问号状钩端螺旋体外膜单克隆抗体凝集反应特性的研究

作者用黄疸出血群赖型钩体外膜免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP 2/0骨髓癌细胞融合,筛选出三株抗问号状钩体外膜 McAb。显凝试验(MAT)表明 McAb的E4B11C9株与选用的黄疸出血群的13型钩体(占选用的100％)均发生凝集反应,而选用的其他18群钩体(占选用的100％)和非致病性Patoc Ⅰ株钩体,伊利尼细螺旋体均为MAT阴性,MAT效价低于1:25。从而证明 E4B11C9 McAb具有黄疸出血群钩体的群特异性。

板蓝根注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用

目的研究板蓝根注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用机制。方法用不同浓度的板蓝根注射液与人脐静脉血管内皮细胞(ECV-304)共同培养后,采用MTT法及形态学方法观察板蓝根注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用。结果不同浓度的板蓝根注射液对细胞生长具有抑制作用。结论板蓝根注射液对人脐静脉血管内皮细胞的增殖不但具有抑制作用,且与浓度呈正相关。

黄芪注射液对人脐静脉血管内皮细胞的增殖作用

目的 观察黄芪注射液对人血管内皮细胞的作用。方法 黄芪注射液与人脐静脉血管内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcellline ,ECV30 4 )共同培养后 ,采用MTT法及形态学方法观察黄芪注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用。结果人脐静脉血管内皮细胞在黄芪注射液浓度为 3 .12 5mg时产生增殖效应 ,增殖率为 3 .10 % ;浓度为 12 5mg时 ,增殖率为12 . 10 % (P <0 .0 5 ) ;浓度为 5 0mg时 ,增殖率为 4 8 .31% (P <0 . 0 1)。结论 黄芪注射液对人脐静脉血管内皮细胞无细胞毒性 ,有显著的增殖效应 ,且具有剂量依赖性 ,成正相关。

黄芩苷通过降低高脂血症大鼠肾小球核因子κB及可溶性单核细胞趋化蛋白表达抑制肾脏炎性反应

目的观察黄芩苷对高脂血症实验性大鼠肾小球核因子κB及外周血单核细胞趋化蛋白1表达的干预作用。方法实验组动物采用高脂混合饲料+维生素D3喂养方式,建立高脂血症大鼠模型,黄芩苷组在制备模型同时选用20 mg/(kg.d)的黄芩苷水溶液灌胃,对照组喂以标准饲料。4周末测定血脂,取肾小球组织比较病理形态学变化,采用双抗体夹心ELISA法定量分析血清单核细胞趋化蛋白1水平,SABC免疫组织化学法检测肾小球核因子κB表达。结果黄芩苷组大鼠血清中总胆固醇、低密度脂蛋白量减少,单核细胞趋化蛋白1分泌降低,与模型组相比黄芩苷组肾小球病理改变有所减轻,核因子κB表达下调明显,两者间差异有统计学意义(P<0.01)。结论黄芩苷具有降低低密度脂蛋白含量,降低核因子κB在肾小球细胞内激活,下调单核细胞趋化蛋白1表达水平,调节血脂紊乱及抗炎的作用。

香丹制剂对LPS诱导的血管内皮细胞NF-κΒ活性的影响

目的:探讨中药复方香丹注射液对血管内皮细胞核转录因子NF-κB及抑制因子IκB活性的干预作用。方法:采用MTT法及形态学方法观察香丹注射液对人脐静脉血管内皮细胞活性的影响,用Sandwich ELISA定量分析法和定量免疫细胞技术,检测NF-κB活性及胞浆内IκB含量。结果:有效剂量范围的香丹注射液能抑制血管内皮细胞的生长,拮抗NF-κB活性及抑制IκB降解(P<0.01)。结论:香丹注射液的抗炎作用可能与其拮抗NF-KBp65活化有关。

双黄连注射液对LPS诱导的人血管内皮细胞NF-кB活化的影响

目的检测中药复方双黄连注射液对细菌酯多糖(LPS)诱导的血管内皮细胞核转录因子-κB(NF-κB)活化的抑制效应。方法用双黄连注射液与人脐静脉血管内皮细胞株(ECV-304)共同培养后,采用MTT法观察双黄连注射液对人脐静脉血管内皮细胞生长的作用,用Sandwich ELISA法及定量免疫细胞技术,检测双黄连注射液对细菌LPS刺激后的血管内皮细胞胞浆(IкB)及核内NF-κB含量变化的影响。结果较高浓度的双黄连注射液对血管内皮细胞的生长有抑制作用,其抑制强度与其浓度呈正相关;血管内皮细胞在LPS刺激下,胞浆内IκB蛋白的含量显著降低,核内NF-κB p65含量显著增高;双黄连注射液预处理后能显著抑制IкB的降解及NF-κB的表达,在亚细胞生长抑制浓度条件下,其抑制效应有统计学意义。结论双黄连注射液可负相调节细菌LPS介导的血管内皮细胞核转录因子-κB的活化。

