细胞毒素相关蛋白基因A与胃粘膜组织恶变的研究

目的:研究细胞毒素相关蛋白基因A(cagA)阳性幽门螺杆菌(Hp)在胃粘膜组织恶性化转变中的作用。方法:以含Hp细胞毒素相关蛋白基因A的质粒(P^(MC3))为外参照品,在微孔板上对PCR扩增cagA的产物作探针杂交及辣根过氧化物酶酶促显色分析,定量榆测不同组织中cagA阳性Hp。结果:往50份Hp尿素酶B基因阳性的临床标本中检测到28份cagA亦阳性(56％),其中5份浅表性胃炎组织,12份癌前病变组织及11份胃癌组织。浅表性胃炎组织cagA阳性的Hp感染率(31％)及每毫克组织感染的平均拷贝数(12.8)均显著低于(P<0.01或P<0.05)癌前病变组织(60％;77.1)或胃癌组织(79％;57.6),二者在后两种组织间均无显著性差别(P>O.05)。结论:cagA阳性的Hp感染可能有助于胃粘膜组织的恶性化转变,这种转变与cagA阳性Hp的感染量有关。

生物芯片技术在Hp诊断和研究中的应用

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一种快速微量的双温PCR法

PCR技术能特异,直接和高效的扩增各种对象的基因.本文建立了一种快速,微量的双温度点法PCR,并探讨了该PCR法的最适条件.旨在使PCR技术常规化. 1 PCR方法 PCR特异引物为HIV-IPr和HIV-IPr_2,模板为pARV-2/7A质粒(内含HIV-1全长cDNA).反应总体积分别为10,20,50,100μ1,其中主要含有HIV-lPr_1和HIV-lPr_2各50pmol/L。

硒对大鼠肝细胞核糖体相关蛋白质含量的影响

本文通过高、超速差速分步离心肝组织匀浆,并用高浓度盐溶液洗涤核糖体沉淀得核糖体相关蛋白质粗制品,然后经 Sephadex 柱层析,SDS—PAGE 电泳将其分离。结果显示,低硒组大鼠肝核糖体相关蛋白质的种类和数量均此西安组低,加硒能一定程度改善上述变化。从而说明,硒可以通过改变机体核糖体相关蛋白质而影响其蛋白质的合成。

直接用细菌重组体进行聚合酶链反应及其在克隆鉴定中的应用

作者用不需提纯DNA模,可直接从质粒的宿主菌中扩增插入片段的方法进行扩增和克隆鉴定。结果说明,该方法不但在扩增的灵敏度和特异性与经用酚氯仿抽提纯化的质粒DNA作模板一致,使质粒鉴定的时间由原来48～72h缩短至2～8h,而且节省了细胞培养及质粒纯化过程所用的试剂及器械。特别是对于无法用酶切法鉴定的克隆有特殊意义。

聚合酶链式反应检测人类免疫缺陷病毒基因

作者设计并合成了一对位于HIV-1pol基因、保守性很高的寡核苷酸引物,采用3温度点及2温度点聚合酶链式反应(PCR),以pARV-2/7A质粒为模板,扩增出360bp大小的片段.以pUC 19,pTTQ 18,M13mp18和外周血淋巴细胞(PBMCs DNA)为模板进行同步PCR,并用倍比稀释法将pARV-2/7A稀释后进行PCR,分别研究了该组引物的特异性和敏感性.结果表明:该套PCR试剂特异性强,敏感度高,能检出3个拷贝的HIV-1.

斑点金免疫滤渗试验快速测丙型肝炎病毒抗体方法的初步研究

建立胶体金虑虎试验用于快速检测丙型肝炎ＩｇＧ抗体，将丙型肝炎抗原固相在硝酸纤维素薄膜上，用来捕获血清标本中的抗ＨＣＶＩｇＧＡ，通过胶体金标记ＳｐＡ而显色。整个试验过程仅需２－４ｍｉｎ。用本法与ＥＩＡ对比检测血清标本１３１份，两法均阳性４９份，阴性７８份，总符合率为９７％。

