血管内皮细胞衰老过程中S1P2受体表达和细胞功能改变的相关性

目的研究衰老血管内皮细胞的功能和S1P2受体表达的相关性。方法采用RT-PCR和Western印迹检测年轻、中年和衰老内皮细胞的S1P2受体的表达;运用细胞跨膜迁移实验分析内皮细胞的趋化性,以及采用种植在Matrigel胶上的内皮细胞的形态发生实验,评价内皮细胞体外血管新生反应。结果S1P2受体在衰老内皮细胞中的表达显著上调(P<0.05);S1P刺激能增加内皮细胞的迁移,但衰老组迁移率明显低于其他组(P<0.05);Matrigel种植方法评价内皮细胞体外血管生成实验显示,S1P能刺激内皮细胞形成管状样结构,且衰老内皮细胞形成管状样结构的能力明显减弱(P<0.05)。结论S1P通过S1P2受体介导而影响内皮细胞的功能,且衰老内皮细胞的S1P2受体表达上调与内皮细胞迁移及血管生成能力等功能下调改变相关联。

S1P2受体shRNA腺病毒载体的构建及筛选

目的为探讨S1P2受体介导血管内皮细胞衰老的机制,构建和筛选特异性S1P2受体shRNA腺病毒载体。方法设计并合成4对靶向S1P2受体的单链寡核苷酸(ssoligo),经变性退火为双链寡核苷酸(dsoligo)插入穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle载体,测序正确后经脂质体介导转染人肺动脉内皮细胞(HPAEC),通过RT-PCR方法筛选对S1P2受体基因沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA,提取质粒DNA,经双酶切,回收S1P2受体基因沉默效果最佳的shRNA片段,亚克隆到腺病毒表达载体(pAdeno-X),筛选出正确重组子,转染HEK293A细胞,收集重组的腺病毒,测定病毒滴度,通过Westernblot方法检测S1P2受体沉默效果。结果测序结果证实所构建的pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA质粒正确,并从4对dsoligos筛选出对S1P2受体沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA,经亚克隆到腺病毒表达载体。转染人肺动脉内皮细胞后,Western印迹检测显示构建的腺病毒载体pAdeno-shRNA对S1P2受体蛋白的沉默有明显效果。结论成功地构建和筛选出介导特异性shRNA-S1P2的重组腺病毒。

四种微量全血DNA提取方法的比较

目的比较加热去蛋白法、碘化钠法、TT溶血法、氯化胺法四种方法提取人微量全血基因组DNA的纯度及总量的差异。方法收集静脉全血0.5ml,共356人份,分别采用上述四种方法提取基因组DNA,用紫外分光光度仪及琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和总量,计算采用x±s,结果经统计学t检验处理。结果四种方法提取的基因组DNA纯度用OD260/OD280表示分别为:加热法1.569±0.158;碘化钠法1.517±0.093;TT溶血法1.789±0.161;氯化胺法1.815±0.051。四种方法提取的基因组DNA总量分别为:加热法(9.34±3.59)μg;碘化钠法(7.82±4.23)μg;TT溶血法(20.98±3.56)μg;氯化胺法(22.07±4.53)μg;加热法与碘化钠法比较,TT溶血法与氯化胺法比较,P>0.05,无显著性差异;TT溶血法、氯化胺法分别与加热法、碘化钠法比较,P<0.05,有显著性差异。结论从提取的基因组DNA纯度和总量来比较,氯化胺法与TT溶血法是四种提取人微量全血基因组DNA方法中较好的两种。

cDNA文库基础上运用热启动聚合酶链反应末端延伸快速分离全长cDNA序列

建立一种cDNA文库基础上运用热启动聚合酶链反应末端快速扩增分离人类新基因全长cDNA序列的新技术。以文库载体序列与待扩增目的基因片段为模板各设计引物进行热启动聚合酶链反应扩增 ,从人胎肝cD NA文库中获得氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞泡沫化过程中差异表达序列标签片段 (FRG4 )的全长cDNA序列 ,聚合酶链反应产物克隆到pGEM T载体中 ,并测序鉴定 ,从而成功获得FRG4的全长cDNA序列。

