转染缝隙连接蛋白CX43在脑胶质瘤化疗旁观者效应影响的体外实验研究

背景与目的:肿瘤细胞受损伤时,其旁边未受损肿瘤细胞也出现损伤的现象称为旁观者效应,国内外研究发现多种肿瘤组织在体内外存在该效应,为进一步明确脑胶质瘤在药物化疗时是否存的旁观者效应以及CX43(缝隙连接蛋白43)对该效应的影响,通过构建并转染pCMV-Cx43cDNA质粒入C6细胞,上调缝隙连接蛋白CX43表达,增强缝隙连接功能,探讨转染缝隙连接蛋白CX43对脑胶质瘤化疗体外旁观者效应影响。方法:(1)通过C6细胞培养,并提取总RNA,行RT-PCR、质粒酶切及连接等,构建缝隙连接蛋白CX43真核表达重组质粒pCMV-Cx43cDNA;(2)通过脂质体行重组质粒pCMV-Cx43cDNA转染C6细胞,过表达C6细胞缝隙连接蛋白CX43,RT-PCR及Weston-blot检测CX43 mRNA及蛋白表达水平变化。划痕荷载染料传输实验法检测转染缝隙连接蛋白CX43后缝隙连接功能;(3)通过体外TRASWELL细胞共培养模型,将转染pCMV-Cx43cDNA、空载体细胞分别分成化疗药物替膜唑胺处理组与替膜唑胺未处理组细胞,然后将两组细胞按一定比例分别接种TRASWELL细胞共培养板膜两侧,检测未化疗处理细胞存活率及凋亡率,观察体外转染CX43对体外化疗旁观者影响。结果:(1)成功构建带CX43目的基因的真核表达pCMV-Cx43cDNA重组质粒;(2)成功转染C6细胞并筛选稳定转染过表达CX43细胞株(C6-Cx43)及转染空载体的细胞株(C6-non),C6-Cx43细胞Cx43mRNA及CX43蛋白表达显著增加;(3)在体外TRASWELL细胞共培养模型中,观察到体外未化疗细胞凋亡的旁观者效应,(C6-Cx43)组与对照组差异存在明显统计学意义。结论:(1)C6细胞转染重组质粒pCMV-Cx43cDNA,缝隙连接蛋白CX43表达增高,C6细胞GJIC功能增强;(2)在体外化疗时,C6-Non、C6-Cx43都存在化疗旁观者效应,而C6-Cx43的化疗旁观者效应显著。即转染缝隙连接蛋白CX43能放大体外化疗的旁观者效应。

过表达缝隙连接蛋白Cx43与人脑胶质瘤细胞U251侵袭性的研究

目的通过上调脑胶质瘤细胞U251的Cx43表达水平,检测其对U251侵袭能力的影响,为抑制肿瘤的恶性浸润提供新的治疗途径。方法通过构建缝隙连接蛋白Cx43真核表达重组质粒,并转染U251细胞,过表达U251细胞缝隙连接蛋白Cx43,RT-PCR及Weston-blot检测Cx43 mRNA及蛋白表达水平变化。用Traswell细胞培养板结合MTT法测定U251细胞侵袭能力的改变。结果 (1)成功构建pCMV-Cx43 cDNA重组质粒。(2)成功转染U251细胞并筛选稳定转染过表达Cx43细胞株。(3)Traswell细胞培养板结合MTT法,检测到过表达Cx43后U251细胞侵袭能力较正常组下降。结论过表达缝隙连接蛋白Cx43能抑制人脑胶质瘤细胞U251侵袭能力。

pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒的构建及其在人神经胶质瘤U251细胞中的稳定过表达

目的建立稳定过表达pcDNA3.1/连接蛋白43(Cx43)重组质粒的人神经胶质瘤U251细胞系。方法设计人Cx43的引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从低表达Cx43的U251细胞中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒,经酶切、PCR、测序检测构建的正确性。采用脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,G418筛选出稳定转染的细胞系,采用RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染pcDNA3.1/Cx43重组质粒的U251细胞中Cx43基因、蛋白的表达水平。结果酶切、PCR及测序表明pcDNA3.1/Cx43重组质粒构建成功,筛选获得稳定过表达Cx43的U251细胞。结论构建了pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒及稳定过表达Cx43的U251细胞株,为下一步以Cx43为靶标进行人神经胶质瘤的基因治疗研究奠定了实验基础。

脑膜中动脉阻断+颞肌贴敷术治疗机化型慢性硬膜下血肿的疗效

目的探讨脑膜中动脉阻断+颞肌贴敷术治疗机化型慢性硬膜下血肿(CSDH)的效果。方法回顾性分析2020年1月至2022年12月开颅手术治疗的26例机化型CSDH的临床资料,术中行脑膜中动脉阻断+颞肌贴敷。结果术后症状均改善。所有病人随访半年,未发现血肿复发。术后发生硬膜下积液2例(7.7%)、硬膜下积液合并脑脊液漏1例(3.8%)、颅内出血1例(3.8%),未出现张力性气颅及颅内感染。结论对机化型CSDH,开颅手术清除血肿后行脑膜中动脉阻断+颞肌贴敷,是一种安全的、有效的方法,血肿复发率低。

颅骨修补术后颅内血肿分析

目的探讨颅骨修补术后颅内血肿的发病机制与防治方法。方法以2015年1月—2017年9月我院72例行颅骨修补术的患者为研究对象,患者术后CT复查,统计颅内血肿发生率,分析术后并发颅内出血的原因及诊治效果。结果患者术后并发颅内血肿12例,其中8例术前骨窗下凹,颅内血肿发生率为16.67%,后经保守治疗或手术清除血肿,患者均康复。结论颅内血肿在颅骨修补术后较为常见,把握手术指征和恰当时机、加强术前处理、提高手术操作技巧、对预防颅骨修补术后颅内血肿具有积极作用。

29例重型颅脑损伤合并下丘脑损伤的诊断和治疗体会

目的分析和总结重型颅脑损伤合并下丘脑损伤原因、发生机制、诊断和治疗原则。方法通过分析我科近年来,收治29例重型颅脑损伤合并下丘脑损伤患者患者临床资料和复习相关文献。结果早期诊断和治疗下丘脑损伤,对提高患者的救治水平有不可忽视的作用。结论早期诊断和治疗由下巨脑损伤所致神经内分泌的改变,可有效提高患者的预后及救治水平。

小脑蚓部动静脉畸形一例临床报告并文献复习

目的探讨颅内动静脉畸形的临床表现、诊断及治疗。方法回顾性分析1例小脑蚓部动静脉畸形患者的临床表现、影像学检查、治疗方式及预后。结果头颅CT检查示小脑蚓部颅内血肿,头颅MRI+磁共振血管造影(MRA)检查示小脑蚓部脑内血肿,MRA无明显异常,进一步行头颅CT血管成像(CTA)及数字减影血管造影(DSA)检查示小脑蚓部动静脉畸形。给予后正中入路开颅动静脉畸形切除术治疗,术后恢复良好,无神经功能不良表现。结论开颅显微手术切除动静脉畸形是一种有效治疗颅内动静脉畸形病变的方法。