定量检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因A方法的建立

目的:建立定量检测细胞毒素相关蛋白基因A(cagA)阳性幽门螺杆菌(Hp)的方法。方法:利用含Hp cagA的质粒(P^(MC3))作为外参照品,在微孔板中对PCR扩增cagA的产物进行辣根过氧化物酶标记的探针杂交及酶促显色。结果:当PCR反应体系中原始模板为1～10~5拷贝、循环次数小于或等于25时,原始模板以相对固定的指数形式增加,在该范围内适宜定量分析。通过对20份已知Hp菌株cagA的检测符合率达100％,观察结果的敏感度较电泳法提高了200倍。定量检测不同胃粘膜组织中cagA阳性Hp,检出底限为6拷贝/mg组织。结论:本方法特异性强,敏感度高,对研究Hp与消化道疾病的关系有实用价值。

HBVDNA定量PCR方法的建立

ＨＢＶＤＮＡ定量ＰＣＲ方法的建立阎小君肖乐义韩锋产郭进军苏成芝侯瑜（第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３）关键词聚合酶链反应定量分析乙型肝炎病毒中图号Ｑ５２３ＨＢＶＤＮＡ是乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染最直接和可靠的病原学标志．用定量Ｐ...

艾滋病病毒蛋白酶高效表达载体及体外活性检测系统的构建

艾滋病是本世纪80年代初发现的一种烈性传染病,5年病死率为100％,致病因子为人免疫缺陷病毒,该病毒的蛋白酶在病毒复制和成熟中具有决定性的意义。由于目前国内外尚未获得艾滋病病毒蛋白酶的高效表达的重组子及活性检测系统,限制了它的研究与应用。本文利用PCR技术修饰了艾滋病病毒蛋白酶的基因,使其具有便于克隆及表达用的限制酶切位点及转录终止码,井在其C末端设置了一个可用于检验该酶活性的特殊序列。DNA序列分析揭示上述突变策略成功,将修饰后的艾滋病病毒蛋白酶基因克隆入大肠杆菌表达系统,并获得高效表达(>30％),Western-Bolt鉴定结果表明所表达的蛋白为艾滋病病毒所特有,并具有较好的生物活性。

硒对培养的大鼠肝细胞核糖体相关蛋白质的影响

硒作为人体必需微量元素之一,一方面以有机硒的形式组成体内许多具有重要生物功能的结构;另一方面,又以无机硒的形式发挥重要的生理功能。近年来,尽管硒与生物大分子合成的关系颇受重视,但存在不少问题。其研究结果既有不一敛现象,又觉不够深入。

用多聚酶链反应检测人类免疫缺陷病毒的研究进展

多聚酶链反应(PCR)技术在诊断人类免疫缺陷病毒(HIV)感染中有较其它方法难以比拟的优点,主要表现在它能较其它方法早期、迅速、准确地诊断,并且有很高的灵敏度及特异性。通过对大量HIV阳性、阴性高危人群及HIV阴性健康人检测已证实其独特的优越性。

硒对培养的二代缺硒大鼠肝细胞核酸及蛋白质合成影响

本文通过现察硒对~3H-TdR,~3H-UR,~3H-Lea参入培养的二代硒缺乏大鼠肝细胞核酸及蛋白质,研究了硒对大鼠肝蛋白质及核酸合成的影响,实验结果表明,缺硒肝细胞三种同位素的参入量,蛋白质及核酸的含量均比对照组低,加硒能一定程度恢复上述变化。从而揭示,硒与机体蛋白质及核酸的合成有密切关系。

