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选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞增殖及α平滑肌肌动蛋白、纤维酶原激活物抑制剂-1和Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
被引量:
2
1
作者
徐媛媛
闻广华
+1 位作者
张冲
杨雁
《安徽医药》
CAS
2019年第12期2351-2355,共5页
目的观察选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞(LX 2)增殖及α平滑肌肌动蛋白(α SMA)、纤维酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)和Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)表达的影响。以进一步探究pSmad 3C/3L在肝纤维化进展中的作用机制。方法采用脂质...
目的观察选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞(LX 2)增殖及α平滑肌肌动蛋白(α SMA)、纤维酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)和Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)表达的影响。以进一步探究pSmad 3C/3L在肝纤维化进展中的作用机制。方法采用脂质体转染的技术(FuGENE?HD)向LX 2细胞转染野生型Smad3基因(Smad3 WT)、Smad3连接区磷酸化位点突变的基因(Smad3 EPSM)及Smad3 C末端磷酸化位点突变的基因(Smad33S A)3种质粒,选择性上调LX 2细胞中pSmad 3C/3L的表达水平,以蛋白质印迹法(Western Blot)验证转染效率并检测LX 2细胞中α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ的蛋白表达水平。MTT法检测选择性上调pSmad 3C/3L对LX 2细胞增殖能力的影响。结果转化生长因子 β1(TGF β1)刺激1 h后,与LX 2对照组相比,转染3种质粒组Smad3蛋白表达水平均升高[(0.48±0.02),(0.57±0.03),(0.60±0.02),(0.59±0.03);P<0.05];与Smad3 WT组相比,转染Smad3 EPSM质粒组pSmad3C蛋白表达水平明显升高[(0.33±0.02)比(0.44±0.01),P<0.05],转染Smad33S A质粒组pSmad3L蛋白表达水平明显升高[(0.36±0.01)比(0.42±0.02),P<0.05]。MTT结果显示,转染Smad3 EPSM质粒可抑制LX 2细胞增殖,而转染Smad33S A质粒可促进LX 2细胞的增殖[吸光度值(0.48±0.03)比(0.93±0.05),P<0.05]。TGF β1刺激12 h后,α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ在3种质粒转染组中呈现出差异表达(P<0.05)。结论转染3种质粒成功地选择性上调了LX 2细胞中pSmad 3C/3L的表达,选择性高表达pSmad3L可进一步促进TGF β1诱导的细胞增殖反应、促进α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ的表达,选择性高表达pSmad3C可抑制细胞增殖反应、降低α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ的表达;提示TGF β1诱导的Smad3不同位点磷酸化在LX 2细胞增殖和α SMA,PAI 1,Collagen Ⅰ蛋白表达的调控中发挥重要作用,为肝纤维化的逆转提供了新思路。
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关键词
肝硬化
肝星状细胞
质粒
转染
Smad3蛋白质
转化生长因子Β
脂质体
细胞增殖
印迹法
蛋白质
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题名
选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞增殖及α平滑肌肌动蛋白、纤维酶原激活物抑制剂-1和Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
被引量:
2
1
作者
徐媛媛
闻广华
张冲
杨雁
机构
安徽医科大学药理学教研室和天然药物研究所
出处
《安徽医药》
CAS
2019年第12期2351-2355,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(81573652,81874354)
文摘
目的观察选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞(LX 2)增殖及α平滑肌肌动蛋白(α SMA)、纤维酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)和Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)表达的影响。以进一步探究pSmad 3C/3L在肝纤维化进展中的作用机制。方法采用脂质体转染的技术(FuGENE?HD)向LX 2细胞转染野生型Smad3基因(Smad3 WT)、Smad3连接区磷酸化位点突变的基因(Smad3 EPSM)及Smad3 C末端磷酸化位点突变的基因(Smad33S A)3种质粒,选择性上调LX 2细胞中pSmad 3C/3L的表达水平,以蛋白质印迹法(Western Blot)验证转染效率并检测LX 2细胞中α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ的蛋白表达水平。MTT法检测选择性上调pSmad 3C/3L对LX 2细胞增殖能力的影响。结果转化生长因子 β1(TGF β1)刺激1 h后,与LX 2对照组相比,转染3种质粒组Smad3蛋白表达水平均升高[(0.48±0.02),(0.57±0.03),(0.60±0.02),(0.59±0.03);P<0.05];与Smad3 WT组相比,转染Smad3 EPSM质粒组pSmad3C蛋白表达水平明显升高[(0.33±0.02)比(0.44±0.01),P<0.05],转染Smad33S A质粒组pSmad3L蛋白表达水平明显升高[(0.36±0.01)比(0.42±0.02),P<0.05]。MTT结果显示,转染Smad3 EPSM质粒可抑制LX 2细胞增殖,而转染Smad33S A质粒可促进LX 2细胞的增殖[吸光度值(0.48±0.03)比(0.93±0.05),P<0.05]。TGF β1刺激12 h后,α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ在3种质粒转染组中呈现出差异表达(P<0.05)。结论转染3种质粒成功地选择性上调了LX 2细胞中pSmad 3C/3L的表达,选择性高表达pSmad3L可进一步促进TGF β1诱导的细胞增殖反应、促进α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ的表达,选择性高表达pSmad3C可抑制细胞增殖反应、降低α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ的表达;提示TGF β1诱导的Smad3不同位点磷酸化在LX 2细胞增殖和α SMA,PAI 1,Collagen Ⅰ蛋白表达的调控中发挥重要作用,为肝纤维化的逆转提供了新思路。
关键词
肝硬化
肝星状细胞
质粒
转染
Smad3蛋白质
转化生长因子Β
脂质体
细胞增殖
印迹法
蛋白质
Keywords
Liver cirrhosis
Hepatic stellate cells
Plasmids
Transfection
Smad3 Protein
Transforming growth factor beta
Liposomes
Cell proliferation
Blotting,western
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
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被引量
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1
选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞增殖及α平滑肌肌动蛋白、纤维酶原激活物抑制剂-1和Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
徐媛媛
闻广华
张冲
杨雁
《安徽医药》
CAS
2019
2
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