人抗菌肽HBD-2的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

制备人β-防御素2(HBD-2)多克隆抗体,以用于HBD-2蛋白水平表达的检测。提取人肠腺上皮细胞株Caco-2总RNA,设计引物,应用RT-PCR从其总RNA中扩增HBD-2成熟肽cDNA片段,以pGEX-1λT为载体,构建原核表达质粒pGEX-1λT-HBD-2。大肠杆菌裂解物经亲合层析纯化后获得分子量约30kDa的融合蛋白,将此融合蛋白免疫新西兰兔,并用正辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,ELISA法显示抗血清对HBD-2的效价为1∶12800,Western印迹显示抗血清可识别HBD-2。本实验结果证明应用重组融合小肽代替白蛋白或甲状腺-肽偶联免疫可获得其高效价的识别HBD-2的多克隆抗体,为今后从蛋白质水平研究HBD-2基因的诱导表达,包括组织分布和基因表达调控等研究打下了基础。

问号赖型钩体重组质粒pDJH_2 DNA 序列测定及其与其它细菌omp基因序列比较分析

对ｐＤＪＨ２片段ＤＮＡ进行了序列测定，结果：插入片段为１８１１个核苷酸；可读框２个：ＯＲＦ１，１－５６５ｂｐ；ＯＲＦ２（从最后一个密码倒算）１－６６２ｂｐ，计算机序列同源性或类似性匹配（ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）表明，ＯＲＦ１与ＯＲＦ２的核苷酸类似性为４９．３６％；ＯＲＦ１与Ｌ．ｋｉｒｓｃｈｎｅｒｉ（Ｌ．ａｌｓｔｏｎｉ）流感伤寒型ｏｍｐ核苷酸序列类似性为４９．２６％；ＯＲＦ２与Ｌ．ａｌｓｔｏｎｉ类似性为５１．５６％；ＯＲＦ１与其它细菌（包括螺旋体）ｏｍｐ核苷酸序列对准比较，序列类似性均在４３％以上。经查阅ＥＭＢＬＤＮＡ序列数据库未见类似序列。作者认为ｐＤＪＨ２的１．９ｋｂ插入ＤＮＡ片段（ＯＲＦ１与ＯＲＦ２）可能是具有保护作用的ｏｍｐ基因片段。

以λgt11作载体构建赖型钩体基因文库及其重组质粒pDL121的克隆和在E.coli表达的研究

为探讨赖型钩体抗原基因特点及其表达产物作为疫苗的可行性，采用问号赖型０１７株钩体经ＨｈａⅠ和ＡｌｕⅠ限制性内切核酸酶部分消化，行ＥｃｏＲⅠ限制酶切位点甲基化，加上ＥｃｏＲⅠ接头与去磷酸化的λｇｔ１１ＤＮＡ－ＥｃｏＲⅠ臂连接，体外包装后转染Ｅ．ｃｏｌｉＹ１０９０，建成含２．１×１０６重组子的问号赖型０１７株钩体基因文库。用抗赖型钩体兔血清从上述基因文库中筛选出一个强阳性克隆，λＤＬ１２，亚克隆入ｐＵＣ１８质粒，获重组质粒，ｐＤＬ１２１。ＥｃｏＲⅠ酶切证实该重组质粒含有１ｋｂ的外源插入片段。ｐＤＬ１２１经ＩＰＴＧ诱导后，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现２３ｋｄ特异条带。免疫印迹表明该蛋白带可被抗赖型钩体兔血清识别。

黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体外膜单克隆抗体免疫保护作用的探讨

作者采用黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体(钩体)外膜免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合等技术,获得单克隆抗体E4B7D5。亚类鉴定为IgG_1,凝集效价为1:25 600。被动免疫保护试验证明:将单克隆抗体E4B7D5腹水稀释100倍,给实验组豚鼠每只每天腹腔注射1ml,连续6天,能使豚鼠在接受同型017株钩体2ml(每毫升1×10~3条)的攻击后,存活率达80％,且存活20天的豚鼠处死解剖,未见任何病变;3个对照组的存活率分别为10％,20％和10％,该三组仅有4只存活20天,经处死解剖,其中 3只发现较多的陈旧性肺出血。作者认为,单克隆抗体E4B7D5对同型017株钩体有免疫保护作用。

应用人—鼠杂交瘤技术制备抗绿脓杆菌人单克隆抗体的初步研究

作者用绿脓杆菌多价菌苗免疫的人外周血淋巴细胞与SP2/0小鼠骨髓癌细胞融合,一次成功。细胞融合率为74％,抗体阳性率为19.7％。经3次克隆化后共获得2株能稳定地分泌抗绿脓杆菌人单克隆抗体的杂交瘤细胞株A_3和F_3。核型分析可见人与小鼠的染色体共存。亚类检定均属人IgG,免疫印迹实验证明它们可识别绿脓杆菌抗原分子量为43kd和36kd的特异组分。

双黄连注射液对血管内皮细胞NF-κB信号通道靶分子活性抑制作用的研究

目的:探讨中药复方双黄连注射液对血管内皮细胞作用. 方法:用双黄连注射液与人脐静脉血管内皮细胞株(ECV-304)共同培养后,采用MTT法及形态学法观察双黄连注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用及细胞脱氧酶的活性,用Sandwich ELISA法定量分析法和定量免疫细胞技术,检测NF-κB活性及胞浆内IκB含量.

钩端螺旋体CPL5x、BMD－3A、BMD－10基因转录表达的初步研究

经氯化锂—脲提取ＲＮＡ的方法提取钩端螺旋体（钧体）赖型０１７株的总ＲＮＡ，用生物素标记的钩体保护基因ＢＭＤ－３Ａ、ＢＭＤ－１０、问号钩体种特异性基因ＣＰＬ５ｘ及赖型钩体０１７株总ＤＮＡ作为探针，分别与所提取的总ＲＮＡ进行斑点杂交。结果显示：以上探针均出现了不同强弱的杂交信号，证明了ＢＭＤ－３Ａ、ＢＭＤ－１０、ＣＰＬ５ｘ三个特异性基因片段在０１７株钩体中得到了转录表达，提示其可能分别在钩体免疫保护及钩体种特异性鉴定中具有重要作用。

PCR配合Dig－AMPPD探针检测和分析钩端螺旋体基因

作者以１４份早期钩体病人血清进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），并以地高辛－硷性磷酸酶发光体（Ｄｉｇ－ＡＭＰＰＤ）同源探针行分子杂交，全部血清样品均获得阳性结果。此法敏感、特异、易行，可明显提高钩体病诊断水平。以扩增的基因片段与１６株Ｙａｓｕｄａ基因组钩体ＤＮＡ限制性谱行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析，与其中６株存在同源单拷贝序列，它们皆为我国主要流行和致病的优势菌型。用电脑核苷酸测定仪分析该基因的核苷酸序列、限制性位点和ＯＲＦ等并取得了重要资料。

钩端螺旋体疏水外膜蛋白(OmpL39)对豚鼠免疫功能影响的研究

目的研究钩体蛋白抗原的免疫保护力及其机制。检定纯化的强毒０１７钩体相对分子质量为３９×１０３的疏水外膜蛋白（ＯｍｐＬ３９）对豚鼠的免疫保护力。对免疫应答期豚鼠红细胞免疫功能的变化进行观察，以期对钩体基因疫苗的研制提供依据。方法用ＴＸ－１１４抽提钩体的不同蛋白成分，分三批对３６只豚鼠进行免疫保护力试验，检测红细胞免疫功能ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ、ＲＢＣ－ＩＣＲ、ＲＦＥＲ、ＲＦＩＲ的变化；用χ２检验、ｔ检验处理数据，进行分析。结果ＯｍｐＬ３９在豚鼠体内能产生高效价的显凝抗体（ＭＡＴ：１３２００）。ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ、ＲＢＣ－ＩＣＲ均明显升高（Ｐ＜０．０５）；红细胞免疫粘附因子促进率（ＲＦＥＲ）上升，抑制率（ＲＦＩＲ）下降，两者比值显著增大（Ｐ＜０．０５）。结论ＯｍｐＬ３９对豚鼠有有效的免疫保护力，在免疫应答期除增强体液免疫外。