西安地区Hp及cagA^+亚型Hp感染的血清流行病学研究

目的 对胃癌高发区的西安地区城市及农村自然人群Hp及CasA^+HP感染状况进行血清流行病学调查,以期了解各年龄段Hp及CagA^+Hp感染状况以及与胃癌等胃疾病的关系, 方法 对胃癌高发区的西安地区城市及农村自然人群2134人及525例胃病患者进行现况调查,并使用斑点金免疫渗滤法(DIGFA)对被调查者末梢血血清行抗Hp-尿素酶IgG(抗HpU-IgG)及抗Hp-CagA-IgG检测,检测结果进行统计学处理,感染率用百分数表示,做X^2检验,P<0.05为差异有显著意义。 结果 我们首次采用DIGFA方法对胃癌高发地区的西安地区自然人群包括婴幼儿在内的大样本人群及胃病患者进行抗Hp-CagA-lgG及抗HpU-IgG的血清流行病学调查,显示了西安地区0岁～60岁Hp感染与CagA^+Hp感染年龄分布的全貌,其结果显示西安地区Hp感染的特点为:①可分为剧增期,缓增期,及平坦期,而且剧增期明显提前而且持续时间短(2岁～3岁年龄段),缓增期不明显,5岁～6岁己接近平坦期(Hp感染率达50％左右)。②西安地区Hp的平均感染率为54.1％(31.1％～65.7％),其中CagA^+Hp感染率占23.2％(12.5％～29.3％),城市及农村Hp与CagA^+Hp感染率差异无显著意义(x^2=0.01;2.85,P>0.05)。③自然人群各年龄组中CagA^+Hp感染率占Hp总感染率的比值相对固定,约为30％ ～50％。

新型Taq Man-MGB探针在结核分枝杆菌实时PCR检测中的应用

为建立一种比现有方法敏感、准确性高、重复性好的结核分枝杆菌DNA定性定量检测方法 ,以TaqMan探针技术为基础 ,运用TaqMan MGB探针 ,实时检测临床标本中的结核分枝杆菌DNA .用来自临床标本的DNA及克隆于载体的IS6 1 1 0序列检测所建立方法的有效性 .结果显示 ,所建立方法的最低检测限度为 1个基因拷贝 反应 ,在每反应 1 0 0 ～ 1 0 8拷贝范围内 ,Ct 值同DNA量的对数呈线性关系 .同一模板不同时间或同一时间不同管内扩增 ,所得Ct 值恒定 .用该方法检测 37例结核分枝杆菌培养阳性的痰液标本 ,敏感度为 1 0 0 % ;用该方法检测 1 6例TB系列阴性参考品 ,特异性为1 0 0 % .结果表明 。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与胃十二指肠溃疡关系的病例对照研究

目的本文从流行病学角度研究西安地区幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白 A(CagA)阳性 Hp 菌株感染与胃十二指肠溃疡发病的关系.方法采用病例对照研究方法,病例组与对照组的配比比例为1:2.病例组为本院消化科自1997-10/1998-10连续住院的患者,经内镜检查及病理检查证实为活动期胃溃疡和(或)十二指肠溃疡.对照组分为两组,对照1组为同期住院的本科及其他科住院的非胃十二指肠疾病患者,对照2组为同期普查健康人群.病例组与对照组的配比因素为性别、民族、年龄(相差5岁以内).采用问卷调查,内容涉及与胃十二指肠溃疡发病可能有关的32个因素,对所有因素进行量化,应用 SAS 软件进行处理.CagA 阳性 Hp 感染的检测结果分析采用 x^2检验.对所调查因素首先进行1:1及1:2单因素条件 Logistic 回归分析,有显著性意义的因素,计算近似相对危险度(odds ratio,OR)及其95%的可信区间(confidence interval,CI).两因素协同作用采用分层分析方法.对单因素分析时作用较大及调查结果较准确的因素,用多因素条件 Logistic 回归分析.血清中抗 CagA 抗体的检测采用斑点金免疫渗滤法(DIGFA).结果①在胃溃疡组与对照1组及对照2组的配对研究中,胃溃疡组的 CagA 阳性 Hp 感染率显著高于两个对照组,OR 分别为5.0与6.5,P 分别<0.05及<0.01.②在十二指肠溃疡组与对照1组及对照2组的配对研究中,十二指肠溃疡组的CagA 阳性 Hp 感染率显著高于两个对照组,OR 分别为9.33与11.00,P 分别<0.05及<0.01.③1:1及1:2单因素及多因素 Logistic 回归分析表明,Caga 阳性 Hp 感染、吸烟、饮酒、食酸辣食物、生活不规律、精神因素等因素与胃十二指肠溃疡发病呈正相关,而按时进餐与胃十二指肠溃疡发病呈负相关.cagA 阳性 Hp 感染与胃溃疡及十二指肠溃疡的发生具有密切的相关性(OR=16.61-84.49).④双因素分层分析中,吸烟、饮酒、生活不规律、精神因素、食酸辣食物等因素与 CagA 阳性Hp 感染之间作用相互独立,但在胃十二指肠溃疡病的发生中具有协同作用.结论消化性溃疡的发生是众多因素共同作用的结果,CagA 阳性 Hp 菌株感染是引起胃溃疡及十二指肠溃疡多因素病因学中一个非常重要的、危险的因素.重视 CagA 阳性 Hp 菌株的研究,对预防和治疗消化性溃疡具有重要的临床意义和社会意义.

