响应面法优化金钱白花蛇蛋白质的酸提工艺

以金钱白花蛇为原料,通过酸提法提取金钱白花蛇中的蛋白质,以蛋白质得率为指标,在单因素试验基础上通过响应面法优化提取工艺,并对提取物进行指纹图谱分析。结果表明:最佳酸提条件为醋酸钠浓度0.20mol/L、料液比1∶40(g/mL)、提取时间6 h、提取温度45℃,在此条件下蛋白质得率为3.92%。指纹图谱分析表明,酸提法所得金钱白花蛇的蛋白质种类较丰富。

响应面法优化金钱白花蛇醇溶蛋白提取工艺

以金钱白花蛇为原料,在单因素试验基础上采用响应面法优化其醇溶蛋白提取工艺,并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、高效液相色谱(HPLC)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)指纹图谱分析。结果表明:最佳提取工艺条件为乙醇体积分数40%、料液比1∶17(g/mL)、提取时间4 h、提取温度40℃,此时醇溶蛋白得率为0.51%。SDS-PAGE指纹图谱分析表明金钱白花蛇醇溶蛋白分子质量主要介于26.69~88.02 kDa,26.69~28.34 kDa和70.84~88.02 kDa处的蛋白质丰度较高,分别占蛋白质总量的55.2%和31.8%;HPLC结果表明,主要金钱白花蛇醇溶蛋白的保留时间为2.928和3.452 min;FTIR结果表明,金钱白花蛇醇溶蛋白在3526.67、2918.31、2357.83、1940.24、1354.05、841.90、546.07和444.52 cm^(-1)处有特征吸收峰。试验结果可为金钱白花蛇醇溶蛋白资源的开发利用及药理活性研究提供依据。

僵蚕药材蛋白质分级指纹图谱建立及产地鉴定相关分子研究

建立云南与四川僵蚕药材的总蛋白质指纹图谱及分级指纹图谱,对比分析以发现其中的差异表达蛋白质分子并进行鉴定及生物信息学分析,探索其用于产地鉴定的可行性。提取两种僵蚕的酸溶、碱溶、水溶及醇溶性总蛋白质,对其进行丙酮分级沉淀,对所得样品进行SDS-PAGE指纹图谱对比分析,对所得差异条带进行LC-MS/MS分析,数据库检索后进行生物信息学分析。两种僵蚕的总蛋白质指纹图谱相似度很高,难以据此进行产地鉴定;两种僵蚕的分级指纹图谱则有较显著差异,有望用于产地鉴定;依据分级指纹图谱差异共鉴定出β-葡萄糖苷酶、抗胰凝乳蛋白酶、抗胰蛋白酶、含脂肪酶结构域蛋白等273种蛋白质。云南与四川僵蚕的蛋白质组成及其分级指纹图谱存在显著差异,有望用作产地鉴定的分子依据;醇溶蛋白质构建分级指纹图谱可以提供更加丰富的信息及更好的分辨率;分级指纹图谱技术具有简便易行、分辨率较高的优点,为其他中药材的产地鉴定研究提供了方法学思路。

金钱白花蛇碱溶性蛋白质的提取工艺优化及其表征

目的:优化金钱白花蛇碱溶性蛋白质(bmASP)的提取工艺,并对其进行SDS-PAGE、HPLC、FTIR表征。方法:在单因素试验基础上,以提取pH值、料液比、提取时间和提取温度为自变量,bmASP提取率为因变量,基于Box-Behnken组合设计对提取工艺进行响应面优化,对提取产物进行HPLC、FTIR、SDS-PAGE分析。结果:最佳提取工艺条件为:提取pH值为8.0,料液比为1∶40(g/mL),提取时间为5.0 h,提取温度为45℃,bmASP提取率为5.96%。HPLC结果表明bmASP的保留时间为2.998、4.745、4.977、5.672 min;FTIR结果表明bmASP在3 551.45、3 575.95、3 413.06 cm^(-1)等处有特征吸收峰;SDS-PAGE指纹图谱结果表明bmASP分子量介于18.4~116 kDa,其中18.4~19.5 kDa、23.38~25.11 kDa、32.53~38.64 kDa、58.62~65.96 kDa的蛋白质含量丰富。结论:bmASP提取工艺的响应面模型可靠有效,结果稳定,可为金钱白花蛇药效物质基础的研究、资源开发利用及真伪鉴定提供实验依据。