外源性Rb基因对U937细胞泡沫化过程中载脂蛋白B的影响

目的:研究Rb基因在U937细胞泡沫化过程中对细胞内载脂蛋白B含量的影响,初步探讨Rb基因 在泡沫细胞形成过程中的作用。方法:采用氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)孵育U937细胞,以及Ox-LDL孵育同时 导入外源性Rb基因转染U937细胞,分别于处理0 h、12 h、24 h收集细胞,半定量RT-PER与流式细胞术检测Rb mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞内载脂蛋白B的含量。平行实验重复3次,进行统计学方差分析。结果:氧 化型低密度脂蛋白孵育U937细胞泡沫化过程中,12 h、24 h Rb基因的表达显著低于对照组0 h(P<0．05);细胞内载 脂蛋白B含量则显著高于对照组0 h(P<0．05)。而U937细胞在导人外源性Rh基因后,12 h、24 h细胞内的Rb基因 的表达显著高于对照组0 h(P<0．05);细胞内载脂蛋白B含量则显著低于对照组0 h(P<0．05)。结论:外源性Rb 基因的导入可以下调细胞内载脂蛋白B的含量,表明Rb基因可能与单核细胞源性泡沫细胞形成有关,可能是影响 泡沫细胞形成的相关基因的敏感候选基因之一。

衰老血管内皮细胞增殖和凋亡与S1P2受体表达的关系

目的研究衰老血管内皮细胞增殖和凋亡与S1P2受体表达的相关性。方法采用RT-PCR检测年轻(Y)、中年(I)和衰老(S)内皮细胞的S1P2受体的表达;运用MTT法和流式细胞术(FCA)分别检测年轻(Y)、中年(I)和衰老(S)内皮细胞的增殖和凋亡。结果 S1P2受体mRNA在衰老内皮细胞中的表达显著上调(P<0.01);衰老内皮细胞的增殖能力显著下调(P<0.01);衰老内皮细胞凋亡明显增加(P<0.01)。结论衰老内皮细胞的S1P2受体表达上调与内皮细胞的增殖和凋亡改变相关联。

PDCD5在多发性骨髓瘤中的表达及其与BCL-2相关性

目的:研究凋亡促进基因PDCD5在多发性骨髓瘤(MM)中的表达,分析其与抑凋亡基因BCL-2的相关性,初步探讨PDCD5在MM发病机制中的作用。方法:采用免疫组织化学染色、流式细胞检测术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定MM患者组和对照组骨髓单个核细胞PDCD5和BCL-2蛋白和mRNA的表达,同时对两者进行相关性分析。结果:免疫组织化学结果显示,PDCD5蛋白阳性细胞率MM组为(34.75±6.49)%,对照组为(52.98±5.84)%;PDCD5染色强度指数(SII)MM组为281.16±75.33,对照组为462.84±39.77;BCL-2蛋白阳性细胞率MM组(29.97±5.57)%,对照组(5.56±1.95)%;BCL-2蛋白SII在MM组为224.94±57.72,对照组为27.84±9.75;以上指标两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞技术检测,骨髓浆细胞中PDCD5蛋白阳性率MM组(78.11±21.63)%,对照组(89.46±9.98)%;蛋白平均荧光强度MM组为61.73±11.04,对照组为353.04±123.26;以上两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测,PDCD5mRNA的相对表达水平MM组为0.33±0.07,对照组为0.53±0.05;BCL-2mRNA的相对表达水平MM组为0.33±0.08,对照组为0.12±0.02;以上两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。PDCD5与BCL-2表达相关性研究结果,PDCD5与BCL-2蛋白阳性细胞率表达呈负相关(r=-0.86,P<0.05);PDCD5与BCL-2mRNA相对表达水平呈负相关(r=-0.90,P<0.05)。结论:MM患者骨髓单个核细胞PDCD5蛋白和mRNA表达下调;BCL-2蛋白和mRNA表达上调;PDCD5与BCL-2蛋白阳性细胞率和mRNA表达均呈负相关。