新型MGB探针在沙眼衣原体实时PCR检测中的应用

为建立基于TaqMan MGB探针的沙眼衣原体DNA荧光定量PCR检测方法 ,探讨其临床应用价值 ,用PCR法扩增沙眼衣原体隐蔽质粒pLVG44 0 2 464～ 2 980nt段 ,并克隆入 pMD18 T载体用作参比模板 ,设计一对引物和一个TaqMan MGB探针 ,优化反应条件 ,建立沙眼衣原体DNA荧光定量PCR检测系统 ,并运用该系统同时应用连接酶链式反应 (LCR)法对临床标本进行检测 .结果显示所建立的沙眼衣原体DNA荧光定量PCR检测系统 ,最低检测限度为 1DNA拷贝每反应 ;在 10 0 ～ 10 9DNA拷贝每反应范围内 ,Ct 值 (每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数 )和DNA拷贝数呈线性关系 (r >0 990 ) ;对临床标本检测结果同LCR分析结果吻合率为 10 0 % .以上结果表明 ,所建立的基于TaqMan MGB探针的沙眼衣原体DNA荧光定量PCR检测系统具有敏感性高、特异性强和线性检测范围广等特点 。

胶体金免疫层析法检测抗幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

目的 建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌（ Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白 Ａ（ ＣａｇＡ） 抗体的胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ） ．方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记葡萄球菌Ａ 蛋白（ＳＰＡ） ，将重组的ＣａｇＡ 抗原划线固定于硝酸纤维素膜上，制成免疫层析检测试条． 血清中ＩｇＧ 与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条．结果 用ＧＩＣＡ 与ＥＬＩＳＡ 试剂盒对比检测了３２６ 份血清标本中抗ＣａｇＡ 抗体，本方法的特异性为９５－８ ％ ，敏感性为９７－３ ％ ，两法符合率为９６－６ ％ ．结论 ＧＩＣＡ 检测血清中的抗ＣａｇＡ 抗体特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值．

抗原肽冲击树突细胞治疗尖锐湿疣的组织病理学改变

目的 观察特异抗原肽激活的树突细胞免疫治疗 ,对人乳头瘤病毒感染致复发性生殖器尖锐湿疣的病理学作用。方法 对 79例复发 3次以上尖锐湿疣患者 ,按知情同意原则 ,予抗原肽冲击的树突细胞免疫治疗。治疗前后取疣体 ,分别行HE及免疫组化染色 ,镜下观察。结果 抗原肽冲击的树突细胞免疫治疗后 ,病灶处组织中大量免疫细胞浸润 ,空泡细胞减少 ,乳头瘤病毒阳性染色强度大大减低或转阴。结论 抗原肽冲击的树突细胞免疫对于改善人乳头瘤病毒反复感染的生殖器尖锐湿疣病变局部免疫状态 ,清除HPV感染有显著作用。

差异显示反转录PCR技术研究进展

分析一对细胞或组织在不同状态下基因表达的差异,已成为分子生物学研究领域的热点之一.近年来,用于识别差异表达基因的方法已发展起来多种.DDRTPCR是近年来较为广泛应用的一种技术.理论上,DDRTPCR技术比较简单,但实施起来却存在着假阳性率高,凝胶中单条cDNA带成分不均一,所获cDNA仅代表着mRNA3′UT区(约300bp)以及一些低拷贝数mRNA不能有效被呈现等问题.对DDRTPCR技术的改良也主要集中在解决这些问题方面.