白芷醇溶蛋白质提取工艺优化及其指纹图谱研究

目的:基于响应面设计优化白芷醇溶蛋白质提取工艺,并研究其指纹图谱特征。方法:首先考察液料比、提取时间、乙醇浓度、提取温度四个单因素对白芷醇溶蛋白质提取率的影响,再通过Box-Behnken方法对影响提取率的工艺因素进行响应面优化,最后对白芷及易混淆药材的醇溶蛋白质指纹图谱进行对比分析。结果:最佳提取工艺条件为:液料比13∶1(mL/g),提取时间8.75 h,乙醇浓度42%,提取温度45℃,在此条件下提取率为0.294%。SDS-PAGE分析表明白芷醇溶蛋白质样品分子量范围介于15~95 kDa,91.4 kDa与65.6 kDa分子为高丰度蛋白质。此外,白芷与天花粉、粉葛、山药的醇溶蛋白质指纹图谱有显著差异。结论:利用响应面法优化了白芷醇溶蛋白质的提取工艺,并建立其专属性SDS-PAGE指纹图谱,为其分子鉴定及资源开发提供实验依据。

Tricine蛋白质电泳定量检测溶菌酶方法的研究

利用三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)蛋白质电泳测定蛋清中溶菌酶含量,测得散养鸡蛋清、鹌鹑蛋清、笼养鸡蛋清中溶菌酶含量分别为2.074 8、1.890 4、0.897 8 mg/mL。该方法简便易行、稳定性好,可用于溶菌酶制备工艺中原料及各阶段样品的含量检测,也可以用于测定其他类似的小分子蛋白质含量。

白芷在斑马鱼中的降血糖作用及分子对接研究

目的:初步确定白芷对斑马鱼的降糖作用,并通过分子对接分析其降血糖作用的主要活性成分和关键的结合蛋白。方法:1%葡萄糖诱导6月龄雄性斑马鱼建立高糖模型,以二甲双胍(5 mg/L)为阳性对照药,白芷75%乙醇提物低剂量组(含生药量66 mg/L)和高剂量组(含生药量200 mg/L),连续给药7 d,断尾测血糖。分子对接中以白芷中含量较高的欧前胡素(1)、异欧前胡素(2)等16个化合物为配体,蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP1B)等6个蛋白为受体,采用AutoDock Vina软件进行对接,依据结合能虚拟筛选白芷中降血糖活性成分并初步确定降糖关键蛋白。结果:白芷有明显的降斑马鱼高血糖作用,低剂量组和高剂量组斑马鱼的血糖值较模型组分别降低了27.1%和41.2%。分子对接中香豆素类化合物1~5和9、倍半萜类化合物10的结合能较化合物11~16更高,其中氧化前胡素(4)与醛糖还原酶(AR)的结合力最强,结合能为-9.2 kcal/mol,欧前胡素(1)、珊瑚菜素(3)、白当归脑(6)与AR间的结合能也较高,均超过-9.0 kcal/mol。异欧前胡素(2)、水合氧化前胡素(5)与过氧化酶增殖受体(PPARγ)、二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)和PTP1B的结合能力也较强,均超过-7.5 kcal/mol。结论:白芷具有降血糖作用,其主要物质基础可能是香豆素类成分;蛋白AR、PPARγ、PTP1B、DPP-Ⅳ是其潜在的作用靶点。

响应面分析法优化重组原动蛋白2β诱导条件的研究

原动蛋白2β(PK2β)是近年新发现的一个选择性激活PKR1的蛋白质因子。采用响应面分析法(RSM)研究了利用重组BL21(DE3)表达PK2β的最优诱导条件。结果表明,诱导时机与诱导物浓度对PK2β的表达水平具有显著性影响,但诱导时间不具有显著性影响。试验数据拟合与极值分析表明最优诱导条件为工程菌OD600为0.50时,采用终浓度为0.11 mmol/L的IPTG在37℃诱导培养7.73 h,此时PK2β表达水平可达242.78 mg/L。验证试验结果表明,重组PK2β的表达水平比优化前提高了46%,而IPTG的用量减少了89%,有利于大量制备该蛋白质进行后续功能研究及应用研究。