不同幽门螺杆菌临床菌株对人胃黏膜细胞系GES-1增殖和凋亡的影响及其致癌性的研究

目的:比较不同幽门螺杆菌(H.pylori)临床菌株对人胃黏膜细胞系GES-1细胞增殖、凋亡的影响,了解不同毒力菌株对胃黏膜的影响及致癌性。方法:选用临床分离自胃癌、胃炎患者的菌株各10例分别与GES-1细胞以不同浓度比例共培养,在不同时间点进行MTT和流式细胞仪检测,筛选出对GES-1细胞的增殖影响最大(A菌株)和最小(B菌株)的两株菌株,利用蒙古沙土鼠感染模型了解其导致胃黏膜病变情况及致癌性。结果:当细胞/细菌浓度比为1∶1,1∶50共培养12 h和细胞/细菌浓度比为1∶50共培养24 h时,分离自胃癌患者的H.pylori临床菌株可以不同程度地促进GES-1细胞增殖,与胃炎菌株组的吸光度值比较差异有统计学意义(P<0.05)。当细胞/细菌浓度比为1∶50,1∶200共培养时,胃炎菌株组和胃癌菌株组细胞凋亡率较对照组明显增加(P<0.05),胃炎菌株组与胃癌菌株组间差异无统计学意义(P>0.05)。筛选出的2株菌株感染蒙古沙土鼠模型后28周,A菌株引起蒙古沙土鼠胃黏膜肠化及癌变,与B菌株组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:不同来源的H.pylori临床菌株对GES-1细胞的增殖影响具有差异性,分离自胃癌黏膜的菌株可明显促细胞增殖,并可以引起蒙古沙土鼠严重的胃黏膜癌前病变及胃癌发生。

以“三环理论”指导医院学科建设,提升核心竞争力

广义的学科有两种含义，第一种含义指学术的分类，既一定科学领域或一门科学的分支；第二种含义指专业教学和科研的功能单位，是对人才培养、教学和科研隶属范围的相对界定。但是长期以来，存在着学科与专业混淆的现象，使得学科间和学科内彼此分割，造成了人才培养单一、科研方向狭隘等多重弊端。为改善此类现象，提高教学质量及自主创新能力、提升人才质量、优化学科结构、优化资源分配等，

脂蛋白(a)、纤维蛋白原和高敏C反应蛋白联合检测在冠心病诊断中的应用价值

目的探讨脂蛋白(a)、纤维蛋白原和高敏C反应蛋白联合检测对冠心病的诊断价值。方法对166例疑诊冠心病的患者进行冠状动脉造影检查,根据造影结果分为冠心病组和非冠心病组,收集2 mL抗凝全血标本,分离血浆,采用免疫比浊法,将同一标本同时在日立7170全自动生物化学分析仪测定脂蛋白(a)、纤维蛋白原和高敏C反应蛋白三个指标。结果冠心病组脂蛋白(a)、纤维蛋白原和高敏C反应蛋白测定值均显著高于非冠心病组(P<0.01);单个指标脂蛋白(a)、纤维蛋白原和高敏C反应蛋白诊断冠心病的灵敏度依次为脂蛋白(a)(73.9%)>高敏C反应蛋白(63%)>纤维蛋白原(56.5%),特异性为高敏C反应蛋白(86.5%)>纤维蛋白原(75.7%)>脂蛋白(a)(70.3%)。三项指标联合检测对冠心病患者诊断的特异度(91.9%)高于分别应用脂蛋白(a)(70.3%)、纤维蛋白原(75.7%)和高敏C反应蛋白(86.5%)单一指标。结论联合应用脂蛋白(a)、纤维蛋白原和高敏C反应蛋白进行检测,能更准确诊断冠心病的发生,这为建立一种集成检测来提高对心脑血管疾病诊断的新方法提供了理论依据。

