEs的检出限除BMEP、DEEP、BBP的检出限为0.05 mg/kg外,其他均为0.025 mg/kg。黄酒中17种PAEs的回收率和RSD分别为74.7%~102.7%和2.7%~7.9%,醋中的回收率和RSD分别为70.0%~96.0%和2.5%~9.3%。结论该方法操作简单、可靠,可用于黄酒和醋中多种邻苯二甲酸酯类化合物的快速确证与定量检测。

肿瘤抗原MUC1抑制骨髓来源抑制细胞产生的机制

目的探讨肿瘤抗原MUC1抑制骨髓来源抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)产生的机制。方法分离C57BL/6小鼠股骨骨髓细胞,分别与稳定表达含22个串联重复序列的全长人MUC1 cDNA片段的B16细胞(B16-MUC1)和空质粒对照B16细胞(B16-neo)培养上清共培养,流式细胞术分析MUC1对MDSC产生及MDSC表达MUC1蛋白的影响;瑞氏姬姆萨染色观察MUC1对骨髓细胞生长形态的影响;流式细胞术检测共培养的骨髓细胞中单核细胞和巨噬细胞标志物CD14和F4/80的表达及成熟单核-巨噬细胞标志物CD11b和CD68的表达。结果正常C57BL/6小鼠骨髓细胞分别与B16-neo和B16-MUC1细胞培养上清共培养24和48 h后,BM+B16-MUC1组骨髓细胞中CD11b+Gr-1+MDSC数量较BM+B16-neo组均明显减少(P<0.05),共培养48 h后,BM+B16-MUC1组的CD11b+Gr-1+MDSC中MUC1蛋白的表达较BM+B16-neo组明显增多(P<0.01);BM+B16-MUC1组骨髓细胞中单核-巨噬细胞数量增多;与BM+B16-neo组相比,BM+B16-MUC1组CD14+、F4/80+和CD68+细胞表达数量明显增高(分别为P<0.01、P<0.01、P<0.05),CD11b+平均荧光强度明显增高(P<0.01)。结论 MUC1通过诱导骨髓细胞向单核-巨噬细胞分化,从而抑制MDSC的产生。

超高效液相色谱-串联质谱法测定醋和黄酒中的邻苯二甲酸酯类塑化剂

目的建立醋和黄酒中13种邻苯二甲酸酯类塑化剂的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。方法样品加入适量盐后,经乙酸乙酯-正己烷(1∶1,V/V)提取,涡旋离心后,吸取上清液浓缩吹干,用甲醇定容后进液相色谱-串联质谱系统分析,内标法定量。色谱柱采用Agilent EC-C18柱(2.1 mm×75 mm,2.7μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸,进行梯度洗脱;质谱采用电喷雾离子源,在正离子多反应监测模式下进行检测。结果 13种邻苯二甲酸酯类塑化剂在10 ng/ml^500 ng/ml线性关系良好(r≥0.995 0);检出限和定量限分别为0.1 ng/ml^0.8 ng/ml和0.3 ng/ml^2.5 ng/ml;低、中、高3种浓度(20 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml)的回收率分别为90.2%~114.2%、97.1%~114.3%、94.7%~107.0%,精密度(RSD)分别为3.1%~13.0%、4.5%~12.1%、3.8%~9.4%。结论该方法简便、灵敏、准确、稳定,适用于醋和黄酒中邻苯二甲酸类塑化剂的测定。