聚乙二醇沉淀蛋清蛋白质的规律及在卵白蛋白分离中的应用

研究3种pH值条件下4种聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)对卵白蛋白(ovalbumin,OVA)、卵转铁蛋白(ovotransferrin,OVT)与溶菌酶(lysozyme,LYZ)的沉淀效率,根据变化规律建立无需后续脱盐的OVA分离新工艺。结果表明:PEG 4000、6000、8000及10000均可有效沉淀OVA、OVT及LYZ,沉淀率受PEG质量分数及pH值影响。其中pH 7.5、PEG 4000质量分数12%时,OVA、OVT及LYZ的沉淀率相差最大,当pH值从7.5调至5.5时,3种蛋白质沉淀率的变化幅度相差也最大。由此建立如下分离工艺:首先向pH 7.5的蛋清液中加PEG 4000至质量分数为12%,离心收集上清液,即得纯度88.1%的OVA,提取率为95.1%;再将所得上清液pH值调至5.5,离心收集上清液,所得OVA纯度提高至99.7%,提取率为87.3%。该工艺简便易行,有利于OVA的大规模制备及在食品及医药领域的应用。

聚乙二醇沉淀联用双水相萃取法纯化蛋清溶菌酶的研究

研究以聚乙二醇(Polyethylene Glycol,PEG)沉淀法联用PEG-硫酸铵双水相萃取体系纯化蛋清溶菌酶的工艺。结果表明,向预处理的鸡蛋清液中加PEG 4000至质量分数为16%时,可选择性沉淀除去蛋清中98.1%的杂蛋白,随后向上清液中加硫酸铵溶液至其质量分数为4.32%,可以构建PEG-硫酸铵双水相体系,分离上相即得高纯度溶菌酶。该法所得产物中96.34%为溶菌酶,其余为PEG 4000,不含有其它杂蛋白,溶菌酶总回收率达70.2%,比活为25 000 U/mg。该法简便易行,易于放大,每毫克精制溶菌酶中仅残留36.6μg PEG 4000,生物安全性较高。

肿瘤饥饿疗法的新靶标——内分泌腺衍生血管内皮生长因子

"肿瘤饥饿疗法"是通过抑制促肿瘤血管新生细胞因子的作用,阻断肿瘤血管形成,最终实现"饿死"肿瘤细胞的一种治疗方法.内分泌腺衍生血管内皮生长因子(EG-VEGF)是在2001年被发现的一个组织选择性促血管新生因子.近年来的研究表明,EG-VEGF还兼有促进造血干细胞分化、刺激胃肠道收缩及影响肠神经系统发育等多种生理功能.EG-VEGF的异常表达与多种肿瘤及血管新生依赖性疾病的发生发展密切相关,有望作为相应的治疗靶点开发诊断及治疗试剂.本文对有关研究进展及应用前景作一简要综述.

EG-VEGF在肿瘤治疗中的应用前景

内分泌腺衍生血管内皮生长因子(EG-VEGF)是首个被发现的组织特异性促血管生成因子,与多种特定组织肿瘤的发生及演进相关。该因子的发现不仅加深了我们对促血管生成因子的认识,也为提高肿瘤饥饿疗法的靶向性提供了新思路。

PCR方法扩增神经生长因子β亚基基因的条件优化

研究了不同退火温度、dNTP浓度、Mg2+浓度下用PCR方法扩增小鼠神经生长因子β亚基(β-NGF)基因的效率。并将扩增所得β-NGF基因克隆到pUCAT4载体中,对得到的阳性克隆进行了测序证实,为下一步利用该基因表达重组β-NGF创造了前提条件。