HPLC-MS法同时测定人血浆中依那普利及其代谢物依那普利拉的浓度

目的建立一种可同时检测人血浆中依那普利及其代谢物依那普利拉的浓度HPLC-MS方法。方法采用HPLC-MS法，色谱柱为Thermo Hypersil-HyPURITY C18 （150mm×2．1mm，5μm），流动相为20mmol·L^-1醋酸铵（pH3．0，0．15％TFA）-甲醇＝47：53（v／v），流速为0．25mL·min^-1；正离子检测，电喷雾电离，喷雾电压4．5kV，选择性离子监测，分别监测m／z377（依那普利）、m／z349（依那普利拉）和m/z425（贝那普利）。结果依那普利和依那普利拉的定量下限均为1．56ng·mL^-1；线性范围均为1．6～400ng·mL^-1（n＝9，r1＝0．9997，r2＝O．9998）；提取回收率均〉80％，日内、日间变异均〈8．5％。结论该方法灵敏、快速、重现性好，可用于依那普利人体生物利用度和药物动力学研究。

中国人群MEF2A基因与冠状动脉疾病的易感性(英文)

目的:探讨中国人群MEF2A基因与CAD的易感性关系。方法:对175例冠状动脉疾病(CAD)患者和228例正常对照的血标本进行PCR扩增MEF2A基因的11个外显子,然后采用SSCP方法检测外显子的突变并对扩增产物进行纯化和测序分析。结果:MEF2A基因的第11外显子存在三核苷酸(CAG)重复多态性,CAD患者和正常对照之间无统计学差异(P>0.05);另发现4例CAD患者在第11外显子存在1个CCG的缺失突变,突变率约为2.3%,而正常对照未见此突变;CAD患者和正常对照组MEF2A基因的其它外显子未发现突变。结论:中国人群MEF2A基因第11外显子存在1个CCG的缺失突变可能与冠状动脉疾病患者易感性有关。

高敏C反应蛋白和脂蛋白(a)联合检测在冠心病诊断中的应用

目的探讨高敏C反应蛋白(hs-CRP)和脂蛋白(a)联合检测对冠心病的诊断价值。方法对166例疑诊冠心病的患者进行冠状动脉造影检查,根据造影结果分为冠心病组(CHD组)和非冠心病组(非CHD组),并分别进行hs-CRP和Lp(a)的测定、分析。结果CHD组患者血浆hs-CRP和Lp(a)浓度均高于非CHD组(P<0.01)。两项指标联合检测对CHD患者诊断的特异度(89.2%)高于分别应用hs-CRP(86.5%)或Lp(a)(70.3%)单一指标。结论hs-CRP和Lp(a)两项指标联合检测更有助于冠心病的预测和诊断。

重组腺相关病毒载体介导成纤维细胞生长因子2基因诱导缺血心肌血管新生

探讨重组 2型腺相关病毒载体介导 2型成纤维细胞生长因子基因诱导家兔缺血心肌血管生成的作用。实验对象为 2 0只新西兰兔 ,手术建立心肌缺血模型后随机分为成纤维细胞生长因子基因治疗组和对照组 ,分别向缺血区域心肌注射成纤维细胞生长因子腺相关病毒或磷酸盐缓冲液。 4周后取心肌及肝、肾等器官组织标本 ,采用逆转录聚合酶链反应检测目的基因mRNA的表达 ;制作组织学切片以观察组织病理改变 ,于高倍镜下计数缺血区域微血管数目。结果发现转染的 2型成纤维细胞生长因子基因在缺血心肌中有表达 ,成纤维细胞生长因子基因治疗组缺血区域单个高倍视野内的微血管数为 12 .0± 1.4条 ,对照组为 4 .5± 1.5条 ,二者差异具有显著性 (P <0 .0 1)。 2型成纤维细胞生长因子基因治疗组的肝脏、肾脏、脾脏、角膜和睾丸标本中均未发现 2型成纤维细胞生长因子基因的表达 ,病理检查也未发现组织结构异常。说明腺相关病毒载体介导的 2型成纤维细胞生长因子基因可以有效地转染入家兔缺血心肌 ,并具有明显的诱导缺血心肌血管生成的作用 ,且基因表达仅限于心肌。

肥胖、糖脂代谢障碍对美托洛尔降压疗效的影响

目的探讨肥胖、糖脂代谢障碍对选择性β1肾上腺素能受体阻滞剂美托洛尔降压疗效的影响。方法筛选血压分级为1级或2级的原发性高血压患者300例,给予美托洛尔治疗8周,根据血压的降低判断其疗效,并分析肥胖或中心性肥胖、糖尿病和高脂血症对美托洛尔疗效的影响。结果肥胖或中心性肥胖、糖脂代谢障碍可显著影响美托洛尔的降压疗效,正常体质指数组的降压有效率(68.4%)均高于超重组(47.4%)和肥胖组(39.4%),非中心性肥胖组的有效率(62.8%)也高于中心性肥胖组(46.6%),高脂血症和糖尿病对疗效的影响有性别差异。Logsitic回归分析发现,体质指数是对美托洛尔疗效影响最大的因素。结论肥胖、糖脂代谢障碍可影响美托洛尔的降压疗效,后者对男性影响更大。

使用多肿瘤标志物蛋白芯片诊断系统检测肺癌的临床意义

目的 研究多肿瘤标志物蛋白芯片诊断系统用于肺癌的临床诊断价值。 方法 用多肿瘤标志物蛋白芯片诊断系统测定分析 13 1例肺癌患者 ,2 0例肺良性疾病患者和 177例正常对照人群血清的 12种常见的肿瘤标志物 :CA19-9、NSE、CEA、CA2 42、Fe、Beta -HCG、AFP、f -PSA、PSA、CA12 5、HGH、CA15 3。 结果 13 1例肺癌患者有 93例血清肿瘤标志物为阳性 ,阳性率为 71.0 % ;2 0例肺良性疾病患者有 2例血清肿瘤标志物阳性 ,阳性率为 10 .0 % ;177例正常对照血清中没发现阳性。 结论 多肿瘤标志物蛋白芯片诊断系统的应用对肺癌诊断有较高的临床参考价值。

新的人突触相关蛋白(FRG4)抗原表位分析及抗体制备

目的:分析一个新的人突触相关蛋白(FRG4)抗原表位并制备其多克隆抗体。方法:从人胎肝文库PCR扩增获得FRG4基因全长cDNA序列;通过生物信息学分析,预测FRG4编码氨基酸序列的二级结构、抗原决定簇、功能结构域,并进行了多序列比对;采用固相多肽合成法合成了FRG4抗原多肽,并免疫家兔;用免疫组化检测蛋白在人肝癌细胞HepG2细胞中的表达。结果:通过生物信息学分析选取抗原13肽PKLVKEEVFWRNY,制备兔抗人FRG4多克隆抗体。高效液相色谱检测显示抗体纯度达82.79%,抗体滴度为1∶16000,Westernblot证实该抗体具有较好的反应性和特异性,免疫组化证实其主要在HepG2细胞胞浆中表达。结论:成功制备了新的人突触相关蛋白(FRG4)多克隆抗体。

CVB3对不同营养状态的HeLa细胞mTOR信号通路调控的影响

目的:探讨不同营养状况对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染HeLa细胞后mTOR信号通路调控的影响。方法:HeLa细胞的培养方法:非饥饿法用常规含10%胎牛血清细胞培养液换液培养24 h后次日再用CVB3干预;饥饿法用不含胎牛血清的培养基换液培养24 h后次日再干预。将HeLa细胞分为非饥饿法病毒组与对照组、饥饿法病毒组与对照组4组,采用RT-PCR检测不同时间点HeLa细胞CVB3外壳蛋白、mTOR和p70S6K mRNA表达。结果:非饥饿法:病毒组mTOR,p70S6K mRNA表达与对照组比较仅在12,24 h,差异有统计学意义(P<0.05),而饥饿法病毒组各时间点均低于对照组(均P<0.05);饥饿法病毒组和对照组HeLa细胞mTOR表达均高于非饥饿法(均P<0.05),而p70S6K mRNA差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:CVB3使HeLa细胞mTOR-p70S6K信号通路表达下调,饥饿法mTOR表达高于非饥饿法。