提高重组原动蛋白2表达水平的优化策略

原动蛋白2(PK2)是近年发现的一个具有多种生物学功能的蛋白质因子。采用Design-Expert 7.0.0软件对重组PK2表达的最优诱导条件进行响应面分析。结果表明,诱导起始时机与诱导物浓度是影响重组PK2表达水平的显著性因子。同时,诱导时间-诱导时机、诱导时机-诱导物浓度之间的相互作用对PK2的表达水平具有显著性影响。试验数据拟合与极值分析表明最优诱导条件为:工程菌OD600为0.60时,采用终浓度为0.62 mmol/L的IPTG在37℃诱导培养2.82 h,此时重组PK2的表达水平为170.73 mg/L。优化后的诱导条件导致重组PK2的表达水平提高了51.1%,而所需IPTG减少38.0%,诱导时间缩短53.0%,有利于大量制备重组PK2进行后续功能研究及应用研究。

正交试验设计和分析方法研究

介绍了正交试验设计和分析的重要性,阐述了正交试验的原理和特点,详细分析了正交试验设计的各种方法和正交试验数据分析方法,为正交试验的设计和分析提供了全面系统的方法,最后指出了正交试验设计和分析时需要注意的问题以及正交试验设计和分析软件的发展方向。

制药工程专业生产实习模式探讨

分析了制药工程专业建立生产实习模式的必要性,介绍了制药工程生产实习需要具备的条件,根据生产实习的经验,总结了制药工程生产实习的模式以及今后生产实习的改进方向。

N-乙酰吗啉合成工艺的研究进展

简要介绍了N-乙酰吗啉的性质和应用;详细综述了N-乙酰吗啉的合成工艺方法,即乙酸法、乙酰氯法、乙烯酮法、乙酸酯法、乙酸酐法,并分析了各种方法的工艺特点;指出了N-乙酰吗啉合成工艺研究的趋势。

青霉素酰化酶促合成β-内酰胺抗生素的过程优化研究进展

β-内酰胺抗生素是临床引用中最为广泛的一类抗生素,其生产正经历由化学合成到生物催化的转变。青霉素酰化酶是半合抗工业中最重要的一类酶,近年来广泛应用于β-内酰胺抗生素合成的研究中。相对热力学控制而言,动力学控制合成是更受青睐。酶促合成过程中的反应条件的优化控制尤为重要,包括pH、温度、底物浓度和底物比等影响因素的选择对于不同来源的酶和不同目的抗生素不尽相同。反应条件优化以及反应器的合理设计可以提高产物的收率并有效降低成本,是合成β-内酰胺抗生素新的研究热点。本文针对各反应因素以及反应器设计进行综述,并指出未来的可能研究方向。

制药工程专业实习基地的建设与维护

介绍了制药工程专业性质及实习和实习基地建设和维护的重要性;从校内实习基地、校外实习基地、高校联合建设实习基地和多样化实习等方式阐述了实习基地的建设工作;从实习质量的控制、与实习基地开展合作研究、校企联合活动促进友好关系、为企业输送高水平高素质人才等途径说明了实习基地的维护工作;探讨了实习基地建设和维护努力的目标和方向。

青藤碱及其衍生物SLN抗缺血性脑损伤靶点的虚拟筛选研究

采用软件AutoDock Vina将青藤碱及其衍生物青藤碱4-羟基亚麻酸酯(SLN)与28个和缺血性脑卒中有关的靶点蛋白进行分子对接,预测青藤碱及SLN的抗缺血性脑损伤的作用靶点。结果表明:青藤碱与蛋白质5D3I、3L8P、2Y37、3HRF、1E7F、3RZF等具有较高的结合能,SLN与蛋白质5D3I、4OR2、2Y37、4NF4、3L8P、2YXJ等具有较高的结合能。青藤碱和SLN均与5D3I(Toll样受体2,TLR2)表现出最强的结合能,分别为-39.7和-40.6kJ·mol^(-1)。提示TLR2可能是青藤碱和SLN抗脑缺血损伤的靶点,SLN还可能通过调节谷氨酸受体保护抗脑缺血损伤;SLN较青藤碱具有更高的结合能可能与其结构中的亚麻酸脂肪链有关。